【摘要】：目的探討產(chǎn)前應(yīng)激是否進(jìn)一步加劇慢性應(yīng)激所致的6月齡雄性APPswe/PS1d E9子鼠學(xué)習(xí)記憶損傷及其可能機(jī)制。方法以APPswe/PS1d E9雙轉(zhuǎn)基因小鼠為研究對(duì)象,實(shí)驗(yàn)分為產(chǎn)前慢性應(yīng)激-子代慢性應(yīng)激組(TT組)、產(chǎn)前慢性應(yīng)激-子代正常處理組(TC組)、產(chǎn)前正常處理-子代慢性應(yīng)激組(CT組)和產(chǎn)前正常處理-子代正常處理組(CC組)。應(yīng)用Morris水迷宮檢測(cè)子代小鼠的空間學(xué)習(xí)、記憶能力,通過HE染色觀察小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元的病理組織形態(tài),采用Congo red染色檢查小鼠腦組織的淀粉樣斑塊,采用Western blot法檢測(cè)小鼠海馬組織淀粉樣前體蛋白(APP)、淀粉樣前體蛋白β位點(diǎn)分裂酶1(BACE1)和β-淀粉樣蛋白1-42(Aβ42)的表達(dá)量,運(yùn)用ELISA法檢測(cè)血清皮質(zhì)酮含量。結(jié)果與CC組相比,CT組小鼠的逃避潛伏期和游泳距離延長(zhǎng)(P0.05),平臺(tái)象限游泳時(shí)間和穿越平臺(tái)次數(shù)減少(P0.05);海馬CA3區(qū)損傷的神經(jīng)元數(shù)目明顯增加(P0.05),排列疏松紊亂,脫失現(xiàn)象明顯,核固縮、濃染;腦組織淀粉樣斑塊數(shù)目增多;海馬組織APP、BACE1和Aβ42的表達(dá)量升高(P0.05);血清皮質(zhì)酮濃度升高(P0.05)。與CT組相比,TT組小鼠的逃避潛伏期和游泳距離進(jìn)一步延長(zhǎng)(P0.05),平臺(tái)象限游泳時(shí)間和穿越平臺(tái)次數(shù)進(jìn)一步減少(P0.05);腦組織淀粉樣斑塊和海馬CA3區(qū)損傷的神經(jīng)元數(shù)目進(jìn)一步增加(P0.05);海馬組織APP、BACE1和Aβ42的表達(dá)量和血清皮質(zhì)酮濃度進(jìn)一步升高(P0.05)。結(jié)論產(chǎn)前應(yīng)激進(jìn)一步加劇慢性應(yīng)激所致的子鼠學(xué)習(xí)記憶損傷,其機(jī)制可能與其升高小鼠血清皮質(zhì)酮水平,促進(jìn)APP和BACE1表達(dá),進(jìn)而增加Aβ42的生成,最終引起海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷有關(guān)。
【圖文】：

致的雄性子代小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力損傷及其可能的機(jī)制。1材料與方法1．1主要試劑和儀器BACE1、Aβ42單克隆抗體(美國(guó)Abcam公司);β-actin單克隆抗體(德國(guó)San-taCruz公司);APP單克隆抗體、山羊抗鼠二抗、山羊抗兔二抗、動(dòng)物基因組DNA抽提試劑盒(上海生物工程公司);Westernblot法化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒(美國(guó)ThermoScientific公司);電泳儀、凝膠成像分析系統(tǒng)(北京Tanon公司);小鼠血清皮質(zhì)酮酶聯(lián)免疫試劑盒(武漢華美公司);Morris水迷宮圖像采集及分析系統(tǒng)(北京醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所)。1．2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組實(shí)驗(yàn)的時(shí)間軸見圖1。SPF級(jí)Tg(APPswe，PSEN1dE9)雙轉(zhuǎn)基因雄鼠10只及普通C57bl/6雌鼠60只，均為10周齡，30～40g，購(gòu)自南京大學(xué)模式動(dòng)物研究中心。小鼠飼養(yǎng)遵循安徽醫(yī)科大學(xué)生物醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的要求。室溫(23±1)℃，相對(duì)濕度50%，自由攝食飲水;正常飼養(yǎng)7d，使其適應(yīng)周圍環(huán)境。于晚20∶00點(diǎn)雌雄2∶1合籠，次日早上08∶00檢查陰栓，查到陰栓者取出單籠飼養(yǎng)，記為孕第1天(G1)，并將孕鼠隨機(jī)分為產(chǎn)前慢性應(yīng)激組和產(chǎn)前正常處理組。產(chǎn)前慢性應(yīng)激組正常飼養(yǎng)至孕第7天(G7)，開始施加不可預(yù)測(cè)的慢性復(fù)合應(yīng)激:夾尾(距尾尖2cm處，5min)、束縛(50ml帶多個(gè)小孔的離心管，2h)、冰水游泳(4～6℃，5min)、溫水游泳(28～35℃，15min)、夜相給亮(12h)、禁水(24h)、禁食(24h)等7種應(yīng)激方式。每天隨機(jī)采用1種方法對(duì)小鼠進(jìn)行應(yīng)激刺激，每天2次(最后3種應(yīng)激方式除外)，持續(xù)至孕第20天(G20)。產(chǎn)前正常處理組小鼠不接受應(yīng)激，正常飼養(yǎng)。仔鼠于產(chǎn)后21d(P21)斷奶。雄性仔鼠于產(chǎn)后25d(P25)剪取尾尖(＜5mm)組織，，采用PCＲ法進(jìn)行基因鑒定［8］。雄性APPswe/PS1dE9子代小鼠分籠(2只/籠)飼養(yǎng)。產(chǎn)后180d(P180)將子代小鼠分為產(chǎn)前慢?

CA3區(qū)神經(jīng)元總數(shù)和異常神經(jīng)元數(shù)目，結(jié)果顯示與CT組(101.33±7.62)、TC組(113.2±8.25)和CC組(116.2±8.74)比較，TT組(96.83±8.16)小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元總數(shù)明顯減少;與CT組(17.50±2.69)、TC組(8.67±1.63)、CC組(7.33±1.03)比較，TT組(21.50±2.07)核固縮、濃染等退行性改變的異常神經(jīng)元數(shù)明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。圖3產(chǎn)前慢性應(yīng)激加劇6月齡雄性子代小鼠因慢性應(yīng)激所致的海馬CA3區(qū)神經(jīng)元損傷HE×400A:CC組;B:CT組;C:TC組;D:TT組2．3產(chǎn)前慢性應(yīng)激進(jìn)一步加劇子代慢性應(yīng)激所致的子鼠淀粉樣斑塊沉積4組小鼠的前額葉皮質(zhì)均有觀察到明顯的橘紅色Aβ42沉積(箭頭所指)，形狀不規(guī)則，呈斑塊狀，大小不一。TT組小鼠的前額葉皮質(zhì)的淀粉樣斑塊數(shù)量明顯多于CT組、TC組和CC組。見圖4。然而，4組小鼠的海馬組織中淀粉樣斑塊數(shù)量稀少，只在CT組和TT組的個(gè)別切片上觀察到。見圖5。2．4產(chǎn)前慢性應(yīng)激進(jìn)一步加劇子代慢性應(yīng)激所致的子鼠海馬APP、BACE1和Aβ42表達(dá)子代慢性應(yīng)激可增加海馬組織APP、BACE1和Aβ42的表達(dá)量(F=173.959、114.965、248.272，P＜0.05)，產(chǎn)前慢性應(yīng)激也可增加海馬組織APP、BACE1和Aβ42的表達(dá)量(F=85.095、17.146、137.834，P＜0.05)，且對(duì)于APP和Aβ42產(chǎn)前慢性應(yīng)激和子代慢性應(yīng)激存在交互效應(yīng)(FAPP=12.829，F(xiàn)Aβ42=16.424，P＜0.05)。與CT組相比，TT組小鼠海馬組織的APP和Aβ42更多表達(dá)(P＜0.05);至于海馬組織中BACE1的表達(dá)量，也有增多的趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.055)。見圖6。圖4產(chǎn)前慢性應(yīng)激加劇6月齡雄性子代小鼠因慢性應(yīng)激所致的前額葉皮質(zhì)淀粉樣斑塊沉積Congored×100A:CC組;B:CT組;C:TC組;D:TT組圖5產(chǎn)前慢性應(yīng)激加劇6月齡雄性子
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;
【基金】：安徽省自然科學(xué)基金(編號(hào):1208085MH145) 安徽高校省級(jí)自然科學(xué)研究項(xiàng)目(編號(hào):KJ2011Z161)
【分類號(hào)】：R714

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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5 閔U

本文編號(hào)：2551366