發(fā)布時(shí)間：2019-01-04 18:30

【摘要】：背景：卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一,在全球女性婦科腫瘤中死亡率位列第二位。由于卵巢癌早期癥狀不明顯,又尚未有有效的腫瘤標(biāo)記物來(lái)進(jìn)行預(yù)警和早期診斷,在進(jìn)展期卵巢癌患者即使接受治療,絕大部分五年生存率仍低于20%[1]。 近年來(lái),關(guān)于微小RNA(microRNA, miRNA)調(diào)控基因表達(dá)的研究成為腫瘤研究的新熱點(diǎn)。微小RNA是長(zhǎng)約19-25nt的單鏈非編碼小分子RNA,它廣泛存在于植物,非脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物中。miRNA在調(diào)節(jié)細(xì)胞分化,細(xì)胞周期,細(xì)胞凋亡中均發(fā)揮著重要作用。目前有超過(guò)900種miRNA在人體中被發(fā)現(xiàn)[2]。miR-205定位于1q32.2,是一段-uccuucauuccaccggagucug-編碼的microRNA,在不同種系中呈現(xiàn)高度保守性。miR-205作為腫瘤致癌基因或抑制基因取決于特定腫瘤環(huán)境中的靶基因表達(dá)�，F(xiàn)已有研究證實(shí)在不同的癌細(xì)胞株中miR-205發(fā)揮著促進(jìn)腫瘤或抑制發(fā)生發(fā)展的作用[3]。 本課題組前期應(yīng)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)有兩種差異蛋白Ezrin和Lamin A/C與卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。同時(shí),應(yīng)用生物信息學(xué)方法(3個(gè)獨(dú)立軟件TargetScan、DIANA-miroT、PicTar)分別預(yù)測(cè)Ezrn、Lamin A/C3'UTR有結(jié)合位點(diǎn)的miRNA,結(jié)果3個(gè)軟件同時(shí)顯示miR-205在Ezrin、Lamin A/C的3’UTR均有結(jié)合位點(diǎn)。由此推測(cè)miR-205、差異蛋白Ezrin和Lamin A/C間存在著調(diào)控關(guān)系,在卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用。 本文旨在探究miR-205對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響,以及miR-205表達(dá)與差異蛋白Ezrin和Lamin A/C間的關(guān)系。 方法：(1)培養(yǎng)人上皮性卵巢癌細(xì)胞系HO-8910(低轉(zhuǎn)移株)、HO-8910pm(高轉(zhuǎn)移株)、SKOV-3(低轉(zhuǎn)移株)及SKOV-3ip(高轉(zhuǎn)移株)4株配對(duì)的細(xì)胞系。(2) Real-time PCR檢測(cè)miR-205在四株細(xì)胞中的本底水平。(3) Real time PCR檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染miR-205mimics/inhibitor后四株細(xì)胞中miR-205的表達(dá),驗(yàn)證是否轉(zhuǎn)染成功。(4) Transwell遷移實(shí)驗(yàn)、侵襲實(shí)驗(yàn)比較細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后遷移和侵襲能力變化。(5)增殖實(shí)驗(yàn)(MTT法)比較各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后增殖能力差異。(6)平板克隆形成實(shí)驗(yàn)比較各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后克隆形成率變化。(7) Western Blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后靶蛋白Lamin A/C、Ezrin的表達(dá)水平變化。 結(jié)果：(1)在培養(yǎng)條件、接種數(shù)目、時(shí)間相同情況下,HO-8910pm和SKOV-3ip比HO-8910和SKOV-3細(xì)胞數(shù)目多、生長(zhǎng)速度快。(2)miR-205在HO-8910pm、SKOV-3ip中表達(dá)水平高于HO-8910、SKOV-3。(3)與miR-205control組相比,轉(zhuǎn)染miR-205mimics后的HO-8910、SKOV-3中miR-205的表達(dá)水平上升(P0.05)；轉(zhuǎn)染miR-205inhibitor后的HO-8910pm、SKOV-3ip中miR-205表達(dá)水平下降(P0.05)。(4)與miR-205control組相比,轉(zhuǎn)染miR-205mimics后的HO-8910、SKOV-3細(xì)胞遷移和侵襲能力增強(qiáng)(P0.05)；轉(zhuǎn)染miR-205inhibitor后的HO-8910pm、SKOV-3ip中細(xì)胞遷移和侵襲能力減弱(P0.05)。(5)與miR-205control組相比,轉(zhuǎn)染miR-205mimics后的HO-8910細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)(P0.05)；轉(zhuǎn)染miR-205mimics后的SKOV-3細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；轉(zhuǎn)染miR-205inhibitor后的H0-8910pm、SKOV-3ip細(xì)胞增殖能力減弱,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(6)與miR-205control相比,轉(zhuǎn)染miR-205mimics后的HO-8910、SKOV-3克隆形成數(shù)增多；與miR-205control相比,轉(zhuǎn)染miR-205inhibitor后的HO-8910pm、SKOV-3ip克隆形成數(shù)減少(P0.05)。(7)與miR-205control組相比,轉(zhuǎn)染miR-205mimics后的HO-8910、SKOV-3中LaminA/C、Ezrin表達(dá)水平下降；轉(zhuǎn)染miR-205inhibitor后的HO-8910pm中Lamin A/C、Ezrin表達(dá)水平增高；SKOV-3ip轉(zhuǎn)染前后LaminA/C、Ezrin表達(dá)水平無(wú)明顯變化。 結(jié)論：(1)miR-205能增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移與侵襲能力。(2)miR-205能下調(diào)卵巢癌細(xì)胞中Lamin A/C、Ezrin蛋白表達(dá)水平。(3)miR-205促卵巢癌侵襲的部分途徑是通過(guò)調(diào)控Lamin A/C、Ezrin蛋白表達(dá)水平實(shí)現(xiàn)的。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬力;劉月平;張祥宏;邢凌霄;王俊靈;耿翠芝;;RhoA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)乳腺癌細(xì)胞Ezrin表達(dá)的影響[J];癌癥;2009年02期

2 翟建文;楊曉剛;楊福申;胡基剛;華文霞;;Ezrin、E-cadherin在食管鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[J];癌癥;2010年03期

3 Jingjing Liu;Qixin Mao;Yan Liu;Xiaomeng Hao;Sheng Zhang;Jin Zhang;;Analysis of miR-205 and miR-155 expression in the blood of breast cancer patients[J];Chinese Journal of Cancer Research;2013年01期

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本文編號(hào)：2400639