【摘要】：目的研究子癇前期相關(guān)微小RNA-18a(miR-18a)對(duì)人正常滋養(yǎng)細(xì)胞(HTR8)中雌激素受體1(ER1)的調(diào)控作用及對(duì)HTR8細(xì)胞周期及凋亡的影響。方法使用miR-18a前體分子(pre-miR-18a)分組轉(zhuǎn)染HTR8細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為pre-miRNA陰性對(duì)照組、miR-18a過(guò)表達(dá)組、miR-18a抑制組。反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中miR-18a mRNA的表達(dá)水平;RT-PCR及Western blot法分別檢測(cè)各組細(xì)胞中miR-18a的靶基因ER1在mRNA和蛋白水平的表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞周期及凋亡的變化。結(jié)果與pre-miRNA陰性對(duì)照組相比,miR-18a過(guò)表達(dá)和miR-18a抑制均獲得明顯效果;抑制miR-18a表達(dá)后,ER1 mRNA和蛋白水平增加;過(guò)表達(dá)和抑制miR-18a對(duì)HTR8細(xì)胞周期無(wú)明顯影響;抑制miR-18a可增加HTR8細(xì)胞凋亡。結(jié)論抑制miR-18a的水平增加HTR8人正常滋養(yǎng)細(xì)胞雌激素受體1的表達(dá)并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

混勻，避光室溫反應(yīng)15min;300目濾膜濾去細(xì)胞團(tuán)塊后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。1．2．5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS19．0軟件。計(jì)量資料以x±s表示，兩組組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組組間采用單因素方差分析，P＜0．05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞增殖周期檢測(cè)結(jié)果采用MulticycleforWindows32-bit統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析;細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果采用Expo32ADCAnalysis系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2結(jié)果2．1HTＲ8細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率使用熒光顯微鏡觀察FAM標(biāo)記的陰性對(duì)照來(lái)監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染效率，細(xì)胞核內(nèi)有綠色熒光代表轉(zhuǎn)染成功(圖1)，HTＲ8細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率達(dá)80%以上。圖1HTＲ8細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率(熒光顯微鏡，×200)2．2在HTＲ8細(xì)胞調(diào)控miＲ-18a的表達(dá)水平采用相應(yīng)miＲNA轉(zhuǎn)染后，對(duì)照組、miＲ-18a過(guò)表達(dá)組、miＲ-18a抑制組，HTＲ8細(xì)胞的miＲ-18a水平分別為0．407±0．019、0．880±0．060、0．160±0．014(圖2)。與對(duì)照組相比，相應(yīng)處理可分別上調(diào)或下調(diào)HTＲ8細(xì)胞miＲ-18a水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05，圖2)。A:反轉(zhuǎn)錄PCＲ檢測(cè)HTＲ8細(xì)胞的miＲ-18a水平;B:HTＲ8細(xì)胞的miＲ-18a水平的半定量分析．1:miＲ-18a過(guò)表達(dá)組;2:陰性對(duì)照組;3:miＲ-18a抑制組．a(chǎn)P＜0．05vs2．圖2反轉(zhuǎn)錄PCＲ檢測(cè)HTＲ8細(xì)胞的miＲ-18a水平1104細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志(ChinJCellMolImmunol)2017，33(8)

50±0．009。與對(duì)照組相比，，miＲ-18a過(guò)表達(dá)組EＲ1蛋白水平降低、miＲ-18a抑制組EＲ1蛋白水平增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05，圖3)。2．4下調(diào)miＲ-18a后增加HTＲ8細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染miＲ-18a后各組間HTＲ8細(xì)胞周期變化。結(jié)果顯示miＲ-18a過(guò)表達(dá)組、miＲ-18a過(guò)表達(dá)組FAM對(duì)照、miＲ-18a抑制物組、miＲ-18a抑制物FAM對(duì)照組、陰性對(duì)照組G2/M+S期細(xì)胞比例依次為(66．4±1．5)%、(62．2±3．0)%、(65．7±2．2)%、(64．2±3．1)%、(65．2±2．4)%，G2/M+S期細(xì)胞比例未見(jiàn)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05，圖4)。與對(duì)照組相比，抑制miＲ-18a表達(dá)后，HTＲ8細(xì)胞凋亡明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05，圖4)。A:反轉(zhuǎn)錄PCＲ檢測(cè)HTＲ8細(xì)胞EＲ1mＲNA水平;B:HTＲ8細(xì)胞EＲ1mＲNA水平的半定量分析;C:Westernblot法檢測(cè)HTＲ8細(xì)胞EＲ1蛋白水平;B:HTＲ8細(xì)胞EＲ1蛋白水平的半定量分析．1:miＲ-18a過(guò)表達(dá)組;2:陰性對(duì)照組;3:miＲ-18a抑制組．a(chǎn)P＜0．05vs2．圖3HTＲ8細(xì)胞EＲ1水平A:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HTＲ8細(xì)胞周期;B:HTＲ8細(xì)胞周期的半定量分析;C:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HTＲ8細(xì)胞凋亡情況;D:HTＲ8細(xì)胞凋亡的半定量分析．1:miＲ-18a過(guò)表達(dá)組;2:miＲ-18a過(guò)表達(dá)組FAM對(duì)照;3:miＲ-18a抑制物組;4:miＲ-18a抑制物FAM對(duì)照組;5:陰性對(duì)照組．a(chǎn)P＜0．05vs5．圖4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后HTＲ8細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡3討論P(yáng)E具有妊娠期特發(fā)、母兒并發(fā)癥嚴(yán)重以及病死率較高等特點(diǎn)［12］，屬于胎盤(pán)源性疾病目前已得到較一致認(rèn)可［13］。多因素參與的貫穿于胚胎著床期-胎盤(pán)形成期-晚孕期的階段性機(jī)體生理病理變化最終導(dǎo)致PE的發(fā)生［14］。其中滋養(yǎng)細(xì)胞增殖能力下降、細(xì)胞凋亡增加，致使細(xì)胞浸潤(rùn)能力不足，子宮螺旋動(dòng)脈重塑障礙及胎盤(pán)淺著床，是PE發(fā)
【作者單位】： 西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院;第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心;
【基金】：陜西省科技計(jì)劃項(xiàng)目(S2016YFSF0367)
【分類號(hào)】：R714.244

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本文編號(hào)：2521653