發(fā)布時(shí)間：2019-06-24 11:34

【摘要】：多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome, PCOS)是以內(nèi)分泌紊亂為主、多種代謝異常共同導(dǎo)致的一種女性內(nèi)分泌疾病,該疾病會(huì)使女性出現(xiàn)月經(jīng)不調(diào)、排卵障礙等內(nèi)分泌失調(diào)的現(xiàn)象,導(dǎo)致不孕。PCOS患者雙側(cè)卵巢雖有大量竇卵泡,但是不能周期性形成成熟卵泡,目前雖有一些的病理研究,但其病理機(jī)制尚不十分清楚。此前對(duì)PCOS不排卵的病理基礎(chǔ)的研究顯示,PCOS可能是由原發(fā)性、內(nèi)在性卵泡生長(zhǎng)異常所導(dǎo)致的。 高雄激素在PCOS的發(fā)病過(guò)程中起到非常重要的作用。卵巢中的雄激素過(guò)高抑制卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育,進(jìn)而阻止優(yōu)勢(shì)卵泡的成熟,最終導(dǎo)致卵泡出現(xiàn)異常閉鎖,致使卵巢呈多囊性改變(PCO)；與此同時(shí),雄激素增多造成下丘腦-垂體-促性腺激素軸功能紊亂,促進(jìn)胰島素的持續(xù)增高,從而刺激PCOS患者黃體生成激素(LH)增高,較高的LH又促進(jìn)卵巢和腎上腺分泌雄激素,如此形成持續(xù)無(wú)排卵的惡性循環(huán)。科學(xué)研究表明,卵丘顆粒細(xì)胞的凋亡調(diào)控失常與內(nèi)在性的卵泡異常發(fā)育可能存在一定的聯(lián)系。通過(guò)對(duì)PCOS患者的研究發(fā)現(xiàn),卵丘顆粒細(xì)胞內(nèi)部存在著抗凋亡與促凋亡兩種狀態(tài)之間的失衡,這一現(xiàn)象與PCOS患者血清的雄激素水平過(guò)高有密切的關(guān)系。小鼠顆粒細(xì)胞凋亡可由高雄激素血癥誘導(dǎo),研究發(fā)現(xiàn),睪酮可誘導(dǎo)小鼠顆粒細(xì)胞凋亡,且活性Caspase-3表達(dá)增加,而在由雄激素過(guò)高誘導(dǎo)的多囊卵巢綜合征大鼠模型實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)大鼠卵丘顆粒細(xì)胞的凋亡率顯著增加。最新研究成果顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)參與凋亡途徑的啟動(dòng)。為恢復(fù)細(xì)胞功能,生物體通過(guò)激活未折疊蛋白反應(yīng)(UPR)修復(fù)ERS引起的細(xì)胞損傷,如果造成損傷嚴(yán)重,不能及時(shí)恢復(fù),ERS將引起細(xì)胞的凋亡。 大量研究證明,卵丘顆粒細(xì)胞的凋亡情況,直接影響了相應(yīng)卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)、發(fā)育、成熟乃至后期的受精以及相應(yīng)胚胎發(fā)育的質(zhì)量。這表明卵母細(xì)胞與卵丘顆粒細(xì)胞之間,存在某些廣泛而復(fù)雜的黏著機(jī)制。而在這種機(jī)制中,包括間隙連接在內(nèi)的細(xì)胞間相互作用,在卵母細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。Lee等在早期研究中,報(bào)道了卵丘顆粒細(xì)胞凋亡與PCOS患者的年齡、受精率、獲卵數(shù)目和IVF的結(jié)局有關(guān),因而提出了,利用卵丘顆粒細(xì)胞的凋亡狀態(tài)預(yù)測(cè)IVF結(jié)局的結(jié)論。曹義娟等將人卵子進(jìn)行體外培養(yǎng),研究人卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率與卵母細(xì)胞發(fā)育潛能兩者之間的關(guān)系,研究結(jié)果表明,卵母細(xì)胞成熟度越低,顆粒細(xì)胞凋亡率反而越高；且隨著卵母細(xì)胞發(fā)育潛能和評(píng)分的下降,顆粒細(xì)胞凋亡率隨之升高。國(guó)內(nèi)研究提示卵子的發(fā)育潛能與卵丘顆粒細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)緊密相關(guān)；卵丘顆粒細(xì)胞的凋亡影響卵子的成熟、受精和卵裂,卵丘顆粒細(xì)胞凋亡與卵子受精、胚胎質(zhì)量及妊娠結(jié)局密切相關(guān)。 綜上所述,本課題在前人研究的理論與實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,重點(diǎn)研究了PCOS患者卵丘顆粒細(xì)胞凋亡與多囊卵巢綜合征發(fā)病機(jī)制之間的關(guān)系,同時(shí)就多囊卵巢綜合征患者血清游離睪酮指數(shù)水平與卵丘顆粒細(xì)胞凋亡關(guān)系進(jìn)行了研究,通過(guò)降低雄激素水平,研究其對(duì)多囊卵巢綜合征患者卵丘顆粒細(xì)胞凋亡的影響。 目的： 1.明確血清游離睪酮指數(shù)水平異常的PCOS患者、降雄治療后血清游離睪酮指數(shù)水平正常的PCOS患者、正常卵巢反應(yīng)性不孕患者卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率,探討游離睪酮指數(shù)水平在高雄激素血癥、多囊卵巢綜合征(PCOS)不孕患者診斷的過(guò)程中價(jià)值。 2.檢測(cè)凋亡調(diào)控蛋白Caspase3、Bel-2和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白CHOP的表達(dá)。 3.研究受精后胚胎質(zhì)量及其相應(yīng)卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率的相關(guān)性,了解卵丘顆粒細(xì)胞凋亡對(duì)PCOS卵子發(fā)育潛能的影響,指導(dǎo)PCOS的治療。 方法： 1.選取南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院生殖中心首次進(jìn)行IVF-ET治療的不孕患者60例。通過(guò)篩選,將滿足條件的患者分為3組：(1)試驗(yàn)組：降雄治療(口服達(dá)英-35)后游離睪酮指數(shù)水平正常的PCOS患者；(2)對(duì)照組：游離睪酮指數(shù)升高的PCOS患者(不采取口服達(dá)英-35降雄)；(3)正常對(duì)照組：正常卵巢反應(yīng)不孕患者。所有患者,經(jīng)超促排卵治療后,取卵及拾卵,進(jìn)行拆卵及卵子質(zhì)量評(píng)估,之后進(jìn)行體外受精。 2.采用黃體中期長(zhǎng)方案,在前一個(gè)月經(jīng)周期的黃體中期開始使用GnRH-a,發(fā)揮降調(diào)節(jié)作用后,在垂體降調(diào)節(jié)基礎(chǔ)上啟動(dòng)Gn,陰道B超監(jiān)測(cè)卵泡數(shù)目和卵泡直徑,當(dāng)2個(gè)以上卵泡直徑≥18mm時(shí),注射人絨毛膜促性腺激素(HCG)5000-10000U促使排卵。受精率為受精數(shù)與獲卵數(shù)之比。 3.受精后,行以下指標(biāo)檢測(cè)與統(tǒng)計(jì)：年齡、體重指數(shù)(Body Mass Index、基礎(chǔ)FSH、Gn(Gonadotropin)天數(shù)、獲卵數(shù)、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、雌二醇(estradiol, E2)、催乳素(prolactin, PRL)、總睪酮(testosterone,T)、性激素結(jié)合球蛋白(sex hormone-binding globulin, SHBG)、游離睪酮指數(shù)(Free androgen index, FAI)。 4.所有患者,經(jīng)手術(shù)獲取卵丘顆粒細(xì)胞之后,行以下實(shí)驗(yàn)： (1)3一末端原位標(biāo)記法(TUNEL)以及流式細(xì)胞法分析卵丘顆粒細(xì)胞凋亡情況,比較三組樣本凋亡率差異； (2)Real-Time PCR與Western Blotting檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白CHOP蛋白、凋亡調(diào)控蛋白Bcl-2和Caspase3在卵丘顆粒細(xì)胞表達(dá)情況,對(duì)比三組間的差異。 (3)對(duì)胚胎進(jìn)行形態(tài)觀察后,進(jìn)行胚胎移植,黃體支持和臨床妊娠隨訪,統(tǒng)計(jì)妊娠率。 結(jié)果： 通過(guò)篩選,符合標(biāo)準(zhǔn)入組的患者60例,試驗(yàn)組、對(duì)照組以及正常對(duì)照組各20例：①試驗(yàn)組：口服達(dá)英-35后,游離睪酮指數(shù)水平正常的PCOS患者；②對(duì)照組：游離睪酮指數(shù)升高的PCOS患者,不采取口服達(dá)英-35降雄；③正常對(duì)照組采用正常卵巢反應(yīng)不孕患者。獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.基本臨床資料及助孕情況 三組患者基本特征,包括年齡、BMI、基礎(chǔ)FSH、Gn使用天數(shù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.獲卵、胚胎情況 (1)對(duì)照組、試驗(yàn)組以及正常對(duì)照組獲卵數(shù)的比較：與對(duì)照組相比,正常對(duì)照組以及試驗(yàn)組獲卵數(shù)兩組間無(wú)顯著性差異(P0.05)；正常對(duì)照組與試驗(yàn)組相比,獲卵數(shù)組間無(wú)顯著性差異(P0.05)。(2)試驗(yàn)組、對(duì)照組以及正常對(duì)照組優(yōu)質(zhì)胚胎率、MⅡ期卵子數(shù)以及受精率比較：與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；正常對(duì)照組高于對(duì)照組,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明試驗(yàn)組、正常對(duì)照組的卵母細(xì)胞質(zhì)量高于對(duì)照組。(3)試驗(yàn)組、對(duì)照組以及正常對(duì)照組FAI比較：與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；然而試驗(yàn)組與正常對(duì)照組FAI比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3.利用TUNEL法檢查卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率,流式細(xì)胞儀分析驗(yàn)證其凋亡。 (1)對(duì)照組、試驗(yàn)組和正常對(duì)照組卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率結(jié)果表明：與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組凋亡率低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；對(duì)照組高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；試驗(yàn)組與正常對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)Real-Time PCR檢測(cè)CHOP、Bcl-2和Caspase3mRNA表達(dá)水平表明：各組顆粒細(xì)胞上都有CHOP、Bcl-2和Caspase3mRNA的表達(dá)。三組Bcl-2的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組和正常對(duì)照組Caspase3、CHOP表達(dá)顯著下調(diào)(P0.05)；與正常對(duì)照組相比,試驗(yàn)組Bcl-2、Caspase3與CHOP表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)Western Blotting檢測(cè)CHOP、Bcl-2和Caspase3蛋白表達(dá)水平表明：各組顆粒細(xì)胞上都有CHOP、Bcl-2和Caspase3蛋白的表達(dá)。三組Bcl-2蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與對(duì)照組相比,試驗(yàn)組和正常對(duì)照組CHOP、Caspase3蛋白表達(dá)水平顯著下調(diào)(P0.05)；與正常對(duì)照組相比,試驗(yàn)組Bcl-2、Caspase3與CHOP三者表達(dá)均無(wú)顯著差異(P0.05)。 4.臨床妊娠隨訪統(tǒng)計(jì)表明：試驗(yàn)組、對(duì)照組以及正常對(duì)照組臨床妊娠率比較：與對(duì)照組比較,試驗(yàn)組與正常對(duì)照組臨床妊娠率有增高的趨勢(shì),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與正常對(duì)照組相比,試驗(yàn)組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 本課題通過(guò)實(shí)驗(yàn),直接觀察經(jīng)過(guò)降雄治療后的PCOS患者以及FAI升高的PCOS患者以及正常卵巢反應(yīng)性不孕患者受精后胚胎質(zhì)量及卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn),經(jīng)過(guò)降雄治療后,PCOS患者經(jīng)體外受精后,受精率以及胚胎質(zhì)量得到了顯著提高,提高了卵母細(xì)胞質(zhì)量,卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率顯著降低。表明在PCOS發(fā)病過(guò)程中,血清游離睪酮指數(shù)可能提示卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率以及受精后優(yōu)質(zhì)胚胎率和妊娠結(jié)局。血清游離睪酮指數(shù)越高,卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率越高,受精后優(yōu)質(zhì)胚胎率越低,臨床妊娠率越低。診斷PCOS生化指標(biāo)可以首選FAI,因?yàn)槠洳粌H能準(zhǔn)確反映雄激素水平,還能間接反映卵丘顆粒細(xì)胞凋亡率,受精后優(yōu)質(zhì)胚胎率以及臨床妊娠率,較單純查總睪酮或游離睪酮有較大優(yōu)勢(shì),有臨床應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R711.75

【參考文獻(xiàn)】

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1 董智力;韓世愈;李巖;王國(guó)緯;;游離睪酮指數(shù)與伴高雄激素血癥的多囊卵巢綜合征的相關(guān)性研究[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2012年02期

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本文編號(hào)：2505029