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BNIP3介導(dǎo)的線粒體自噬異常在子癇前期發(fā)病中的作用

發(fā)布時(shí)間:2019-07-13 18:45
【摘要】:目的:探討胎盤組織中Bcl-2家族的前凋亡因子BCL2腺病毒E1B19 k Da相互作用蛋白3(BCL2/adenovirus E1B 19 k Da protein-interacting protein 3,BNIP3)的表達(dá)及其介導(dǎo)的線粒體自噬在子癇前期(Preeclampsia,PE)胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞功能異常中的作用。方法:收集2015年1月至2015年8月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科分娩的11例PE和12例正常剖宮產(chǎn)的胎盤組織。應(yīng)用Western blot(WB)方法檢測BNIP3和Cleaved-caspase3在對照和PE胎盤中的表達(dá)差異;通過氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Gas chromatograph-mass spectrometer,GC-MS)檢測胎盤線粒體的代謝活動情況;熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測胎盤總的ATP含量;以早孕人絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞株(Human transformed primary extravillous trophoblast cell line,HTR8/SVneo)通過缺氧/復(fù)氧(Hypoxia/reoxygenation,H/R)構(gòu)建PE細(xì)胞模型;構(gòu)建BNIP3小干擾RNA。Transwellassay檢測敲低BNIP3對HTR8/SVneo細(xì)胞的侵襲力的影響;H/R處理兩組細(xì)胞,通過DCFH-DA檢測細(xì)胞ROS(Reactive oxygen species)生成,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡。結(jié)果:與正常胎盤相比,在PE胎盤組織中BNIP3表達(dá)顯著降低(P0.05),而凋亡蛋白cleaved-caspase3顯著增加(P0.05);GC-MS結(jié)果顯示PE組胎盤處線粒體的代謝活動較正常組顯著被抑制(P0.05);熒光素酶報(bào)告基因顯示子癇前期胎盤總ATP含量著下降(P0.01);敲低BNIP3顯著抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力(P0.01);在PE細(xì)胞模型中,BNIP3敲低組較對照組的ROS產(chǎn)量顯著增加,且細(xì)胞的凋亡增加(P0.05)。結(jié)論:BNIP3介導(dǎo)的線粒體自噬不足引起受損線粒體堆積導(dǎo)致代謝異常和ROS清除障礙,引起滋養(yǎng)細(xì)胞的功能異常,參與PE的發(fā)病。
文內(nèi)圖片:Westernblot檢測BNIP3和Cleaved-caspase3在晚孕期正常胎盤和PE胎盤中的表達(dá)
圖片說明: 圖 1 Western blot 檢測 BNIP3 和 Cleaved-caspase3 在晚孕期正常胎盤和 PE 胎盤中的表達(dá)Fig.1 The expression of BNIP3 and cleaved-caspase3 in placentas from normal and PEpatients.
文內(nèi)圖片:胎盤ATP含量檢測和偏最小二乘法判別分析
圖片說明:胎盤ATP含量檢測和偏最小二乘法判別分析
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:R714.244

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本文編號:2514202


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