【摘要】：目的：1.檢驗(yàn)miRNA-27a在正常妊娠與復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)絨毛組織中的差異表達(dá)。驗(yàn)證基因芯片檢測(cè)結(jié)果。 2.在HTR-8滋養(yǎng)細(xì)胞中過(guò)表達(dá)與抑制表達(dá)miRNA-27a,檢測(cè)miRNA-27a對(duì)瘦素表達(dá)的影響,探討miRNA-27a與瘦素之間的調(diào)控關(guān)系。 3.研究miRNA-27a對(duì)人正常滋養(yǎng)細(xì)胞(HTR-8)的凋亡的影響,探討miRNA-27a在復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)中的作用,為復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的研究提供理論依據(jù)。 方法：1.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR (Real-time RT-PCR)方法檢測(cè)miRNA-27a在15例復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者(實(shí)驗(yàn)組)及15例正常妊娠絨毛組織(對(duì)照組)中的表達(dá)水平。 2.采用miRNA過(guò)表達(dá)與抑制表達(dá)技術(shù),在人滋養(yǎng)細(xì)胞系(HTR-8)中過(guò)表達(dá)與抑制表達(dá)miRNA-27a, RT-PCR技術(shù)檢測(cè)在人滋養(yǎng)細(xì)胞系中miRNA-27a與瘦素mRNA的表達(dá)水平,Western-blot技術(shù)檢測(cè)瘦素蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。明確miRNA-27a與瘦素之間在mRNA和蛋白質(zhì)水平的調(diào)控關(guān)系。 3.在HTR-8細(xì)胞中過(guò)表達(dá)與抑制表達(dá)miRNA-27a,采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)HTR-8細(xì)胞凋亡的變化。 結(jié)果：1.對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組絨毛組織中均有miRNA-27a表達(dá),其表達(dá)量分別為0.5094±0.1926和1.2213±0.2455,實(shí)驗(yàn)組絨毛組織中miRNA-27a表達(dá)高于對(duì)照組,P0.001,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與文獻(xiàn)報(bào)道基因芯片檢測(cè)結(jié)果相符。 2.在人滋養(yǎng)細(xì)胞系(HTR-8)中,過(guò)表達(dá)miRNA-27a后,RT-PCR結(jié)果顯示miRNA-27a的表達(dá)增加(P0.05),而Leptin mRNA的表達(dá)降低(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；抑制miRNA-27a的表達(dá)后, RT-PCR結(jié)果顯示miRNA-27a的表達(dá)降低(P0.05),而Leptin mRNA的表達(dá)增加(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)miRNA-27a后,Leptin蛋白質(zhì)的表達(dá)降低(P0.05),抑制miRNA-27a的表達(dá)后,Leptin蛋白質(zhì)的表達(dá)增加(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明miRNA-27a與Leptin在mRNA及蛋白質(zhì)水平存在負(fù)性調(diào)控關(guān)系。 3.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)miRNA-27a后,細(xì)胞凋亡率增加(P0.05)；抑制miRNA-27a的表達(dá)后,細(xì)胞凋亡率降低(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：1.在復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)組絨毛組織中miRNA-27a表達(dá)增高,提示miRNA-27a高表達(dá)與復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的發(fā)生有關(guān)。 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示瘦素為miRNA-27a的作用靶點(diǎn),而在mRNA和蛋白質(zhì)水平miRNA-27a均對(duì)瘦素有著明顯的負(fù)性調(diào)控作用。 3.過(guò)表達(dá)miRNA-27a可以增加HTR-8細(xì)胞的凋亡率,因此在復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)中高表達(dá)的miRNA-27a可能通過(guò)促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡從而參與了復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的發(fā)病過(guò)程。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R714.21

【參考文獻(xiàn)】

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1 許愛(ài)霞;汪雁;徐良全;鄭莉萍;黃健;鄭月慧;;卵泡發(fā)育中相關(guān)基因的調(diào)控[J];生殖與避孕;2008年12期

2 朱捫達(dá),陳名道;瘦素與妊娠[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2000年07期

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本文編號(hào)：2540764