【摘要】：研究目的 1、宮內生長受限(intrauterine growth restriction,IUGR)是臨床常見并發(fā)癥，而且大多數IUGR胎兒出生后即為小于胎齡兒(small for gestationalage,SGA)。近年來，IUGR對胎兒腦發(fā)育的不良影響受到高度關注，明顯增加兒童神經發(fā)育障礙和不良神經心理的發(fā)生風險，導致學習和記憶功能障礙，以及成年期較低的學術成就和較差的專業(yè)表現等不良預后。但IUGR是否影響胎兒腦功能的發(fā)育尚不明確。在本項研究中，通過應用振幅整合腦電圖(amplitude integratedelectroencephalography, aEEG)，監(jiān)測生后3d內足月SGA腦功能的變化，并與同期出生的足月適于胎齡兒(appropriate for gestational age,AGA)對比，以了解IUGR是否會對胎兒腦功能發(fā)育造成不良影響。 2、IUGR所致腦損傷始于宮內，故出生后所采取措施難以從根本上改善IUGR患兒的神經系統(tǒng)不良預后，而積極產前干預是改善IUGR預后的根本途徑。�；撬崾翘�-新生兒中樞神經系統(tǒng)發(fā)育的必需氨基酸，而蛋白激酶A-(protein kinase A)-鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseIII)/c-fos（PKA-CaMKⅡ/c-fos）信號通路是調節(jié)中樞神經系統(tǒng)發(fā)育的重要途徑之一，故本研究在國家自然科學基金（81170577）的資助下，擬通過建立IUGR模型(SD大鼠)，采用實時定量聚合酶鏈反應(real time-Polymerase chainreaction,RT-PCR)、蛋白免疫印跡(western-blot,WB)及免疫組化的方法，檢測孕鼠IUGR胎鼠腦組織中�；撬釋KA、CaMK II、c-fos關鍵信號分子和腦組織神經元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表達的影響，以探討孕鼠補充�；撬崾欠窨赏ㄟ^調節(jié)該信號通路的活性而促進IUGR胎鼠腦細胞增殖，為產前補充�；撬岽龠MIUGR胎兒腦發(fā)育提供新的理論依據。 研究方法 1、臨床研究:選擇2012年08月01日至2013年02月28日在北京軍區(qū)總醫(yī)院附屬八一兒童醫(yī)院新生兒科住院、胎齡37～40+6周的足月小于胎齡兒（SGA）60例和適于胎齡兒（AGA）40例。2組患兒均無出生時無窒息史，并除外驚厥、顱內出血、腦室周圍白質軟化、顱內感染、膽紅素腦病及先天性畸形等疾病。使用CFM6000型振幅整合腦電圖(amplitude-integrated electroencephalography,aEEG)儀于生后3d內進行監(jiān)測記錄。比較2組嬰兒腦電波形的連續(xù)性、睡眠-覺醒周期(sleep wake cycling,SWC)、爆發(fā)間期(interburst interval,IBI)、最低和最高電壓等指標的差異。所有資料在Excel上建立數據文件，使用SPSS16.0軟件進行統(tǒng)計學處理，P0.05認為有統(tǒng)計學意義。 2、實驗研究：采用全程低蛋白飲食法建立IUGR模型，將雌性大鼠隨機分為對照組、IUGR組及IUGR+孕鼠補充�；撬峤M(�；撬峤M)，每組5只。 采用RT-PCR監(jiān)測各組胎鼠腦組織PKA、CaMKⅡ、c-fos-mRNA的表達水平，WB方法檢測各組胎鼠腦組織PKA、CaMK II、c-fos蛋白表達，免疫組織化學方法檢測各組胎鼠腦組織PKA、CaMK II、c-fos、NSE陽性細胞數。 研究結果 1、臨床研究結果： ⑴SGA連續(xù)性腦電圖的出現率、睡眠-覺醒周期出現率低于適于胎齡兒，爆發(fā)間期長于適于胎齡兒，最高電壓與最低電壓均低于適于胎齡兒，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 ⑵對出生體重低于同胎齡第5～10百分位、第3～5百分位和低于第3百分位者的aEEG指標分別進行了比較，結果表明不同出生體重百分位小于胎齡兒連續(xù)性腦電圖的出現率、睡眠-覺醒周期的出現率、爆發(fā)間期以及最低和最高電壓差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 ⑶對不同胎齡SGA各指標分別比較，除最低電壓外，其它指標均無差異（P0.05）。對不同胎齡AGA各指標分別比較，均無差異（P0.05）。 ⑷不同胎齡時，~37+6W組患兒，其SGA組與AGA組最低電壓無明顯差別（P0.05），其他各胎齡組(~38+6W、~39+6W、~40+6W)患兒，其SGA組連續(xù)性腦電圖的出現率、睡眠-覺醒周期出現率低于AGA組，爆發(fā)間期長于AGA組，最高電壓與最低電壓均低于AGA組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 ⑸對單純低血糖組（血糖＜2.2μmol/L、但未發(fā)生低血糖腦�。┡c正常血糖組各項指標進行比較，發(fā)現aEEG連續(xù)性、周期性、爆發(fā)間期、最高電壓與最高電壓等指標之間差異均無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 ⑹對單純高膽紅素血癥（血膽紅素值＞220μmol/L、但未發(fā)生膽紅素腦�。┡c正常血膽紅素組各項指標進行比較，發(fā)現aEEG連續(xù)性、周期性、爆發(fā)間期、最高電壓與最高電壓等指標之間差異均無統(tǒng)計學意義（P0.05）。 2、實驗研究結果： ⑴RT-PCR：IUGR組胎鼠腦組織PKA、CaMK II、c-fos-mRNA表達水平均明顯降低（P＜0.05），而�；撬峤M各指標-mRNA表達均顯著增高（P＜0.05）。 ⑵WB：IUGR組胎鼠腦組織中PKA、CaMK II、c-fos蛋白表達水平均顯著下降（P＜0.05），而孕鼠補充�；撬峥娠@著增加其腦組織中PKA、CaMK II、c-fos蛋白表達水平（P＜0.05）。 ⑶免疫組化： PKA陽性表達主要位于胞漿，，呈棕黃色。IUGR胎鼠大腦海馬內僅有少量PKA陽性細胞分布，�；撬峤MPKA陽性細胞數量明顯增多(P0.05)。 CaMK II陽性表達也主要位于細胞質，呈棕黃色，IUGR胎鼠大腦海馬內僅有少量CaMK II陽性細胞分布，而牛磺酸組CaMKⅡ陽性細胞數目明顯增加(P＜0.05)。 c-fos陽性表達主要位于細胞核，呈棕黃色，只有少數的c-fos陽性細胞在IUGR胎鼠大腦海馬中分布，而孕鼠補充牛磺酸后c-fos陽性細胞數量較模型組明顯增多(P0.05)。 NSE陽性表達主要位于細胞質，呈棕黃色，IUGR組胎鼠腦組織NSE陽性細胞數較對照組明顯減少(P0.05)，而�；撬峤M胎鼠腦組織中NSE陽性細胞數較IUGR組明顯增多(P0.05)。 結論 1、IUGR可抑制胎兒腦功能發(fā)育：表現為患兒腦電波連續(xù)性差、缺乏睡眠-覺醒周期、爆發(fā)間期延長、最高電壓與最低電壓均較低等。 2、孕鼠補充牛磺酸可上調IUGR胎鼠腦組織PKA、CaMK II、c-fos-mRNA及蛋白表達水平，并增加PKA、CaMK II、c-fos、NSE陽性細胞數，提示牛磺酸可能通過促進PKA-CaMK Ⅱ/c-fos信號通路活性的而促進IUGR胎鼠神經元增殖。 3、本研究為產前補充�；撬岽龠MIUGR胎兒腦發(fā)育提供了進一步的理論支持。
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【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R714.5

【參考文獻】

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本文編號：2298595