【摘要】：研究背景復發(fā)性流產(chǎn)(recurrent pregnancy loss, RPL)是一種常見的產(chǎn)科疾病。習慣上將其定義為連續(xù)3次或3次以上20孕周以前自然發(fā)生的流產(chǎn),最近,美國生殖醫(yī)學學會將其定義為連續(xù)2次或2次以上自然發(fā)生的流產(chǎn)。它是一種病因復雜的疾病,遺傳和環(huán)境因素都能促進其的發(fā)生和發(fā)展。血栓形成被認為是RPL的主要病因之一,尤其在妊娠的前半周期。凝血相關基因的多態(tài)性被認為是遺傳性血栓形成的主要因素,并在妊娠的前或后半周期起作用,導致流產(chǎn)的發(fā)生。高同型半胱氨酸血癥是很多妊娠相關疾病的獨立危險因素。葉酸是同型半胱氨酸代謝過程中的輔助因子,葉酸的缺乏會導致血液中同型半胱氨酸水平的升高。異常的葉酸代謝可能會影響同型半胱氨酸代謝相關的酶的活性,從而導致血液當中同型半胱氨酸濃度的升高,最終導致流產(chǎn)的發(fā)生。因此,我們推測葉酸代謝相關基因的多態(tài)性也是RPL的危險因素。研究目的薈萃分析通過以往文獻研究凝血相關基因及葉酸代謝相關基因的單核苷酸多態(tài)性與RPL的相關性,關聯(lián)分析進一步通過實驗研究驗證凝血相關基因多態(tài)性與中國人群RPL的相關性及葉酸代謝相關基因多態(tài)性與中國人群早期RPL的相關性。研究方法查閱PubMed MEDLINE、EMBASE和CNKI數(shù)據(jù)庫鑒定到目前為止符合薈萃分析要求所有的英文和中文文獻。通過MI×1.7軟件,比較多態(tài)性位點eNOS intron 4 VNTR和Asp298Glu (rs1799983),MTHFR C677T (rs1801133)和A1298C(rs1801131)的基因型和等位基因與RPL的相關性。所有的統(tǒng)計分析,雙邊P值小于0.05被認為有統(tǒng)計學意義。病例-對照研究病例組包含了104例至少發(fā)生了連續(xù)2次20孕周以前流產(chǎn)的病人,對照組包含了184例與病例組種族、年齡匹配,具有正常的月經(jīng)周期,至少有一次正常自然妊娠,沒有流產(chǎn)及其他妊娠并發(fā)癥史的健康人。從外周血細胞中提取基因組DNA, 對6個凝血相關基因多態(tài)性位點SERPINC1 G786A (rs2227589), THBD C1418T (rs1042579), TFPI T-33C (rs8176592), Factor V G1628A (rs6020), Factor Ⅱ G19911A (rs3136516), ANXA5 C76T (rs113588187)和3個葉酸代謝相關基因多態(tài)性位點MTRR A66G (rs1801394), SLC19A1 G80A (rs1051266)和C696T (rs12659)通過Sequenom公司的MassARRAY IPLEX檢測平臺進行檢測。其他的2個葉酸代謝相關基因的多態(tài)性位點MTHFR C677T (rs1801133)和A 1298C(rs1801131)通過聚合酶鏈反應后經(jīng)直接測序法進行檢測。通過SPSS13.0版本,用卡方檢驗比較每個多態(tài)性位點的基因型及等位基因頻率在病例組和對照組中的差異。并對P值進行Bonferroni校正。研究結果一：薈萃分析1.結果顯示eNOS rs1799983的多態(tài)性與RPL相關(OR:1.67,95% CI:1.36-2.04, P0.001), eNOS intron 4 VNTR的多態(tài)性與RPL不存在相關性。分層分析顯示eNOS rs1799983的多態(tài)性與RPL的相關性僅存在于東亞人中(OR=1.88 (1.52-2.33), P0.001),在高加索人中并不存在此相關性。2. MTHFR rs1801133的多態(tài)性與RPL相關(OR:1.34,95% CI:1.13-1.58; P0.0001).經(jīng)分析未發(fā)現(xiàn)MTHFR rs1801131的多態(tài)性與RPL之間的相關性。分層分析后僅在東亞人中觀察到了MTHFR rs1801133的多態(tài)性與RPL相關性(OR=2.11(1.40-3.19),P0.001),在高加索人中未發(fā)現(xiàn)相關性。二:病例-對照研究1. THBD rs1042579的等位基因頻率在病例組和對照組中存在顯著性差異(OR=1.58,95%CI:1.05-2.39, P=0.027)。ESEfinder預測,發(fā)現(xiàn)rs1042579影響THBDmRNA的剪接過程,進而影響蛋白的表達。2.其他的5個凝血相關基因多態(tài)性位點SERPINC1 rs2227589, TFPI rs8176592, Factor V rs6020, Factor Ⅱrs3136516, ANXA5 rs113588187的基因型和等位基因的頻率在病例組和對照組中均無差異。3. MTHFR rs1801131多態(tài)性位點的基因型及等位基因的頻率在病例組和對照組有明顯的差異(AC/AA, AOR=2.58,95%CI:1.40-4.74, P=0.002; AC+CC/AA, AOR=2.53, 95%CI:1.40-4.57 P=0.002; C/A, OR=2.13,95%CI:1.27-3.57, P=0.004)。其他4個葉酸代謝相關基因的多態(tài)性位點的等位基因頻率在病例組和對照組中相似(MTHFR rs1801133 (T/C, P=0.246), SLC19A1 rs1051266 (A/G,P=0.165)和rs12659 (T/C, P=0.158), MTRR rs1801394 (G/A, P=0.241)。4.在MTHFR rs1801133-rs1801131組成的四個單倍型中,單倍型rs1801133C-rs1801131C與早期RPL相關。SLC19A1 rs1051266-rs12659組成的單倍型與早期RPL不相關。單倍型MTHFR rs1801133C-rs1801131A和SLC19A1 rs1051266G-rs12659C在病例組中的頻率低于在對照組中的頻率,但是P值大于0.05(P=0.093和P=0.084)。結論薈萃分析結果顯示eNOS rs1799983和MTHFR rs1801133與RPL相關性僅存在于東亞人中,在高加索人中不存在。病例-對照研究發(fā)現(xiàn)THBD rs1042579與RPL相關；MTHFR rs1801131與早期RPL相關。單倍型MTHFR rs1801133C-rs1801131C是早期RPL的危險因素；單倍型rs1801133C-rs1801131A和rs1051266G-rs12659C在病例組中的頻率低于對照組,可能是早期RPL的保護因素。這些結果需要在較大樣本的其他人群中進行重復實驗,同時THBD rs1042579對蛋白表達的影響需要相關的實驗進行驗證。
【圖文】：

圖１．１邋ＤＮＡ質量檢測結果逡逑瓊脂糖凝膠電泳結果顯示，基因組ＤＮＡ條帶清晰，長度大于２０化（見下圖）。逡逑圖１．２邋ＤＮＡ瓊脂糖凝膠電泳結果逡逑３．２各ＳＮＰｓ的平衡檢測逡逑分別對凝血相關的６個ＳＮＰ位點的基因型進行統(tǒng)計，，應用ＳＨＥｓｉｓ軟件，經(jīng)逡逑卡方檢驗分析６個ＳＮＰ位點的分型結果在ＲＰＬ病例組和正常對照姐中是否符合逡逑Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遺傳平衡定律。分析其是否具有總體代表性。經(jīng)檢測盈示各個ＳＮＰ逡逑位點在病例組和對照組中均符爸Ｈ－Ｗ遺傳定律，因此樣本能代表總體。實驗結逡逑果具有可信性。Ｈ－Ｗ檢測結果如下：逡逑表１．１：邐凝化相關基因的６個ＳＮＰ的Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅ巧檢測結果逡逑ＳＮＰ位點邐ＲＰＬ病例組（Ｐ值）邋對照組（Ｐ值）逡逑ＳＥＲＰＩＮＣ１邋ｒｓ２２邋巧巧邋９邐０．：１９邐０．９１逡逑ＴＨＢＤｒｓｌ０４２５７９邐０．３１邐０．９１逡逑ＴＦＰＩ邋ｒｓ８１７６巧２邐０．９６邐０．巧逡逑Ｆａｃｔｏｒ邋Ｖ邋ｒｓ６０２０邐日．３５邐０．９９逡逑Ｆａｃｔｏｒ凸邋ｒｓ３１３６５１６邐０．２８邐０．０６逡逑ＡＮＸＡ５邋ｒｓｌｌ３５８８１８７邐０７０邐０＾邐逡逑４０逡逑

＾邋／逡逑圖１．１邋ＤＮＡ質量檢測結果逡逑瓊脂糖凝膠電泳結果顯示，基因組ＤＮＡ條帶清晰，長度大于２０化（見下圖）。逡逑圖１．２邋ＤＮＡ瓊脂糖凝膠電泳結果逡逑３．２各ＳＮＰｓ的平衡檢測逡逑分別對凝血相關的６個ＳＮＰ位點的基因型進行統(tǒng)計，應用ＳＨＥｓｉｓ軟件，經(jīng)逡逑卡方檢驗分析６個ＳＮＰ位點的分型結果在ＲＰＬ病例組和正常對照姐中是否符合逡逑Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遺傳平衡定律。分析其是否具有總體代表性。經(jīng)檢測盈示各個ＳＮＰ逡逑位點在病例組和對照組中均符爸Ｈ－Ｗ遺傳定律，因此樣本能代表總體。實驗結逡逑果具有可信性。Ｈ－Ｗ檢測結果如下：逡逑表１．１：邐凝化相關基因的６個ＳＮＰ的Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅ巧檢測結果逡逑ＳＮＰ位點邐ＲＰＬ病例組（Ｐ值）邋對照組（Ｐ值）逡逑ＳＥＲＰＩＮＣ１邋ｒｓ２２邋巧巧邋９邐０．：１９邐０．９１逡逑ＴＨＢＤｒｓｌ０４２５７９邐０．３１邐０．９１逡逑ＴＦＰＩ邋ｒｓ８１７６巧２邐０．９６邐０．巧逡逑Ｆａｃｔｏｒ邋Ｖ邋ｒｓ６０２０邐日．３５邐０．９９逡逑Ｆａｃｔｏｒ凸邋ｒｓ３１３６５１６邐０．２８邐０．０６逡逑ＡＮＸＡ５
【學位授予單位】：復旦大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R714.21

【共引文獻】

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本文編號：2562720