發(fā)布時間：2018-10-14 18:34

【摘要】：目的檢測切除修復(fù)交叉互補(bǔ)1(ERCC1)基因在人卵巢上皮癌順鉑(DDP)耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP及其親本細(xì)胞株SKOV3中的表達(dá),探討ERCC1基因在卵巢上皮癌順鉑耐藥中的意義以及有效沉默ERCC1基因能否有效逆轉(zhuǎn)SKOV3/DDP細(xì)胞對DDP耐藥。方法于2013—2014年在南方醫(yī)科大學(xué)采用實(shí)時熒光定量PCR(RT-PCR)和Western印跡法檢測ERCC1 m RNA和蛋白在SKOV3/DDP及SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)。人工構(gòu)建3個靶向沉默ERCC1基因的短發(fā)夾狀RNA(sh RNA)質(zhì)粒表達(dá)載體,慢病毒載體法轉(zhuǎn)染至SKOV3/DDP細(xì)胞,RT-PCR和Western印跡法檢測ERCC1基因水平并挑選沉默效果最佳的表達(dá)載體。RT-PCR和Western印跡法檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后SKOV3/DDP細(xì)胞中ERCC1基因的表達(dá),CCK-8法檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞對DDP的耐藥性。結(jié)果 SKOV3/DDP細(xì)胞中ERCC1 m RNA和蛋白的表達(dá)量明顯高于SKOV3,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染ERCC1 sh RNA后的SKOV3/DDP細(xì)胞,ERCC1的m RNA及蛋白的表達(dá)量明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。細(xì)胞活性檢測提示特異性沉默ERCC1基因能增加SKOV3/DDP細(xì)胞對順鉑的敏感性(P0.05)。結(jié)論 ERCC1基因在SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)明顯升高,有效沉默ERCC1基因能有效逆轉(zhuǎn)SKOV3/DDP細(xì)胞對DDP耐藥,增加卵巢上皮癌DDP耐藥細(xì)胞對DDP的敏感性,為卵巢上皮癌耐藥的治療提供新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective to detect the expression of excision repair cross complementary 1 (ERCC1) gene in cisplatin (DDP) resistant human ovarian carcinoma (OECC) cell line SKOV3/DDP and its parent cell line SKOV3. To investigate the significance of ERCC1 gene in cisplatin resistance in ovarian epithelial carcinoma and whether the effective silencing of ERCC1 gene can effectively reverse the resistance of SKOV3/DDP cells to DDP. Methods Real-time fluorescence quantitative PCR (RT-PCR) and Western blot were used to detect the expression of ERCC1 m RNA and protein in SKOV3/DDP and SKOV3 cells from 2013 to 2014. Three short hairpin RNA (sh RNA) expression vectors targeting silencing ERCC1 gene were constructed. Lentivirus vector was transfected into SKOV3/DDP cells, RT-PCR and Western blotting were used to detect the level of ERCC1 gene and the best expression vector was selected. RT-PCR and Western blotting were used to detect the expression of ERCC1 gene in SKOV3/DDP cells after stable transfection, and CCK-8 assay was used to detect the resistance of transfected cells to DDP. Results the expression of ERCC1 m RNA and protein in SKOV3/DDP cells was significantly higher than that in SKOV3, cells (P0.01). After stable transfection of ERCC1 sh RNA, the expression of m RNA and protein of ERCC1 in SKOV3/DDP cells decreased significantly (P0.01). Specific silencing of ERCC1 gene increased the sensitivity of SKOV3/DDP cells to cisplatin (P0.05). Conclusion the expression of ERCC1 gene in SKOV3/DDP cells was significantly increased. Effectively silencing ERCC1 gene could effectively reverse the drug resistance of SKOV3/DDP cells to DDP, increase the sensitivity of DDP resistant cells to DDP, and provide a new target for the treatment of ovarian epithelial carcinoma.
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué);南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院;廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【分類號】：R737.31

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本文編號：2271281