【摘要】：為探索子癇前期孕婦胎盤病變的發(fā)病機制,我們模擬體內缺血再灌注微環(huán)境,在體外建立胎盤滋養(yǎng)細胞HTR8/SVneo缺氧復氧模型,以探究缺氧復氧對細胞自噬的誘導作用及對細胞生長的影響。將實驗分為對照組、缺氧復氧組及自噬抑制劑3-MA+缺氧復氧組,應用吖啶橙染色及LC3-Ⅱ免疫熒光染色檢測經處理24 h后細胞自噬水平,MTT法檢測細胞增殖能力,Real time PCR檢測自噬基因Beclin-1、LC3-Ⅱ的表達,Western blot分析相應自噬蛋白的表達。結果顯示缺氧復氧組HTR8/SVneo細胞自噬水平明顯升高(p0.01),伴隨Beclin-1、LC3-Ⅱ基因及蛋白表達顯著增高(p0.01),細胞增殖同時顯著受抑(p0.01),而加入3-MA后缺氧復氧組細胞自噬水平明顯受抑(p0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ基因及蛋白表達顯著下降(p0.01),細胞增殖能力顯著提高(p0.01)。這表明滋養(yǎng)細胞HTR8/SVneo在缺氧復氧環(huán)境中啟動細胞自噬,過度自噬時可能通過誘導Ⅱ型程序性死亡影響細胞增殖,當自噬被抑制后,細胞增殖能力明顯恢復。
[Abstract]:In order to explore the pathogenesis of placental lesions in preeclampsia, we simulated the microenvironment of ischemia reperfusion in the body and established the HTR8/SVneo hypoxia reoxygenation model in vitro to explore the effect of hypoxia reoxygenation on the induction of autophagy and the effect on cell growth. The experiment was divided into the control group, the hypoxia reoxygenation group and the autophagy inhibitor 3-. MA+ hypoxia reoxygenation group, using acridine orange staining and LC3- II immunofluorescence staining to detect the autophagy level of cells after treatment 24 h, MTT method to detect cell proliferation, Real time PCR detection of autophagic gene Beclin-1, LC3- II expression, Western blot analysis of the corresponding autophagic protein expression. Results showed the level of autophagy in the hypoxia reoxygenation group. Significantly increased (P0.01), with Beclin-1, LC3- II gene and protein expression increased significantly (P0.01), cell proliferation was significantly inhibited (P0.01), but after the addition of 3-MA, the level of autophagy in the anoxic reoxygenation group was significantly inhibited (P0.01), Beclin-1, LC3- II gene and protein expression significantly decreased (P0.01), cell proliferation ability significantly increased (P0.01). This indicates that the proliferation of cells (P0.01). The cultured cell HTR8/SVneo initiating autophagy in the anoxic reoxygenation environment may affect cell proliferation by inducing type II programmed death. When autophagy is suppressed, the cell proliferation ability is obviously restored.
【作者單位】： 深圳市婦幼保健院產科;
【基金】：廣東省醫(yī)學科研基金項目(B2013354)資助
【分類號】：R714.244

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本文編號：2122108