【摘要】：研究背景卵巢癌系女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一,其死亡率位高不下,較高的侵襲性和轉(zhuǎn)移性是導(dǎo)致患者以后不良的主要因素。大約75%左右患者一經(jīng)診斷已為晚期,由于患者已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,致使治療棘手,患者已失去最佳治療時(shí)機(jī)預(yù)后極差。因此,了解卵巢癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制對(duì)臨床治療及提高患者預(yù)后有著十分重要的作用。腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的多因素過(guò)程,趨化因子則在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用�；|(zhì)細(xì)胞衍生因子SDF-1(stromal derived factor-1,又稱CXCR12)作為趨化因子家族中的一員,已成為近些年來(lái)研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。SDF-1主要與其相應(yīng)的受體CXCR4結(jié)合從而誘導(dǎo)卵巢癌的轉(zhuǎn)移進(jìn)程,這一過(guò)程主要由于激活了下游的p38MAPK/PI-3K信號(hào)通路。p38MAPK/PI-3K信號(hào)通路被公認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中一條經(jīng)典的信號(hào)通路,缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)發(fā)揮其作用被報(bào)道也依靠其上游此通路的激活作用。鑒于兩者發(fā)揮作用依賴共同的信號(hào)通路,我們?cè)囅雰烧呤欠窬哂邢嚓P(guān)性,其相關(guān)機(jī)制是否為p38MAPK/PI-3K信號(hào)通路作用?因此我們的實(shí)驗(yàn)主要研究SDF-1-CXCR4與HIF-1在卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中相互作用及機(jī)制,為卵巢癌的臨床治療提供新的思路。本實(shí)驗(yàn)主要研究SDF-1α與HIF-1α在卵巢癌中的相關(guān)作用及其機(jī)制,首次將兩者在卵巢癌中聯(lián)系起來(lái),本研究證明了兩者在卵巢癌組織中呈正相關(guān),并對(duì)其具體通路進(jìn)行了研究,闡明了兩者間作用機(jī)制。研究目的1.SDF-1α與HIF-1α在卵巢癌組織中的表達(dá)是否相關(guān)。2.SDF-1-CXCR4生物軸是否會(huì)激活HIF-1的表達(dá)。3.HIF-1轉(zhuǎn)錄和表達(dá)的增加是否會(huì)促進(jìn)CXCR4的表達(dá)。4.SDF-1對(duì)PI3K/AKT、MAPK信號(hào)通路和HIF-1激活作用是否一致5.探討HIF-1是否會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)CXCR4的表達(dá)以及VEGF的表達(dá)從而促進(jìn)細(xì)胞的遷移。研究方法1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)卵巢癌組織中SDF-α1與HIF-1α的表達(dá);2.實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)各個(gè)細(xì)胞組中HIF-1α的m RNA水平。3.運(yùn)用Western-blot檢測(cè)細(xì)胞中AKT/p-AKT、p-38/p-p38、HIF-1α、CXCR4的表達(dá)水平。4.采用ELISA檢測(cè)VEGF的含量。5.Tranwell侵襲小室、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞的遷移。研究結(jié)果1.SDF-1α與HIF-1α在卵巢癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.475,P0.01);2.q RT-PCR結(jié)果證明,隨著加入外源性SDF-1量及時(shí)間增加,HIF-1α的m RNA水平依次增加(P0.05)。3.Western-blot分析顯示,control、control+SDF-1、control+CXCR4封閉抗體三組中,control+SDF-1組中p-AKT、p-p38量明顯增高(P0.01);control、control+SDF-1、control+CXCR4封閉抗體、control+SDF-1α+LY294002四組中,control+SDF-1組中HIF-1水平明顯增高(P0.01);control+SDF-1、卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染HIF sh RNA+SDF-1兩組中,control+SDF-1組CXCR4量明顯增高(P0.01)。4.ELISA檢測(cè)結(jié)果證明,control+SDF-1、卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染HIF sh RNA+SDF-1兩組中,control+SDF-1組VEGF量明顯增高(P0.05)。5.Tranwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果:SDF-1組較空白組和對(duì)照組HIF sh RNA+SDF-1明顯增強(qiáng),有顯著性差異(P0.01)。6.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果:對(duì)于12h、24h、36h后劃痕處的距離進(jìn)行分析SDF-1組較空白組和對(duì)照組HIF sh RNA+SDF-1明顯增強(qiáng),有顯著性差異(P0.05)。結(jié)論1.上皮性卵巢癌組織中SDF-1α和HIF-1α呈正相關(guān)。2.SDF-1-CRCX4生物軸促進(jìn)HIF-1α表達(dá)。3.SDF-1促進(jìn)PI3K/AKT、MAPK信號(hào)通路和HIF-1激活。4.HIF-1促進(jìn)CXC4及VEGF的表達(dá)從而促進(jìn)細(xì)胞的遷移。
[Abstract]:The research background of ovarian cancer is one of the malignant tumors of female reproductive system. The mortality rate is high, the higher invasion and metastasis are the main factors that cause the patient's bad. About 75% of the patients have been diagnosed as late, because the patients have had distant metastasis, which makes the treatment difficult and the patient has lost the best treatment time. Therefore, it is very important to understand the mechanism of ovarian cancer metastasis to the clinical treatment and to improve the prognosis of the patients. Metastasis is a complex multifactor process, and chemokine plays a vital role in the process of tumor metastasis. The matrix cell derived factor SDF-1 (stromal derived factor-1, also known as CXCR12) A member of the chemokine family has become a hot spot in recent years and the focus of.SDF-1 is mainly associated with its corresponding receptor CXCR4 to induce ovarian cancer metastasis. This process is mainly due to the activation of the downstream p38MAPK/PI-3K signaling pathway.P38MAPK/PI-3K signal is recognized as a classic in the process of tumor metastasis. The role of -1 (hypoxia inducible factor-1, HIF-1) is reported to depend on the activation of the upstream pathway. In view of the dependence of the two on the common signal pathway, we try to think whether the two are related, and whether the phase switching system is a p38MAPK/PI-3K signaling pathway? The experiments mainly study the interaction and mechanism of SDF-1-CXCR4 and HIF-1 in ovarian cancer cell metastasis and provide new ideas for the clinical treatment of ovarian cancer. This experiment mainly studies the relationship between SDF-1 alpha and HIF-1 alpha in ovarian cancer and its mechanism. The two are first linked in ovarian cancer. This study proves that both of them are in the ovarian cancer group. There is a positive correlation in the fabric, and the specific pathways are studied and the mechanism of interaction between the two is clarified. Whether or not the expression of 1.SDF-1 alpha and HIF-1 a in ovarian cancer tissue is related to whether the.2.SDF-1-CXCR4 biological axis activates HIF-1 expression and the increase of.3.HIF-1 transcription and expression will promote the expression of CXCR4 in.4.SDF-1 to PI3K/AKT, MAPK Whether the signal pathway and HIF-1 activation are consistent 5. to explore whether HIF-1 can further promote the expression of CXCR4 and the expression of VEGF to promote cell migration. Method 1. the expression of SDF- alpha 1 and HIF-1 alpha in ovarian cancer tissues was detected by immunohistochemistry; 2. real-time quantitative RT-PCR was used to detect the m RNA level of HIF-1 alpha in each cell group. .3. used Western-blot to detect the expression level of AKT/p-AKT, p-38/p-p38, HIF-1, and CXCR4 in the cell.4. using ELISA to detect the VEGF content.5.Tranwell invasion of the small chamber and the scratch test to detect the migration of the cells. Adding exogenous SDF-1 and increasing the time, the m RNA level of HIF-1 alpha increased in turn (P0.05).3.Western-blot analysis showed that control, control+SDF-1, control+CXCR4 closed antibody three groups, control+SDF-1 group p-AKT, p-p38 volume increased significantly. In the group control+SDF-1, the level of HIF-1 increased significantly (P0.01), and control+SDF-1, in the HIF sh RNA+SDF-1 two group transfected with ovarian cancer cells, the CXCR4 content of control+SDF-1 group increased significantly (P0.01).4.ELISA detection results. The results of the invasion experiment: the HIF sh RNA+SDF-1 in the SDF-1 group was significantly higher than that in the blank group and the control group. There was a significant difference (P0.01).6. scratch test results: the distance between the 12h, 24h, and the scratch marks after 36h was analyzed. The SDF-1 group was significantly enhanced in the SDF-1 group than the blank group and the control group, and there were significant differences. Conclusion 1. epithelial ovarian cancer tissues were found. The positive correlation of SDF-1 alpha and HIF-1 alpha to.2.SDF-1-CRCX4 biological axis promotes the expression of HIF-1 a.3.SDF-1 to promote PI3K/AKT, MAPK signaling pathway and HIF-1 activate.4.HIF-1 to promote the expression of CXC4 and VEGF, thus promoting cell migration.
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：2122807