【摘要】：目的觀察低氧情況下腎上腺髓質(zhì)素(ADM)對卵巢癌細(xì)胞及在體腫瘤的生長促進(jìn)作用。方法三種卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780、SKOV3、HO-8910于低氧環(huán)境中培養(yǎng)6~24h,采用RT-PCR分析ADM、低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的mRNA表達(dá)改變。通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染獲得穩(wěn)定表達(dá)ADM-shRNA的HO-8910細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測ADM表達(dá)沉默后卵巢癌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡比例。建立卵巢癌細(xì)胞裸鼠荷瘤模型,各組裸鼠每天腹腔內(nèi)注射5mg/kg的順鉑或皮下瘤內(nèi)注射10μg/kg的ADM-shRNA,觀察腫瘤體積變化并采用Western blot檢測ADM蛋白表達(dá)。結(jié)果 HO-8910細(xì)胞24h低氧使ADM mRNA表達(dá)上升4.13倍(P0.000 1),VEGF、HIF-1α的mRNA表達(dá)則比對照組升高3.46(P0.01)和3.91倍(P0.000 1)。轉(zhuǎn)染72h后,shADM組細(xì)胞ADM蛋白表達(dá)量比對照組降低48.2%(P0.05),mRNA比對照組降低26.9%(P0.000 1)。shADM組凋亡細(xì)胞比例顯著高于正常組(shADM組:42.65%;正常組:8.4%;二者相比P0.01)。順鉑+shADM組的抑瘤率為71.39%,顯著高于順鉑+PBS組的39.21%(P0.001)或者鹽水+shADM組的49.45%(P0.05)。結(jié)論低氧環(huán)境可誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞ADM表達(dá)增加,激活VEGF和HIF-1相關(guān)信號通路,繼而促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的生長存活。ADM基因沉默能顯著促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞凋亡并加強順鉑對裸鼠在體瘤的抑瘤作用,因此可能成為卵巢癌基因治療的潛在的靶點。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of adrenomedullin (ADM) on the growth of ovarian cancer cells and tumor in vivo. Methods three ovarian cancer cell lines A2780 SKOV3HO-8910 were cultured in hypoxic environment for 6h for 24 hours. ADM, hypoxia inducible factor 1 偽 (HIF-1 偽) and mRNA expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) were detected by RT-PCR. HO-8910 cells expressing ADM-shRNA stably were obtained by plasmid transfection. Apoptosis of ovarian cancer cells after ADM expression silencing was detected by flow cytometry. A tumor bearing model of ovarian cancer cells was established in nude mice. Cisplatin (5mg/kg) or ADM-shRNA, (10 渭 g/kg) were injected intraperitoneally to observe the tumor volume and the expression of ADM protein was detected by Western blot in each group. Results the expression of ADM mRNA increased 4.13 times (P0.0001) in HO-8910 cells at 24h hypoxia, and the mRNA expression of VEGF,HIF-1 偽 increased 3.46 (P0.01) and 3.91 times (P0.0001) compared with the control group. After 72 hours of transfection, the expression of ADM protein in shADM group was 48.2% lower than that in control group (P0.05), mRNA was 26.9% lower than that in control group) (P0.000 1). ShADM group was significantly higher than normal group (shADM group: 42.65%). Normal group: 8.4%, compared with P0.01). The inhibitory rate of cisplatin shADM group was 71.39, which was significantly higher than that of cisplatin PBS group (39.21%) or saline shADM group (49.45%) (P0.05). Conclusion hypoxia can induce increased ADM expression and activate VEGF and HIF-1 related signaling pathways in ovarian cancer cells. ADM gene silencing can significantly promote apoptosis of ovarian cancer cells and enhance the inhibitory effect of cisplatin on in vivo tumor of nude mice, so it may become a potential target of gene therapy for ovarian cancer.
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科;溫州市中西結(jié)合醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【基金】：浙江省重點科技創(chuàng)新團隊項目(No.2012162)~~
【分類號】：R737.31

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