【摘要】：子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，發(fā)病率在世界范圍內(nèi)有上升趨勢。無孕激素拮抗的高雌激素長期刺激是目前公認(rèn)的發(fā)病機制之一，但具體發(fā)病機制無確切的結(jié)論。無限增殖是腫瘤細(xì)胞主要特征之一，血管形成是腫瘤生長主要特點，兩者與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本課題前期研究表明，雌激素可以通過Akt激活NF-κB信號傳導(dǎo)通路促進子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子VEGF、bFGF、IL-8，從而促進子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的發(fā)展發(fā)生。為進一步闡明子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病機制，本研究使用兩種ER表達不同的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株，分別檢測雌激素刺激、受體抑制劑和通路受體抑制劑作用子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞后，細(xì)胞生長、增殖、凋亡等變化及細(xì)胞因子的表達變化對MAPK信號傳導(dǎo)通路的影響，進一步研究細(xì)胞因子產(chǎn)生與MAPK信號傳導(dǎo)通路的關(guān)系。 第一章雌激素誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞產(chǎn)生VEGF、bFGF因子激活MAPK通路 目的探討雌激素受體（ER）調(diào)控雌二醇誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生成血管因子激活有絲分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號傳導(dǎo)通路。方法采用不同濃度雌二醇作用子宮內(nèi)膜癌Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞，檢測ERK1/2蛋白磷酸化水平；再分別以10-6mol/L E（2E2組）、VEGFR受體抑制劑BIBF1120（BIBF1120組）、FGFR受體抑劑Ponatinib（Ponatinib組）和特異性MAPK通路阻斷劑U0126（U0126組）作用細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR及Western blot分別檢測細(xì)胞中血管因子及MAPK通路中mRNA及蛋白表達情況。結(jié)果10-6mol/LE2對Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞的ERK1/2蛋白磷酸化最明顯(P0.05)；E2組Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞中VEGF mRNA及蛋白表達高于對照組(P0.05)，Ishikawa、HEC-1A細(xì)胞中E2組RAF、MEK1、ERK1/2mRNA及蛋白顯著高于對照組(P0.05)；BIBF1120組、U0126組Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞中MEK1、ERK1/2基因及蛋白表達低于E2組(P0.05)。結(jié)論E2通過誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞產(chǎn)生VEGF、bFGF細(xì)胞因子激活MAPK信號傳導(dǎo)通路。 第二章雌激素誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞產(chǎn)生VEGF、bFGF因子激活MAPK通路細(xì)胞功能實驗 目的探討雌激素受體（ER）調(diào)控雌二醇誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生成血管因子激活有絲分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號傳導(dǎo)通路。方法以10-6mol/L E2（E2組）、VEGFR受體抑制劑BIBF1120（BIBF1120組）、FGFR受體抑劑Ponatini（bPonatinib組）和特異性MAPK通路阻斷劑U012（6U0126組）作用Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞，然后進行細(xì)胞生長曲線、集落形成實驗、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和凋亡、細(xì)胞遷移實驗。結(jié)果10-6mol/LE2作用Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞的后，，Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞E2組增殖數(shù)增多、細(xì)胞周期加快、凋亡減少、細(xì)胞遷移數(shù)增多（P均0.05），BIBF1120組、Ponatinib組和U0126組Ishikawa增殖數(shù)減少、細(xì)胞周期減慢、凋亡增加、細(xì)胞遷移數(shù)減少（P均0.05）。結(jié)論E2可以增強子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖、遷移能力與VEGF、bFGF有關(guān)，由MAPK信號傳遞通路介導(dǎo)的。
【圖文】：

圖 1-1 不同濃度 E2激活 Ishikawa 和 HEC-1A 細(xì)胞 p-ERK1/2 活化情況ig 1-1 Dose-dependent activation of Erk1/2 by estrogen.Cells were treated with different concentrationsmol/L) of estrogen as indicated for 30 min in Ishikawa and HEC-1A. The relative ratio of phosphorylatedrk1/2: total Erk1/2 are shown in the bar diagram. *p < 0.05 vs. control in Ishikawa; **p < 0.05 vs.E2inEC-1A.(A) Expression of p-Erk1/2, Erk and Erk1/2 kinase activity in Ishikawa; (B) Expression of-Erk1/2, Erk and Erk1/2 kinase activity in HEC-1A;(C) bar diagram of the ratios of p-Erk:total Erk in thewo endometrial cancer cells..2 MTT 測 BIBF1120、Ponatinib 對子宮內(nèi)膜癌 Ishikawa 和 HEC-1A 細(xì)胞C50 影響分別應(yīng)用不同濃度 100nmol/L，101nmol/L，102nmol/L，103nmol/L，04nmol/L，105nmol/L BIBF1120、Ponatinib 培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌 Ishikawa 和EC-1A 細(xì)胞 24h。MTT 檢測各組細(xì)胞增殖結(jié)果提示，隨著 BIBF1120 劑量

Ishikawa 和 HEC-1A 細(xì)胞增殖率下降 IC50 為 3.16μΜ，HEC-1A 細(xì)胞 IC50 為 1.95μΜ，表明kawa 和 HEC-1A 細(xì)胞增殖，且呈劑量依賴性，HE胞敏感(圖 1-3，表 1-6)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.33

【參考文獻】

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本文編號：2554194