【摘要】：1.研究背景和目的 1.1研究背景 降低出生缺陷兒的發(fā)生率不但關(guān)系著家庭的幸福,也與國家的富強(qiáng)、民族的興旺密切相關(guān)。吸煙可導(dǎo)致胎兒先天畸形發(fā)生率升高已得到公認(rèn)。香煙煙霧中含有大量有毒物質(zhì),目前已鑒定出4000余種,有毒物質(zhì)被母體吸入后,可通過胎盤屏障直接毒害胚胎、胎兒,或通過損傷子宮胎盤結(jié)構(gòu)進(jìn)而間接影響胚胎發(fā)育。美國在50個(gè)州進(jìn)行的一項(xiàng)較大規(guī)模的病例對照研究發(fā)現(xiàn)母親孕期吸煙與子代唇/腭裂呈劑量效應(yīng)關(guān)系。Woods和Raju的研究發(fā)現(xiàn)母親孕期吸煙與低出生體重和心血管畸形關(guān)聯(lián),與其它類型出生缺陷無關(guān)。Sham等從加利福尼亞州2003～2005年儲存的超過180000份孕中期母血標(biāo)本中,選擇分娩口面裂畸形兒的89例孕婦為研究組,隨機(jī)選擇409例分娩正常胎兒的孕婦為對照組,以孕婦血清cotinine(可的寧,尼古丁的代謝產(chǎn)物)≥2ng/ml定義為吸煙暴露,發(fā)現(xiàn)：在校正了種族、孕婦年齡和血清葉酸水平后,暴露在吸煙環(huán)境中的孕婦分娩口面裂畸形胎兒的風(fēng)險(xiǎn)是2.4倍。國內(nèi)吳云等回顧性分析1560例進(jìn)行產(chǎn)前超聲檢查的孕婦的基本資料,其中胎兒畸形組孕婦459例,對照組孕婦1101例,發(fā)現(xiàn)孕期被動吸煙史是發(fā)生胎兒畸形的危險(xiǎn)因素。 我國是世界上煙草生產(chǎn)消費(fèi)量最大的國家,跟據(jù)世界衛(wèi)生組織資料,目前全球約有13億煙民,其中中國就有3.5億煙民。一項(xiàng)隨機(jī)抽取四川省8所區(qū)縣級婦幼保健院共計(jì)1181名非吸煙孕婦的調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)：75.1%的孕婦遭受被動吸煙,農(nóng)村孕婦被動吸煙暴露率稍高于城市。值得注意的是：被動吸煙者吸入的主要是側(cè)流煙霧,與主流煙霧相比,側(cè)流煙霧由于燃燒不全,所含的致癌物水平更高,被動吸煙者所受的煙草危害比主動吸煙者更加嚴(yán)重。 可的寧是人體吸入環(huán)境煙草煙霧(environmental tobacco smoke, ETS)中尼古丁的主要代謝產(chǎn)物,它的半衰期較長,而且受飲食因素影響較小,可以作為吸煙環(huán)境影響的生物標(biāo)記物,是判斷ETS吸入量比較客觀的指標(biāo)。國外研究吸煙暴露對妊娠的影響多以可的寧為指標(biāo)進(jìn)行客觀評價(jià)。 另外我們知道,孕期吸煙暴露僅其中一部分個(gè)體發(fā)生胎兒先天畸形,這主要是由于機(jī)體對外源性有毒物質(zhì)的反應(yīng)是由環(huán)境暴露水平和遺傳特征共同決定的�，F(xiàn)有的研究表明：一些有毒物質(zhì)的活性在不同個(gè)體中差異可達(dá)數(shù)十倍,個(gè)體對毒性物質(zhì)的活化和解毒能力的不同使毒性物質(zhì)對機(jī)體的損傷效應(yīng)也有極大的差異性,代謝酶的基因型多態(tài)性是個(gè)體對毒物損傷的遺傳易感性基礎(chǔ)。 香煙煙霧作為外源性化學(xué)物,進(jìn)入人體后可經(jīng)Ⅰ相代謝酶將其活化成對人體有毒性的中間體,然后再Ⅱ相代謝酶將其催化成親水物質(zhì)排出體外。外源性化學(xué)物對機(jī)體的影響結(jié)果很大程度上取決于這兩類酶的活性和彼此的平衡。 代謝酶的基因存在多態(tài)性,基因多態(tài)性可導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物往往具有不同的生物學(xué)活性,引起個(gè)體對疾病易感性的差異。細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450, CYP450)是人體內(nèi)最主要的Ⅰ相代謝酶,CYP1A1是CYP450家族的一個(gè)成員,由定位于15號染色體的CYP1A1基因編碼,CYP1A1基因具有遺傳多態(tài)性,突變型基因表達(dá)的CYP1A1酶活性是正常表達(dá)的數(shù)倍。谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(glutathione-S-transferase, GST)是人體內(nèi)最重要的Ⅱ相代謝酶,GSTT1是GST家族中的一種,攜帶缺失型基因(GSTT1null)的個(gè)體不能表達(dá)GSTT1, GSTM1與GSTT1互為同工酶,因此缺乏Ⅱ相代謝酶,難以有效代謝體內(nèi)中間毒性代謝產(chǎn)物,提高了對毒性的易感性。 據(jù)此,近年來國外學(xué)者開展了一些有關(guān)CYPlA1和GSTT1基因多態(tài)性與胎兒先天性畸形關(guān)系的研究。Van Rooij研究發(fā)現(xiàn)：當(dāng)母親吸煙且GSTT1缺失型時(shí)子代發(fā)生唇腭裂的危險(xiǎn)性增加,當(dāng)母親吸煙且母親及嬰兒均為GSTT1缺失型時(shí)發(fā)生唇腭裂的可能性更大。國內(nèi)也有研究證實(shí)攜帶CYPlA1突變型和GSTT1缺失型的吸煙者對DNA損傷敏感,但絕大多數(shù)都是集中在非妊娠人群；針對妊娠個(gè)體,僅有一少部分學(xué)者就母胎CYP1A1和GSTT1基因多態(tài)性與早產(chǎn)易感性進(jìn)行了相關(guān)研究,國內(nèi)有關(guān)孕婦吸煙暴露、母嬰代謝酶基因多態(tài)性與胎兒先天性畸形的相關(guān)性研究更為稀少。Rebbeck研究發(fā)現(xiàn),GSTT1基因存在人種的差異,GSTT1缺失型基因在歐洲人是12～20%,而在亞洲人群中為65%。這就提示我們不能照搬西方的研究結(jié)論,有必要在中國人群中研究孕婦吸煙暴露—母嬰代謝基因多態(tài)性與胎兒先天畸形發(fā)生的相關(guān)性。 1.2研究目的 本研究回顧性分析深圳市近三年出生缺陷監(jiān)測資料,了解深圳市近三年出生缺陷的發(fā)生情況,分析影響因素,提出預(yù)防措施；同時(shí)檢測孕期有被動吸煙暴露史的孕婦血清可的寧含量和母嬰CYP1A1、GSTT1及GSTM1代謝酶基因多態(tài)性,分析孕婦血清可的寧含量與胎兒先天畸形的關(guān)系、母親基因、胎兒基因?qū)μ合忍旎伟l(fā)生的交互作用,制定出篩查策略(如測定母血清可的寧含量和檢測母親及胎兒CYPlA1、GSTT1及GSTM1基因多態(tài)性)應(yīng)用于臨床以篩查出孕期吸煙暴露發(fā)生胎兒先天畸形高危孕婦。研究結(jié)果有望為吸煙暴露孕婦進(jìn)行優(yōu)生咨詢和產(chǎn)前診斷提供依據(jù),對促進(jìn)優(yōu)生優(yōu)育和提高人口素質(zhì)有重要意義。 2.材料方法 2.1研究對象 收集2010年1月1日～2012年12月31日深圳市圍產(chǎn)兒出生缺陷監(jiān)測資料進(jìn)行回顧性分析,并選取2012年11月～2013年11月在深圳市婦幼保健院引產(chǎn)或分娩的孕婦246例及其中的229例胎兒,先天畸形兒及其母親為病例組,其中母體病例組49例,胎兒病例組41例,同期計(jì)劃外妊娠需引產(chǎn)或分娩的正常胎兒及其母親為對照組,其中母體對照組197例,胎兒對照組188例。兩組孕婦的年齡、孕周相比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),具有可比性。 2.2實(shí)驗(yàn)方法 (1)對深圳市近三年圍產(chǎn)兒數(shù)、出生缺陷兒數(shù)、出生缺陷類型、出生缺陷兒性別以及孕婦的年齡、民族、孕產(chǎn)次、文化程度等一般情況等資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 (2)在引產(chǎn)或分娩時(shí)采集所有有被動吸煙暴露史的先天畸形兒組孕婦和正常對照胎兒組孕婦肘靜脈血6m1,其中3m1血注入干燥管,待其自然凝固30min后,以3000轉(zhuǎn)／分離心10分鐘后分離血清,-80℃冰箱保存,以待檢測血清可的寧含量；另3m1靜脈血采用EDTA抗凝,-80℃冰箱保存,以待檢測CYPIA1、 GSTT1和GSTM1基因多態(tài)性。對入選病例組和對照組的研究對象,在畸胎引產(chǎn)或分娩時(shí)采集及羊水3m1,注入BD管內(nèi),-80℃冰箱保存,以待檢測CYPlA1、 GSTT1和GSTM1基因多態(tài)性。 (3)應(yīng)用ELISA方法測定母親血清可的寧含量,讀取OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品0D值繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找各研究對象對應(yīng)的濃度值。 (4)采用PCR測序技術(shù)檢測檢測病例組和對照組母嬰CYPlA1基因MSPI位點(diǎn)多態(tài)性,采用多重PCR技術(shù)檢測GSTT1、GSTM1的基因型 (5)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析,用x2檢驗(yàn)檢測病例組與對照組基因型頻率的分布情況,用分層分析的方法分析各基因型之間的交互作用；用Logistic回歸分析法計(jì)算0R值和95%CI,表示它們之間關(guān)聯(lián)強(qiáng)度,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.結(jié)果 3.12010年～2012年,深圳市圍產(chǎn)兒總數(shù)564647例,出生缺陷兒9221例,三年間平均出生缺陷發(fā)生率為16.33‰,其中發(fā)生最多的是先天性心臟病,發(fā)生率為6.52‰,對圍產(chǎn)兒出生缺陷有影響的因素有胎兒性別、孕婦戶籍類型、孕婦年齡、孕期有吸煙、飲酒不良暴露史,而孕婦的孕產(chǎn)史、文化程度和民族情況對新生兒的出生缺陷發(fā)生無明顯影響。 3.2先天性畸形兒組母血清可的寧水平為(374.51±24.78)ng/ml,正常圍產(chǎn)兒組母血清可的寧水平為(45.01±8.08)ng/ml,對兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。孕期有被動吸煙暴露史的孕婦血清可的寧的ROC曲線特征顯示,血清可的寧含量對胎兒先天畸形有一定的診斷價(jià)值,當(dāng)截?cái)嘀禐?50.00ng/ml時(shí),敏感度是83.7%,特異度是90.9%。 3.3在所調(diào)查的246例母親中,CYP1A1突變型基因頻率為19.1%,非突變型(即雜合型、野生純合型)為80.9%；GSTT1的缺失基因型頻率為37.4%,非缺失型為62.6%；GSTM1的缺失基因型頻率為53.3%,非缺失型為46.7%；229例胎兒中CYP1A1突變型基因頻率為18.8%,非突變型(即雜合型、野生純合型)為81.2%; GSTT1的缺失基因型頻率為34.1%,非缺失型為65.9%;GSTM1的缺失基因型頻率51.5%,非缺失型為48.5%。母親和胎兒的GSTT1缺失型與非缺失型以及GSTM1與GSTT1聯(lián)合基因型的分布在病例組和對照組中差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其他基因型的表達(dá)均未見與先天畸形兒的發(fā)生有關(guān)。 4.結(jié)論 4.12010年～2012年我市圍產(chǎn)兒出生缺陷率總體呈現(xiàn)上升趨勢,其中先天性心臟病占據(jù)首位,影響圍產(chǎn)兒出生缺陷發(fā)生的因素包括：圍產(chǎn)兒性別、孕婦戶籍類型、孕婦年齡、孕期吸煙與飲酒的暴露；而孕婦的孕產(chǎn)次、文化程度和民族情況與圍產(chǎn)兒的出生缺陷發(fā)生無明顯相關(guān)性。 4.2孕期被動吸煙暴露與胎兒先天畸形的發(fā)生有關(guān)。孕期有被動吸煙暴露史的孕婦血清可的寧的ROC曲線特征顯示,血清可的寧含量對胎兒先天畸形有一定的診斷價(jià)值,當(dāng)截?cái)嘀禐?50.00ng/ml時(shí),敏感度是83.7%,特異度是90.9%�？梢娫袐D血清可的寧含量對于診斷胎兒先天畸形的敏感度特異度都比較高,提示孕婦血清可的寧可作為篩查胎兒先天畸形的檢測手段。 4.3母體及其胎兒體內(nèi)GSTT1缺失型、GSTM1基因缺失型與GSTT1基因缺失型聯(lián)合基因型的分布均與先天畸形兒發(fā)生有關(guān),其中GSTM1與GSTT1聯(lián)合基因型的分布與先天畸形兒發(fā)生危險(xiǎn)性更大,GSTT1基因缺失型、GSTM1基因缺失型與GSTT1基因缺失型聯(lián)合基因型的分布是先天畸形兒易感基因。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R715.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 金瑩,陳大方,楊帆,李志平,方治安,李凌松,王黎華;細(xì)胞色素P450氧化酶基因MSP1位點(diǎn)多態(tài)性與早產(chǎn)的關(guān)聯(lián)性研究[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年06期

2 潘喜華;仲偉鑒;肖萍;楊雋;鄭勇英;鄭衛(wèi)東;;吸煙者CYP1A1和GSTM1基因多態(tài)性與DNA損傷關(guān)系[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2006年03期

3 王撬撬;周任婧;陳琴芳;劉小芹;袁偉;王波;;杭州市余杭區(qū)人群基礎(chǔ)出生缺陷普查及高危因素研究[J];中國計(jì)劃生育學(xué)雜志;2012年08期

4 張美云;程義斌;董少霞;劉婭;金銀龍;;母親和新生兒GSTM1、GSTT1和細(xì)胞色素P_(450)1A1基因多態(tài)性與早產(chǎn)易感性關(guān)系[J];衛(wèi)生研究;2008年02期

5 周毅;章漢旺;韓澤民;田文志;李哲;鞠名達(dá);;新生兒CYP1A1、GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性分布的研究[J];西安外事學(xué)院學(xué)報(bào);2006年01期

6 王燕,陳云,吳曉敏,何育西,陳德友,張志學(xué),顏朝陽,謝代超,宋揚(yáng),鄧穎;對吸煙有害健康的認(rèn)識和態(tài)度的調(diào)查分析[J];預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志;2002年02期

7 姜烈君;陳明;覃桂芳;;細(xì)胞色素P4501A1、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶基因多態(tài)性和急性淋巴細(xì)胞白血病的關(guān)系研究[J];右江民族醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年05期

8 關(guān)穎;;2004～2008年丹東市振興區(qū)出生缺陷原因分析[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2010年01期

9 張吉凱,胡毅玲,胡巢鳳,王聲ng;GSTM1和GSTT1基因多態(tài)性與女性肺癌易感性的關(guān)系[J];中國公共衛(wèi)生;2002年03期

10 錢碧云;韓宏偉;谷峰;何敏;李海欣;宋豐舉;雷蕾;董淑芬;陳可欣;;CYP1A1 GSTM1基因多態(tài)性和吸煙與肺癌易感性關(guān)系的病例對照研究[J];中國腫瘤臨床;2006年09期

，

本文編號：2454076