【摘要】：胚胎停育是指妊娠早期胚胎發(fā)育自然終止和胚胎丟失的病理過程,多發(fā)生于妊娠12周以內(nèi)，在育齡期婦女中的發(fā)病率為15～20%[1]，B超下的表現(xiàn)為妊娠囊內(nèi)胎芽或胎兒形態(tài)不整，無胎心搏動或表現(xiàn)為枯萎囊等[2]。其妊娠結(jié)局常為稽留流產(chǎn)或不全流產(chǎn)，臨床處理較困難，治療效果欠佳，嚴重的影響了患者的工作與生活。目前認為，胚胎停育是一個多因素參與的復雜的病理過程，病因十分復雜，，主要包括染色體異常、子宮畸形、內(nèi)分泌失調(diào)、感染性疾病、環(huán)境污染等因素[3-4]，除此以外，仍有大約50%的患者病因尚不明確[5]。近年來，隨著其發(fā)病率的上升，國內(nèi)外學者愈發(fā)重視對不明原因胚胎停育的病因研究。 信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄活化因子(signal transducers and activators of transcription,STAT)在細胞因子的信號轉(zhuǎn)導中起著關(guān)鍵性的作用，是生長調(diào)節(jié)中的主要調(diào)控者[12]。IL-6是JAKs (janus激酶)成員之一，可以有選擇地使STATs通過酪氨酸和絲氨酸殘基的磷酸化為p-STATs，進而誘導相應的靶基因如Survivin、MMP-2、VEGF等的表達，介導多種細胞因子和生長因子信號的傳導,參與細胞生長、增殖、分化、及凋亡等生理功能的調(diào)控[13]。Survivin是凋亡抑制蛋白IAP家族中抗凋亡作用最強的成員，多表達于人類的腫瘤細胞、絨毛的滋養(yǎng)細胞等組織中，具有抑制細胞凋亡及調(diào)節(jié)細胞有絲分裂的作用；此外，研究報道Survivin在促進滋養(yǎng)細胞生長、浸潤和胎盤形成的過程中起重要作用。基質(zhì)金屬蛋白酶（MatrixMetalloproteinases，MMPs)是一類幾乎能降解細胞外基質(zhì)中所有成分的蛋白水解酶,在細胞侵襲、轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵性作用。MMP-2(明膠酶A)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族主要成員之一，孕早期主要由滋養(yǎng)細胞產(chǎn)生,在早期胚胎的植入、子宮內(nèi)膜血管的生成和維持過程中發(fā)揮重要的作用。 目前，國內(nèi)外許多研究報道JAK-Stat3信號轉(zhuǎn)導通路在滋養(yǎng)細胞分化及侵襲過程中起到了重要的作用，而有關(guān)該通路是否參與了胚胎停止發(fā)育的發(fā)病過程以及在胚胎停止發(fā)育中的作用還鮮有報道。本研究通過檢測IL-6、Stat-3、p-Stat3、Survivin及MMP-2的mRNA和蛋白水平在胚胎停育組和正常妊娠婦女絨毛組織中的表達情況，初步探討其在胚胎停育發(fā)病機制中的作用及意義。 目的 本研究通過比較妊娠早期胚胎停育組和正常對照組絨毛組織中IL-6、Stat-3、p-Stat3、Survivin及MMP-2的mRNA和蛋白的表達有無差異，免疫組化定位IL-6、Stat-3、p-Stat3、Survivin及MMP-2在兩組絨毛組織中的位置，初步探討Stat3信號傳導通路在胚胎停育發(fā)病機制中的作用。 材料和方法 1研究對象 選取2012年7月至12月就診于鄭州大學第三附屬醫(yī)院行清宮術(shù)的胚胎停育患者30例為胚胎停育組,診斷標準參照美國超聲放射醫(yī)生協(xié)會提出的評估標準，B超符合：頭臀長度≥7mm且無心跳；孕囊平均直徑≥25mm且無胚胎；檢查出無卵黃囊的孕囊2周后不見有心跳的胚胎；檢查出有卵黃囊的孕囊11天后仍不見有心跳。選擇同期正常早孕自愿要求終止妊娠者30例為正常對照組, B超提示宮內(nèi)妊娠,有胚胎原始心管搏動,既往無不良孕產(chǎn)史。以上兩組研究對象均符合以下條件：以上兩組研究對象均符合以下條件：⑴停經(jīng)12周以內(nèi)、既往無不良妊娠史⑵無嚴重的內(nèi)科疾病、傳染性疾病、感染等疾病⑶無生殖道畸形⑷無染色體核型異常⑸無內(nèi)分泌異常⑹無自身抗體等相關(guān)疾病。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準,標本提供者均知情同意。 2實驗方法 采集離體新鮮絨毛組織約2～5g，立即用生理鹽水洗凈，無菌濾紙反復吸取絨毛組織中的血液，用無菌組織剪分為兩份，一部分用10%福爾馬林固定（用于免疫組化研究），一部分裝入無菌凍存管內(nèi)后迅速放入液氮罐內(nèi)（用于mRNA及蛋白提�。�，以上所有步驟均在絨毛組織離體后15min內(nèi)完成。最后10%福爾馬林固定的組織在室溫條件下保存，液氮罐內(nèi)的組織放入－80℃冰箱內(nèi)凍存?zhèn)溆�。采用Real-time PCR，Western blot的技術(shù)，比較胚胎停育組和正常妊娠組絨毛組織中IL-6、Stat3、p-Stat3、Survivin、MMP-2的mRNA及蛋白的表達的有無差異，免疫組化定位IL-6、Stat3、p-Stat3、Survivin、MMP-2胚胎停育組和正常妊娠組絨毛組織中的定位表達情況。 3統(tǒng)計學處理 實驗所得數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學的分析，定量資料均以(X S)表示，符合正態(tài)分布的計量資料采用獨立樣本的t檢驗，不符合正態(tài)分布的計量資料采用秩和檢驗，有序多分類資料采用秩和檢驗，以=0.05為檢驗水準。 結(jié)果 1胚胎停育組和正常對照組一般臨床資料比較 胚胎停育組與正常對照組孕婦平均年齡、停經(jīng)天數(shù)、孕次、產(chǎn)次、孕囊大小比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（見表3.1） 2胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中IL-6、Stat3、Survivin和MMP-2mRNA的表達 2.1胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中IL-6mRNA的表達 兩組孕婦絨毛組織中均可檢測到IL-6mRNA的表達，胚胎停育組IL-6mRNA相對表達量為1.18±0.51，正常對照組為2.14±1.3，胚胎停育組IL-6mRNA表達水平明顯低于正常對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 2.2胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中Stat3mRNA的表達 兩組孕婦絨毛組織中均可檢測到Stat3mRNA的表達，胚胎停育組Stat3mRNA相對表達量為1.35±0.11,正常對照組為1.13±0.15，兩組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 2.3胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中Survivin mRNA的表達 兩組孕產(chǎn)婦胎盤組織中均可檢測到Survivin mRNA的表達，胚胎停育組及正常對照組Survivin mRNA相對表達量分別為0.12±0.01，0.91±0.58，胚胎停育組Survivin mRNA表達水平低于正常對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 2.4胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中MMP-2mRNA的表達 兩組孕婦絨毛組織中均可檢測到MMP-2mRNA的表達，胚胎停育組MMP-2mRNA相對表達量為1.28±1.57，正常對照組為0.18±0.38，胚胎停育組MMP-2mRNA表達水平高于正常對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 3胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中IL-6、Stat3、p-Stat3、Survivin 和MMP-2蛋白的表達定位 IL-6, Stat3,p-Stat3,Survivin及MMP-2在兩組絨毛組織中的合體、細胞滋養(yǎng)層細胞均有不同程度的陽性表達，呈棕黃色或黃褐色染色，IL-6, Stat3, MMP-2均主要定位于滋養(yǎng)細胞細胞膜及細胞質(zhì)中，而p-Stat3，Survivin主要定位于滋養(yǎng)細胞細胞核中。 4胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中IL-6、Stat3、p-Stat3、Survivin和MMP-2蛋白表達變化 4.1胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中IL-6蛋白的表達 Westernblot結(jié)果分析顯示，胚胎停育組絨毛組織中IL-6蛋白的相對表達量為0.14±0.10,正常對照組為0.33±0.16，IL-6蛋白在胚胎停育組中的相對表達量低于正常對照組，兩組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05） 4.2胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中Stat3蛋白的表達 胚胎停育組絨毛組織中Stat3蛋白的相對表達量為0.35±0.02，正常對照組為0.36±0.03，兩組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 4.3胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中p-Stat3蛋白的表達 胚胎停育組絨毛組織中p-Stat3蛋白的相對表達量為0.19±0.01，正常對照組為0.05±0.01，胚胎停育組中p-Stat3蛋白相對表達量低于正常對照組，兩組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 4.4胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中Survivin蛋白的表達 胚胎停育組絨毛組織中Survivin蛋白的相對表達量為0.48±0.04，正常對照組為0.14±0.01，Survivin蛋白在胚胎停育組中的相對表達量低于正常對照組，兩組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 4.5胚胎停育組與正常對照組絨毛組織中MMP-2蛋白的表達 胚胎停育組絨毛組織中MMP-2蛋白的相對表達量為0.63±0.11，正常對照組為0.19±0.14，MMP-2蛋白在胚胎停育組中的相對表達量高于正常對照組，兩組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。 結(jié)論 胚胎停育患者絨毛組織中IL-6，p-Stat3，Survivin的表達量下降，MMP-2的表達量升高，可能參與胚胎停育的發(fā)病過程。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R714.2

【共引文獻】

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5 董暉;吳振蘭;王麗;趙建強;;IL-12、IL-18與復發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性研究[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2014年03期

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本文編號：2444860