【摘要】：胎膜早破（Premature Rupture of Membrane，PROM)是指臨產(chǎn)前發(fā)生的胎膜破裂，可以給孕產(chǎn)婦和新生兒的健康造成嚴重影響，可引發(fā)感染、胎盤早剝、產(chǎn)后出血、早產(chǎn)、臍帶受壓等多種危及母兒健康和生命的疾病。妊娠期發(fā)生胎膜早破的因素很多，但其最基本的病理變化是炎癥和胎膜本身結構的缺陷。近年來國內(nèi)外學者主要從胎膜結構的變化、機械外力、感染因素、免疫等方面研究胎膜早破發(fā)生的原因，并且取得了極大的進展。感染一直是學者們公認的與胎膜早破發(fā)生最為密切的相關因素之一。臨床上有部分孕婦在出現(xiàn)破膜前后處于亞臨床感染狀態(tài)，無明顯的表現(xiàn)。因此早期診斷合并有感染的胎膜早破尤為重要。其中細菌感染、支原體和衣原體感染是導致生殖道炎癥的常見因素。Toll樣受體(Toll like receports，TLRs)是參與體內(nèi)的固有免疫的一類古老的蛋白質(zhì)家族。TLRs在細胞信號轉(zhuǎn)導中發(fā)揮重要的作用，是激活相關細胞分泌炎性介質(zhì)的閘門受體，其中TLR-2是TLRs家族中表達范圍最廣、識別病原微生物及其產(chǎn)物種類最多的分子之一。病理研究結果亦證實早破胎膜的特征為胎膜中細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)蛋白質(zhì)表達的低水平�；|(zhì)金屬蛋白(matrix metalloproteinases，MMPs)幾乎能降解ECM的所有成分，其中MMP-2在整個妊娠期持續(xù)表達。但PROM的具體發(fā)病機制尚未完全闡明，目前尚無理想的防治辦法。本文旨在通過研究TLR-2和MMP-2在胎膜早破患者和正常妊娠晚期胎盤和胎膜組織中的表達情況及兩者之間的關系來進一步揭示其發(fā)病機制，可能為預防與治療PROM提供研究方向。 目的 本文旨在通過研究TLR-2mRNA，MMP-2mRNA及其蛋白在足月胎膜早破組和正常晚孕組胎膜組織中的表達是否存在差異，免疫組化法定位TLR-2和MMP-2在兩組孕婦的胎盤和胎膜組織中的位置，探討兩者在胎膜早破發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其關系。 材料和方法 1.研究對象 隨機選取2012年9月─2013年1月因胎膜早破在鄭州大學第三附屬醫(yī)院住院并且以剖宮產(chǎn)術結束妊娠的足月胎膜早破孕婦30例作為實驗組(PROM組)，胎膜早破的診斷依據(jù)樂杰主編的第七版《婦產(chǎn)科學》教材。隨機抽取同期以剖宮產(chǎn)術結束妊娠的正常晚期、胎膜完整的妊娠婦女30例，作為對照組。兩組病例所有孕婦均無其他母體疾病或者產(chǎn)科并發(fā)癥。兩組孕婦均為初產(chǎn)、單活胎，剖宮產(chǎn)指征為孕婦的骨盆狹窄或者孕婦要求等。 2.方法 兩組孕婦均知情同意。所有標本的采集均在胎盤娩出后20min內(nèi)進行，選擇臍帶附著處的母體面胎盤組織，垂直剪切2塊組織(大小約2cm×2cm×2cm)，避開梗死、鈣化灶、出血等異常位置；剪切胎膜早破患者破口周圍胎膜2塊(大小約2cm×2cm)。將獲得的組織以0.9%氯化鈉溶液漂洗干凈，，無菌濾紙去除組織上的血液，1塊組織保存于10%甲醛溶液中用于石蠟包埋切片，另外1塊置于無菌凍存管—80℃保存，用于提取mRNA。光學顯微鏡下行病理學檢查用于診斷絨毛膜羊膜炎。采用Real-time PCR法檢測實驗組和對照組孕婦胎膜組織中TLR-2mRNA和MMP-2mRNA的表達。采用免疫組化法(SP法)檢測30例足月胎膜早破和30例正常組胎盤胎膜組織中TLR-2和MMP-2蛋白的定位與表達。 3.統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學上的分析。計量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計結果以均數(shù)±標準差(x s)表示。兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析進行，組間兩兩比較采用最小顯著性差異法(LSD-t法)。兩變量的相關性采用Pearson相關分析。選擇α=0.05為檢驗水準。 結果 1.PROM組和對照組孕婦一般臨床數(shù)據(jù)情況的比較 PROM組和對照組孕婦相比，PROM組年齡在23-35歲之間，平均年齡25.341±5.484歲；孕周在37-41周之間，平均孕周38.516±2.124周。同期正常的妊娠婦女作為對照組，年齡在23-35歲之間，平均年齡25.841±3.334歲，孕周在37-41周之間，平均孕周38.433±1.764周。孕時BMI分別為29.023±3.841，29.534±3.681，兩組孕婦的年齡、孕時BMI、孕周比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2.PROM組與正常對照組晚孕期胎膜組織中TLR-2mRNA，MMP-2mRNA的表達 兩組孕產(chǎn)婦胎膜組織中均可檢測到TLR-2mRNA，MMP-2mRNA的表達，PROM組TLR-2mRNA， MMP-2mRNA相對表達量分別為0.581±0.142，0.616±0.164，正常對照組分別為0.353±0.191，0.348±0.123；胎膜組織中實驗組TLR-2mRNA、MMP-2mRNA的表達水平均較對照組明顯升高，且差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。 3.PROM組與正常對照組晚孕期胎盤胎膜組織中的TLR-2與MMP-2蛋白的定位表達 附圖2為胎盤胎膜組織陰性對照和HE染色結果，陰性對照：免疫組化過程中用PBS代替一抗得到的結果；免疫組化結果顯示：TLR-2和MMP-2蛋白在PROM組及正常對照組胎盤胎膜組織中均有表達，在PROM組胎盤胎膜組織中的染色強度明顯高于正常對照組，兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。 在PROM組胎盤組織中TLR-2主要表達于合體滋養(yǎng)細胞的細胞膜、細胞質(zhì)內(nèi)，MMP-2主要表達于合體滋養(yǎng)細胞的細胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色顆粒沉著；另外在胎盤絨毛和蛻膜間質(zhì)中也偶有TLR-2表達，MMP-2在胎盤絨毛血管內(nèi)皮細胞以及間質(zhì)細胞里少量表達，TLR-2和MMP-2在PROM組胎膜組織表達于羊膜上皮細胞和絨毛膜的細胞滋養(yǎng)細胞，TLR-2、MMP-2的表達定位在實驗組、對照組基本相同，但實驗組大多細胞的細胞質(zhì)內(nèi)可明顯見到棕染的顆粒。應用病理圖像分析系統(tǒng)測定TLR-2與MMP-2的平均光密度值，測定結果如下：PROM組胎盤組織中TLR-2與MMP-2的平均光密度值分別為0.141±0.011和0.186±0.015，正常足月組TLR-2與MMP-2的平均光密度值分別為0.083±0.004和0.118±0.007，PROM組和正常足月組相比差異有顯著性(均P0.001)。胎膜組織中PROM組TLR-2與MMP-2的平均光密度值比較分別為0.318±0.007，0.486±0.015，正常足月組TLR-2與MMP-2的平均光密度值分別為0.283±0.0040.341±0.011，PROM組和正常足月組差異有顯著性(均P0.001)。胎膜組織中的TLR-2與MMP-2蛋白表達量的相關性：在正常妊娠組二者不存在相關，足月胎膜早破組中存在顯著正相關。(r=0.166，P0.05；r=0.434，P0.05) 4.絨毛膜羊膜炎患者胎膜組織中的TLR-2與MMP-2蛋白的水平變化 胎膜病理檢查結果顯示：兩組孕婦發(fā)生絨毛膜羊膜炎的共15例，其中胎膜早破組絨毛膜羊膜炎13例，感染率為21%；對照組絨毛膜羊膜炎2例，感染率為3.3%。絨毛膜羊膜炎患者胎膜中TLR-2和MMP-2的水平明顯高于非絨毛膜羊膜炎患者，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P 0.001及P 0.001)。 5.PROM組不同Apgar評分新生兒的胎膜組織中TLR-2與MMP-2蛋白的水平 胎膜早破組Apgar評分≤7分新生兒的胎膜組織中TLR-2和MMP-2的水平顯著高于Apgar評分≥8分的新生兒，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.001及P0.001)。 6.PROM組不同破膜時間的患者胎膜組織中的TLR-2與MMP-2蛋白的水平變化 隨破膜時間的延長PROM組患者胎膜組織中的TLR-2與MMP-2蛋白的水平升高，尤其是破膜時間超過24小時升高更為明顯。不同破膜時間的患者TLR-2與MMP-2蛋白的水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(均P0.001)。 結論 孕婦胎盤胎膜組織中TLR-2與MMP-2表達的增多可能促進了足月胎膜早破的發(fā)生。足月胎膜早破組TLR-2與MMP-2的表達存在顯著正相關，說明兩者可能通過某種機制共同參與調(diào)節(jié)胎膜破裂的過程。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R714.433

【參考文獻】

相關期刊論文 前9條

1 徐小麗;汪艷;;胎膜早破與生殖道解尿支原體、衣原體感染的關系[J];安徽醫(yī)藥;2012年11期

2 張雪芳;;90例胎膜早破與難產(chǎn)的關系及處理分析[J];當代醫(yī)學;2013年29期

3 王慧賢;白細胞介素-1與妊娠[J];河北醫(yī)科大學學報;1997年06期

4 曹耀輝;肖建;;MMP-9和IL-8水平與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎關系[J];河北醫(yī)藥;2007年10期

5 毛潔;許丹;凡利俊;;胎膜早破殘余羊水指數(shù)與妊娠結局相關性分析[J];交通醫(yī)學;2010年05期

6 范建輝;崔金暉;滕奔琦;陳新娟;侯紅瑛;;MMP-9和iNOS在胎膜早破胎膜組織中的表達及相關性研究[J];中國病理生理雜志;2011年10期

7 芮毅;;C-反應蛋白與早產(chǎn)胎膜早破的關系[J];中外醫(yī)學研究;2012年21期

8 呂發(fā)輝;田春芳;;胎膜早破并發(fā)絨毛膜羊膜炎的診斷進展[J];醫(yī)學綜述;2013年02期

9 溫琳;;胎膜早破556例母兒預后回顧分析[J];中國醫(yī)藥導報;2007年17期

本文編號：2412751