【摘要】：目的:探討細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶16(CDK16)在卵巢漿液性癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及其對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的作用。方法:應(yīng)用qRT-PCR方法檢測(cè)卵巢漿液性癌細(xì)胞株(SK-OV-3,OVCAR-3和HO-8910)和卵巢漿液性癌組織中CDK16 mRNA的表達(dá)水平;應(yīng)用免疫組化檢測(cè)卵巢漿液性癌組織中CDK16蛋白表達(dá)水平。同時(shí),構(gòu)建2株CDK16干擾慢病毒載體si N1和si N2;將siN1感染卵巢漿液性癌細(xì)胞株(SK-OV-3,OVCAR-3和HO-8910),檢測(cè)siN1在3株卵巢癌細(xì)胞株中的沉默效率;然后,干擾SK-OV-3細(xì)胞中的CDK16基因后,檢測(cè)細(xì)胞的腫瘤生物學(xué)行為變化,采用MTT實(shí)驗(yàn)、Brdu實(shí)驗(yàn)、體外克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡;采用Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞遷徙能力和運(yùn)動(dòng)能力。結(jié)果:與正常細(xì)胞293T相比較,CDK16 mRNA的表達(dá)量在卵巢漿液性癌細(xì)胞株SK-OV-3,OVCAR-3和HO-8910中分別為7.04±1.26,7.52±1.91,5.62±0.10,與正常細(xì)胞293T的表達(dá)量4.65±0.97相比,CDK16 mRNA在3株卵巢漿液性細(xì)胞中明顯高表達(dá)(P0.01)。CDK16 mRNA和蛋白在非腫瘤卵巢組織中表達(dá)量為46.08±10.05和43.66±8.01,在卵巢漿液性癌組織中表達(dá)量為146.73±11.02和185.61±23.08,與非腫瘤卵巢組織相比,CDK16 mRNA和蛋白明顯高表達(dá)于卵巢漿液性癌組織(P0.01)。手術(shù)病理分期I、II、III、IV期中CDK16 mRNA和蛋白的表達(dá)量分別是123.20±9.42和163±21.37,129.40±8.79和167.96±18.21,152.27±11.70和201.43±21.31,153.51±6.59和217.20±9.72,患者分期越晚CDK16 mRNA和蛋白表達(dá)越高(P0.01);組織學(xué)分級(jí)G1,G2,G3中CDK16 mRNA和蛋白的表達(dá)量分別為125.93±7.30和129.73±14.91,148.29±9.50和197.49±18.30,152.03±6.13和212.03±21.30,組織學(xué)分級(jí)越差CDK16 mRNA和蛋白表達(dá)越高(P0.01);由此可得,CDK16 mRNA的表達(dá)水平與漿液性卵巢癌病理分期、腫瘤分化水平之間存在顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。CDK16蛋白表達(dá)陰性組、陽(yáng)性組、強(qiáng)陽(yáng)性組患者的生存時(shí)間分別為5.50±0.44,2.00±0.27,1.00±0.13,三組分別比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。本研究成功構(gòu)建CDK16干擾慢病毒載體siN1和si N2,并且在SK-OV-3細(xì)胞中的抑制效率分別為86.6%和85.0%,滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求SK-OV-3細(xì)胞感染siN1慢病毒之后,從第2天開(kāi)始細(xì)胞表現(xiàn)增殖減低,一直持續(xù)到第5天時(shí)其細(xì)胞增殖數(shù)量顯著降低(P0.05);SK-OV-3細(xì)胞處于G1的細(xì)胞明顯增多,G2的細(xì)胞明顯減少,S期的細(xì)胞變化不大;SK-OV-3細(xì)胞的體外克隆形成能力明顯減少(P0.01);SK-OV-3細(xì)胞凋亡明顯增加(P0.01);SK-OV-3細(xì)胞侵襲率顯著降低(P0.05);SK-OV-3細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力明顯降低(P0.01)。結(jié)論:CDK16在卵巢漿液性癌細(xì)胞株和癌組織中呈高表達(dá);干擾CDK16基因能夠抑制卵巢漿液性癌細(xì)胞SK-OV-3的增殖和遷徙能力,促進(jìn)其凋亡;CDK16基因可能是一個(gè)促癌基因,為后續(xù)深入研究CDK16基因在卵巢漿液性癌發(fā)生發(fā)展的作用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：2444663