本文選題：卵巢癌 + Genistein��； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：在婦科惡性腫瘤中死亡率最高的當(dāng)屬卵巢癌。因其發(fā)生發(fā)展具有隱匿性的特點(diǎn)，約70%的患者在發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬于晚期（FIGO分期IIB-IV期），其五年生存率不到40%[1]。腫瘤減滅術(shù)聯(lián)合術(shù)后化療成為卵巢癌治療的標(biāo)準(zhǔn)方案。靜脈化療復(fù)發(fā)率較高，腹腔化療可以延長(zhǎng)無(wú)瘤生存期并延長(zhǎng)總生存率，但其毒副作用較大，其應(yīng)用受到限制，因此，尋找低毒有效抗癌制劑成為當(dāng)前卵巢癌治療研究的重要課題。 大豆中天然存在的黃酮類化合物主要有3種，即大豆甙類（daidzin）、染料木甙類（genistin）、黃豆甙類（glycitin），其中又以染料木黃酮（genistein）含量最多，活性最強(qiáng)，其化學(xué)名為4,5,7-三羥基異黃酮。研究表明genistein具有多種生物學(xué)活性，如雌激素樣作用、抗雌激素樣作用、抗氧化和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期等，近年來(lái)因其顯著的防癌抗癌效果而倍受關(guān)注。然而genistein水溶性差，口服吸收效率較低。在絕大多數(shù)的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中通常利用二甲基亞砜（DMSO）進(jìn)行溶解，但是DMSO對(duì)細(xì)胞的毒副作用不可忽視，不僅影響實(shí)驗(yàn)效果，而且也限制藥物的臨床應(yīng)用。羥丙基-β-環(huán)糊精是一種無(wú)毒、刺激性小、可以供靜脈注射的輔料。經(jīng)羥丙基-β-環(huán)糊精包合后的黃酮類化合物，增強(qiáng)了藥物的生物利用度，改善了溶解度及穩(wěn)定性。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)microRNAs是腫瘤形成過(guò)程的重要參與者，人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展與microRNAs的異常表達(dá)有關(guān)，扮演著癌基因與抑癌基因的角色。本課題以人卵巢上皮性癌裸鼠皮下移植瘤為研究對(duì)象，利用羥丙基-β-環(huán)糊精包合的genistein，探討Genistein對(duì)人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及其對(duì)PTEN蛋白和microR-21的影響，為Genistein在上皮性卵巢癌的臨床治療及預(yù)防中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法： 1細(xì)胞培養(yǎng)：人卵巢癌細(xì)胞SKOV3細(xì)胞，培養(yǎng)在含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，培養(yǎng)箱為溫度為37℃，含5%CO2。 2裸鼠移植瘤模型的建立及實(shí)驗(yàn)分組：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為BALB/C/nu/nu無(wú)胸腺裸小鼠，5～6周齡，18-22g，雌性，在SPF級(jí)環(huán)境下飼養(yǎng)。常規(guī)無(wú)菌培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，用0.25%胰酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化，離心，配制成2.5×107個(gè)/ml單細(xì)胞懸液，在無(wú)菌條件下接種于裸鼠背部近前肢處的皮下，每只裸鼠接種0.2ml（即5×106個(gè)細(xì)胞）單細(xì)胞懸液。觀察移植瘤生長(zhǎng)情況，種瘤第7天選出移植瘤接種成功，并且移植瘤直徑在4～7mm的的裸鼠進(jìn)行試驗(yàn)，將選出的裸鼠隨機(jī)分成六組:對(duì)照組（輔料組）順鉑組，Genistein包合物低劑量組，順鉑+Genistein包合物低劑量組，Genistein包合物中劑量組，Genistein包合物高劑量組，每組6只。 3實(shí)驗(yàn)藥物的制備：Genistein包合物、輔料、順鉑均由0.9%氯化鈉注射液配制成所需濃度，即刻使用。 4給藥方法：Genistein包合物含genistein的濃度為6%，用藥中低、中、高劑量分別按含genistein量50mg/kg、150mg/kg、450mg/kg腹腔注射，每天一次，連續(xù)3周；對(duì)照組（輔料組）按Genistein包合物低劑量組所含羥丙基β-環(huán)糊精量進(jìn)行腹腔注射，每天一次，連續(xù)3周，順鉑組按3mg/kg腹腔注射，每天一次，連用7天，3周后處死；Genistein包合物低劑量+順鉑組同兩藥單獨(dú)給藥方法。 5裸鼠重量及移植瘤體積和重量的測(cè)量：從種瘤后開始每天觀察裸鼠精神狀態(tài)、飲食、大便、活動(dòng)及生長(zhǎng)等情況。治療前測(cè)裸鼠體重，移植瘤的最長(zhǎng)徑（a）和最短徑（b），治療后，每周測(cè)量裸鼠體重，移植瘤的最長(zhǎng)徑（a）和最短徑（b），并按公式V（mm3）=πab2/6計(jì)算移植瘤體積。停藥24小時(shí)終止觀察，脫頸法處死裸鼠，剝?nèi)×鼋M織，并稱重。計(jì)算腫瘤抑瘤率IR（%）=（1－治療組腫瘤平均瘤重/對(duì)照組中平均瘤重）×100%。 6免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)移植瘤組織中PTEN蛋白的表達(dá)情況。 7用RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)移植瘤組織中microR-21、PTEN mMRA的表達(dá)。 8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。等級(jí)資料按秩轉(zhuǎn)換多個(gè)獨(dú)立樣本比較的Student-Newman-kelus檢驗(yàn)，計(jì)量資料以析因設(shè)計(jì)和單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1給藥過(guò)程順利，順鉑組及聯(lián)合用藥組裸鼠出現(xiàn)消瘦、精神狀態(tài)較差，隨著周齡的增加，體重有下降趨勢(shì)，且與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余各組裸鼠體重均有所增長(zhǎng)，但與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在開始給藥時(shí)，各組移植瘤體積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，隨時(shí)間延長(zhǎng)各組瘤體積均逐漸增大，給藥第22天各組移植瘤平均體積均比對(duì)照組小。處死裸鼠后各組抑瘤率分別為：聯(lián)合用藥組＞順鉑組＞Genistein包合物低劑量組；genistein包合物高劑量組＞中劑量組＞低劑量組。順鉑和genistein包合物雖然都能抑制腫瘤生長(zhǎng)，但是順鉑和genistein包合物并無(wú)明顯的協(xié)同作用。 2裸鼠移植瘤組織中PTEN蛋白表達(dá)情況：各劑量genistein包合物均能增加PTEN蛋白表達(dá)，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是順鉑組對(duì)PTEN蛋白表達(dá)則無(wú)明顯影響，聯(lián)合組統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示genistein包合物與順鉑對(duì)PTEN蛋白表達(dá)無(wú)協(xié)同作用；與PTEN蛋白相對(duì)應(yīng)的PTENmRNA結(jié)果也有上述規(guī)律。 3裸鼠移植瘤組織中miR-21的表達(dá)情況：各劑量genistein包合物均能降低miR-21的表達(dá)，與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是順鉑組對(duì)miR-21的表達(dá)則無(wú)明顯影響，聯(lián)合組統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示genistein包合物與順鉑對(duì)miR-21的表達(dá)無(wú)協(xié)同作用，說(shuō)明順鉑不能降低miR-21的表達(dá)。 結(jié)論： 1順鉑與Genistein包合物均具有抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，并隨genistein劑量增大抑制作用也增強(qiáng)，聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥組均能增加對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異并無(wú)顯著性，可能與樣本量較小有關(guān)。 2Genistein包合物可明顯增加PTEN蛋白的表達(dá)，，并呈現(xiàn)劑量依賴性，但順鉑對(duì)PTEN蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響，且聯(lián)合用藥也無(wú)明顯協(xié)同作用。 3Genistein各劑量均可以抑制miR-21的表達(dá)，增加PTEN mRNA的表達(dá)，且表現(xiàn)為劑量依賴性，但順鉑對(duì)miR-21及PTEN mRNA的表達(dá)無(wú)明顯影響，且聯(lián)合用藥也無(wú)明顯協(xié)同作用。
[Abstract]:Objective : In the case of ovarian cancer with the highest mortality in gynecological malignant tumors , about 70 % of patients with advanced stage ( FIGO stage IIB - IV ) were found to have a 5 - year survival rate of less than 40 % . Chemotherapy is a standard protocol for ovarian cancer treatment . The recurrence rate of intravenous chemotherapy is high , intraperitoneal chemotherapy can prolong the survival time without tumor and prolong the overall survival rate , but its toxic side effect is large and its application is limited . Therefore , it is an important topic to search for low - toxic and effective anti - cancer agents to be used in the treatment of ovarian cancer .

The study shows that genistein has many biological activities such as estrogen - like action , anti - estrogen - like action , anti - oxidation and regulation of cell cycle .

Method :

1 Cell culture : Human ovarian cancer cell SKOVCs were cultured in RPMI - 1640 medium containing 10 % fetal bovine serum , and the incubator was incubated at 37 鈩

本文編號(hào)：2091383