【摘要】：目的： 制備一種靶向卵巢癌的新型納米脂質(zhì)微泡造影劑，鑒定理化特性及其對卵巢癌細胞的靶向性，為實現(xiàn)腫瘤血管外顯影研究提供了一個前期基礎(chǔ)。 方法： 1.將一定比例的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、生物素化二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-Biotin)及甘油、PBS等混合均勻，采用冷凍干燥法、機械振蕩法制備非靶向脂質(zhì)微泡造影劑。 2.光鏡下觀察微泡形態(tài)分散度、均一性，Zeta檢測儀檢測粒徑大小范圍。 3.將一定比例的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、生物素化二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG2000-Biotin)及甘油、PBS等混合均勻，采用冷凍干燥法、機械振蕩法、生物素-親和素-生物素橋連法，制備非靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑，將生物素化的促黃體生成素釋放激素（luteinzing hormone-releasing hormone, LHRH）抗體與非靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑連接，制備出卵巢癌靶向的納米脂質(zhì)微泡造影劑。 4.光鏡下觀察微泡形態(tài)分散度、均一性及濃度以及室溫下保存時間，Zeta檢測儀檢測粒徑大小范圍、表面電位。 5.流式細胞術(shù)分別檢測非靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑、靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑與二抗結(jié)合率。 6.光鏡下觀察靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑與人卵巢癌OVCAR-3細胞結(jié)合情況。 7.預(yù)先用生物素化LHRH抗體與人卵巢癌OVCAR-3細胞飽和結(jié)合，再次觀察靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑與人卵巢癌OVCAR-3細胞結(jié)合情況。 結(jié)果： 1.非靶向脂質(zhì)微泡造影劑是一種乳白色混懸液，400倍光鏡觀察及Zeta檢測儀檢測機械振蕩60s、90s、120s，微泡分布均勻，無團聚，單個微泡的外觀圓整，粒徑范圍粒徑范圍分別為329～1008nm，295～468nm，369～618nm，157～268nm，400倍光鏡及觀察Zeta檢測儀檢測機械振蕩150s，微泡分布不均勻，無團聚，單個微泡的外觀圓整，粒徑范圍60～896nm。 2.非靶向納米級脂質(zhì)微泡造影劑和靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑微泡成功制備，兩種微泡的外觀圓整，分布均勻。Zeta檢測儀檢測粒徑范圍分別為295～468nm和369～618nm，集中于360nm與508nm，兩者粒徑大小比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05 3.光鏡下觀察，微泡形狀分散均勻和室溫保存時間長。兩種微泡電位均為-14.6mV。室溫下保存7d時，，靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑理化特性與剛制備時無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。 4.二抗與非靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑、靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑結(jié)合率分別為0.83%、75.6%。 5.光鏡下OVCAR-3細胞周圍可見靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑圍繞或黏附，呈花環(huán)樣結(jié)構(gòu)。 6.光鏡下生物素化的LHRH抗體預(yù)先阻斷OVCAR-3細胞不能與靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑結(jié)合。 結(jié)論： 1機械振蕩90s為制作非靶向脂質(zhì)微泡造影劑最佳時間，即為制備非靶向納米脂質(zhì)微泡機械振蕩時間。 2.通過冷凍干燥法、機械振蕩法和生物素-親和素橋連法，可成功制備靶向卵巢癌的納米脂質(zhì)微泡造影劑此微泡粒徑小、穩(wěn)定性高。 3.靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑體外能高效靶向人卵巢癌OVCAR-3細胞。 4.被生物素化的LHRH抗體阻斷的飽和卵巢癌OVCAR-3細胞不能結(jié)合靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑。 5.靶向納米脂質(zhì)微泡造影劑通過LHRH介導(dǎo)與卵巢癌OVCAR-3細胞結(jié)合。
[Abstract]:Purpose: preparing a novel nano lipid micro-bubble contrast agent for targeting ovarian cancer, identifying physicochemical properties and targeting of ovarian cancer cells, The foundation. Method: 1. A certain proportion of dipalmitate, choline (DPPC), streptavidin (DSPE-NHS-Bioin) and glycerol, PBS, etc. were mixed evenly, and the non-target was prepared by freeze drying and mechanical oscillation. The dispersion, homogeneity and Zeta of microvesicle were observed under light microscope. The size range of the particle size is detected by a detector. 3. A certain proportion of the dipalmitate, the phospholipid, the choline (DPPC), the Biotin dipalmitate and the ethanolamine (DSPE-NHS-Bioin) and the glycerol, the PBS and the like are uniformly mixed, the freeze drying method and the mechanical oscillation method are adopted, biotin-avidin-biotin bridging method is used to prepare non-targeted nano-lipid micro-bubble contrast agent, and biotin-induced luteinizing hormone releasing hormone (LAMP) antibody is connected with non-targeting nano lipid micro-bubble contrast agent to prepare egg The morphology, homogeneity and concentration of microvesicles and preservation time at room temperature were observed under light microscope. Zet a Detector detects particle size range, surface potential. 5. Flow cytometry respectively detects the non-targeted nano-lipid micro-bubble building Contrast ratio of contrast agent and nano-lipid micro-bubble contrast agent to two anti-binding agents: 6. Under light microscope, it is observed to target nano-lipid. Microbubble contrast agent binding to human ovarian cancer OVCAR-3 cells. 7. Pre-use the biotin-labeled antibody to bind to human ovarian cancer OVCAR-3 cells, and then observe the target again. rice lipoid Results: 1. Non-targeting lipid micro-bubble contrast agent is a milky white suspension liquid, 400 times light microscope observation and Zeta detector detect mechanical oscillation 60s, 90s, 120s, micro bubble distribution is uniform, no agglomeration, the appearance of single micro bubble is round, the particle size range is 329-1008, respectively. nm, 295 ~ 468nm, 369 ~ 618nm, 157 ~ 268nm, 400 times light microscope and observation of Zeta detector to detect mechanical oscillation 150s, micro bubble The distribution is uneven, no agglomeration, the appearance of a single micro bubble is round, the particle size range is 60-896nm. The shadow agent and the target nano lipid micro-bubble contrast agent microvesicle are successfully prepared, the appearance of the two micro bubbles is round, the distribution is uniform, and the detection particle size range of the Zeta detector is 295-468nm and 369-618nm, respectively, It is focused on the size of 360nm and 508nm. The difference in economics (P <0.05). Under light microscope, the micro-bubble shape was dispersed uniformly and the preservation time of room temperature was long. The two micro-bubble potentials were-14. 6mV. 7d, there was no statistical difference between the physical and chemical properties of the targeting Naomi microvesicles (P> 0.05). The combination rate of non-targeted nano-lipid micro-bubble contrast agent and target nano-lipid micro-bubble contrast agent was 0. 83%, 75.6%, respectively. 5. There is a rosette-like structure around OVCAR-3 cells under light microscope. 6 Under light microscope, the avidin preblocking OVCAR-3 cells could not be combined with the targeted nano-lipid micro-bubble contrast agent. Conclusion: 1 mechanical oscillation 90s is the best time for the preparation of non-target lipid micro-bubble contrast agent, that is, to prepare the non-targeting nano-lipid micro-bubble mechanical oscillation time. The targeted ovaries can be successfully prepared by freeze drying, mechanical oscillation and biotin-avidin bridging. The nano-lipid micro-bubble contrast agent of the cancer is small in particle size and high in stability. 3. Targeted nano-lipid micro-bubble contrast agent can target people in vitro Ovarian cancer OVCAR-3 cells. 4. Saturated ovaries blocked by Biotin Antibody
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.31

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭燕麗;范校周;;超聲分子影像學(xué):現(xiàn)狀與將來[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2014年01期

2 張勁宜;張麗平;朱元方;李文娟;黃舒穎;趙雅靜;李攀;王志剛;;靶向卵巢癌的納米超聲微泡造影劑的制備及其體外尋靶研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2013年23期

3 張勁宜;朱元方;;靶向超聲微泡在卵巢癌診斷治療中的研究進展[J];國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2013年06期

4 劉娟;吳鳳林;;超聲激勵微泡“空化效應(yīng)”在腫瘤治療方面的研究進展[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年03期

5 王占科;;超聲微泡及其在分子影像中應(yīng)用[J];功能與分子醫(yī)學(xué)影像學(xué)(電子版);2013年03期

6 王靜云;付雪;包永明;;原子轉(zhuǎn)移自由基聚合(ATRP)陽離子化菊粉作為非病毒基因載體的研究[J];高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報;2014年10期

7 夏江華;馮軍;;多肽偶聯(lián)藥物的研究進展[J];世界臨床藥物;2014年09期

8 李文娟;張勁宜;朱元方;蔡麗萍;趙雅靜;李攀;王志剛;;自制靶向卵巢癌的納米超聲造影劑特性及裸鼠體內(nèi)造影增強實驗[J];中國介入影像與治療學(xué);2013年12期

9 田迎;滕兆剛;盧光明;鄭玲;;介孔二氧化硅納米材料分散性對293T細胞凋亡的影響[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2014年01期

10 陳文穎;鄭凱;黃敏;;靶向MAdCAM-1超聲造影劑的制備及其體外尋靶實驗研究[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 張孝進;功能化脂肪族聚碳酸酯的合成及其性能研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 劉永亮;微泡介導(dǎo)超聲空化對前列腺通透性影響的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2012年

3 牛誠誠;多功能超聲造影劑顯像及治療腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

4 李紅陽;載HSV1-TK基因的納米超聲分子探針靶向識別并殺滅HIFU治療肝癌后殘留病灶的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

5 彭琛;多功能PAMAM/金納米復(fù)合材料的制備、表征及其在生物CT成像中的應(yīng)用[D];東華大學(xué);2013年

6 王輝;高效、安全的樹形高分子基因及藥物載體的制備與應(yīng)用[D];華東師范大學(xué);2014年

7 王銘;小鼠Ca761/L乳腺癌模型的超聲造影及病理學(xué)對照研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

8 張松;CD105靶向金磁納米粒的合成及其對乳腺癌血管生成的MRI和CT實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 羅利紅;超聲聲孔效應(yīng)增敏兔VX_2腫瘤化療效果的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

2 潘弟儀;超聲造影劑—全氟丙烷脂質(zhì)微泡的制備與評價[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

3 王小艷;超聲微泡提高SelS基因靶向轉(zhuǎn)染2型糖尿病大鼠胸主動脈效率的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

4 黃曉儀;淀粉基載體材料與基因復(fù)合體結(jié)構(gòu)對基因細胞轉(zhuǎn)染特性的影響[D];華南理工大學(xué);2013年

5 王龔;診斷超聲聯(lián)合微泡對大鼠皮下移植肝癌血管通透性影響及其機制的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 李浪;PSMA抗體靶向的納米微泡的制備及其特異性診斷前列腺癌的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 張景瑤;VEGFR-2靶向載5-FU聚乳酸—羥基乙酸超聲造影劑制備及體外實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 趙婉辰;疏水物質(zhì)攜帶納米氣泡及釋放氣體能力的研究[D];上海師范大學(xué);2013年

9 張霞;脂質(zhì)微泡—雙配體紫杉醇納米粒復(fù)合物的制備及其體外生物性能評價[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

10 葉紅霞;LHRHa靶向鴉膽子油脂質(zhì)體對人卵巢癌A2780/DDP細胞增殖及凋亡的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號：2308092