發(fā)布時間：2016-12-09 20:52

  本文關(guān)鍵詞：常染色體及X染色體STR在乳腺癌及婦科腫瘤組織中的變異分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《河北醫(yī)科大學》 2014年

常染色體及X染色體STR在乳腺癌及婦科腫瘤組織中的變異分析

孫麗娟  

【摘要】：目的：在法醫(yī)學實踐中常會遇到一些特殊案例，腫瘤組織（通常為甲醛固定石蠟包埋組織）成為唯一的參照樣本。然而腫瘤組織存在STR變異，使同一個體腫瘤組織與正常組織分型不一致。本研究旨在探討婦科腫瘤組織和乳腺癌組織的常染色體和X染色體STR變異類型和規(guī)律，為此類腫瘤組織在法醫(yī)學實踐中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法： 1樣本采集：分別采集經(jīng)病理學診斷明確的63例乳腺癌和62例婦科惡性腫瘤患者的腫瘤組織和癌旁正常組織，以及10例婦科良性腫瘤組織及正常對照組織。其中40例婦科腫瘤樣本包含對應(yīng)的外周血。同時記錄患者的年齡、腫瘤類型、組織類型、臨床分期、分化程度等信息。 2DNA提�。悍謩e用動物組織/細胞基因組DNA提取試劑盒和石蠟包埋組織DNA提取試劑盒提取婦科腫瘤和乳腺癌的腫瘤組織、癌旁正常組織DNA，用血液基因組小量提取試劑盒提取血液基因組DNA。用ND-1000蛋白核酸定量儀定量。 3STR分型：采用PowerPlex21System和Argus X-12試劑盒分別擴增DNA，共33個STR基因座。ABI3130Genetic Analyzer對PCR產(chǎn)物進行電泳分型，使用GeneMapper v3.2分析結(jié)果，得到腫瘤組織、正常組織和血液的STR分型。對比同一個體正常組織與血液的DNA分型和同一個體的腫瘤組織與正常組織的DNA分型，記錄STR變異位點和類型。 4STR變異驗證：用重復實驗、不同試劑盒間相互驗證和單基因座擴增方法驗證STR變異的發(fā)生并對等位基因測序確認其發(fā)生的機制。 5顯微切割：挑選存在STR變異的部分婦科腫瘤組織進行顯微切割，對切取的腫瘤細胞和正常間質(zhì)提取DNA，擴增并電泳分型，分別對比腫瘤細胞、正常間質(zhì)細胞、腫瘤組織、正常組織DNA分型。 6統(tǒng)計學分析：應(yīng)用Excel、SPSS v16.0軟件對上述實驗結(jié)果進行統(tǒng)計學分析，用計數(shù)法分析各種變異類型的個體水平STR變異率和基因座水平STR變異率，用χ2檢驗比較不同腫瘤類型、組織類型、分化程度及臨床分期的STR變異差異及婦科腫瘤和乳腺癌組織STR變異的差異。 結(jié)果： 1婦科腫瘤組織STR變異 比較婦科腫瘤患者血液樣本和正常對照組織的STR分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血液樣本與正常組織的STR分型一致，證實外周血液的STR分型無變異。 在婦科腫瘤組織中，觀察到增加等位基因（additional alleles, Aadd）、新等位基因（new alleles, Anew）、完全雜合性丟失（complete loss ofheterozygosity, LOH）和部分雜合性丟失（partial loss of heterozygous,pLOH）4種STR變異類型。前三種可引起基因型改變（STRGA）導致誤判。抽取部分確定STR變異的樣本進行單基因座PCR擴增、測序，測序得到的等位基因與試劑盒分型結(jié)果一致。經(jīng)過單個等位基因測序，發(fā)現(xiàn)大部分突變來自于重復單位數(shù)目的變化，多為整步突變，突變增長與減少均可見，符合復制滑脫機制。 統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，婦科腫瘤組織STR中，各變異類型的STR變異率不同，三種導致基因型改變的STR變異類型的個體檢出率無顯著差異，而基因座檢出率在常染色體STR和33個STR中具有顯著差異（P0.01）。 婦科腫瘤組織中，33個STR基因座的變異率范圍為0~9.68%，常染色體STR變異檢出率最高的基因座有Penta E、D5S818、FGA，分別為6.45%、9.68%、8.06%，X-STR以DXS10146的變異檢出率最高，，為9.68%。在性別基因座AMEL、Penta D和HPRTB基因座未發(fā)現(xiàn)STR變異，其他基因座的STR變異率均大于DNA的平均突變率，影響等位基因的正確分型。檢驗結(jié)果顯示，兩種遺傳標記的STR變異無顯著性差異，亦無相關(guān)性。 經(jīng)過χ2檢驗分析發(fā)現(xiàn)，在常染色和X染色體，不同腫瘤類型、組織類型和分化程度的婦科腫瘤組織的STR變異均無顯著性差異。然而，由于良性腫瘤組織的STR基因座未發(fā)現(xiàn)變異，比較良、惡性婦科腫瘤組織的常染色體STR變異的差異具有統(tǒng)計學意義（P=0.029）。在X-STR中，兩者的STR變異無顯著性差異（P=0.108）。綜合比較常染色體和X染色體STR變異發(fā)現(xiàn)，良、惡性婦科腫瘤組織的STR變異具有顯著差異（P0.01）。秩和檢驗分析結(jié)果顯示，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四個臨床分期婦科腫瘤的常染色體STR、X-STR變異無顯著性差異。 2乳腺癌組織STR變異 通過對比發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中也檢測到4種STR變異類型，且各類型檢出率存在差異。檢驗結(jié)果顯示，三種導致基因型改變的STR變異類型的個體檢出率和基因座檢出率在常染色體STR和33個STR中無顯著性差異，但是在X-STR的差異具有統(tǒng)計學意義（P0.01），Aadd檢出率最高，LOH檢出率最低。 在乳腺癌中，各STR基因座變異率范圍是0~4.76%，發(fā)生STR變異的基因座較少，常染色體發(fā)生STR變異的基因座數(shù)低于X-STR。檢驗結(jié)果顯示，兩種遺傳標記的STR變異無顯著性差異，亦無相關(guān)性。 經(jīng)χ2檢驗分析發(fā)現(xiàn)不同分化程度的乳腺癌組織常染色STR變異差異具有統(tǒng)計學意義。而X染色體及綜合33個基因座的STR變異無顯著差異。秩和檢驗結(jié)果顯示，三個臨床分期乳腺癌組織的STR變異差異無統(tǒng)計學意義。 3婦科腫瘤組織和乳腺癌STR變異差異 觀察婦科腫瘤組織和乳腺癌的基因座水平的STR變異率發(fā)現(xiàn)，婦科腫瘤發(fā)生STR變異的基因座數(shù)顯著高于乳腺癌，婦科腫瘤的基因座變異率也相對高于乳腺癌的同一基因座的變異率。在婦科腫瘤中變異多發(fā)生于常染色體STR基因座，而乳腺癌中X-STR變異更常見。經(jīng)χ2檢驗分析結(jié)果顯示，兩種腫瘤的常染色體STR基因座變異存在顯著性差異（P=0.003），而兩種腫瘤在X染色體基因座的STR變異無顯著性差異（P=0.179）。 4顯微切割DNA分型結(jié)果 DNA分型結(jié)果顯示，間質(zhì)細胞與正常對照組織的DNA分型結(jié)果一致，腫瘤細胞與腫瘤組織的DNA分型存在差異。腫瘤細胞中只觀察到3種STR變異類型：Anew、LOH和pLOH，而且檢出LOH的數(shù)目多于相應(yīng)的腫瘤組織。 結(jié)論： 1在常染色體STR和X-STR系統(tǒng)中，婦科腫瘤組織的STR基因座變異檢出率、個體變異檢出率顯著高于乳腺腫瘤組織，乳腺癌組織的司法實踐應(yīng)用價值大于婦科腫瘤組織。 2在婦科腫瘤組織中，除AMEL、Penta D和HPRTB基因座外，其余基因座均檢測到STR變異，說明此33個法醫(yī)學常用的STR基因座在婦科腫瘤組織中的穩(wěn)定性較差，不適合應(yīng)用于該系統(tǒng)腫瘤組織的個體識別和親子鑒定。 3本研究篩選出在乳腺腫瘤中未檢測到變異的16個常染色體STR和4個X-STR基因座，可作為乳腺腫瘤個體識別的備選基因座，指導在大樣本人群中深入研究。 4乳腺癌組織的常染色體STR基因座變異與腫瘤的分化程度有關(guān)，分化程度低的腫瘤組織STR變異率高，提示在實際檢案中遇到此類腫瘤組織的檢驗需謹慎。 5通過顯微切割技術(shù)可以準確分離出腫瘤組織中的正常間質(zhì)細胞，能夠代表腫瘤來源個體的正常DNA分型，是解決腫瘤組織身源鑒定的一種有效方法，適用于腫瘤細胞和間質(zhì)細胞分界清楚的腫瘤組織。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.9;R737.3
【目錄】：

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中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 潘靈輝;婦科腫瘤腹腔鏡手術(shù)CO2氣腹與麻醉對機體和頸癌細胞生物學行為的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2008年

2 陳律;瀏陽農(nóng)村居民健康狀況與農(nóng)村衛(wèi)生服務(wù)現(xiàn)狀綜合研究[D];中南大學;2009年

3 熊世鋼;人卵巢癌細胞株COC1 COC2的建立及自分泌TGF-β促生長和對腫瘤免疫的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1993年

4 沈鏗;子宮內(nèi)膜和卵巢原發(fā)性雙癌的臨床和病理研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1993年

5 楊文清;巨噬細胞集落刺激因子及其受體發(fā)病學意義的探討[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1999年

6 劉淑娟;DOC-2分子功能的初步研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學;2003年

7 高萌;代謝應(yīng)激時婦科腫瘤細胞的存活依賴于AKT特異性位點的激活[D];山東大學;2013年

8 劉鳳;以健保數(shù)據(jù)庫探討婦癌患者中藥處方[D];廣州中醫(yī)藥大學;2013年

9 韓世愈;扶正愈瘤飲抗腫瘤減毒增效機理的實驗及臨床研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2004年

10 李鵬;人類磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白在TRAIL誘導的卵巢癌凋亡中的作用[D];山東大學;2004年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊安娜;21個單核苷酸多態(tài)性位點與婦科腫瘤相關(guān)性的遺傳學研究[D];大連醫(yī)科大學;2010年

2 馮飛;婦科腫瘤中醫(yī)古文獻整理及特色療法挖掘研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2013年

3 喬麗華;婦科腫瘤患者血清自體熒光光譜的分析[D];鄭州大學;2010年

4 孫麗娟;常染色體及X染色體STR在乳腺癌及婦科腫瘤組織中的變異分析[D];河北醫(yī)科大學;2014年

5 羅兵;聯(lián)合檢測腫瘤標志物在婦科腫瘤臨床診斷中的評價及Toll樣受體接頭蛋白SARM、MyD88、TRIF在婦科腫瘤中表達情況的研究[D];安徽醫(yī)科大學;2012年

6 倪千喜;婦科腫瘤后裝逆向調(diào)強放射治療的劑量學研究[D];清華大學;2013年

7 李穎;莉芙敏與更年安加減治療婦科腫瘤患者卵巢去勢癥狀的臨床對比觀察[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2011年

8 李霞;211例婦女生殖系腫瘤治療后性生活狀況臨床分析[D];新疆醫(yī)科大學;2008年

9 王露穎;轉(zhuǎn)錄因子FOXC1在婦科腫瘤中的表達及臨床意義[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

10 李慧靈;宮頸癌根治術(shù)后全盆腔調(diào)強適形放射治療降低直腸、膀胱、骨髓劑量學研究[D];福建醫(yī)科大學;2008年

  本文關(guān)鍵詞：常染色體及X染色體STR在乳腺癌及婦科腫瘤組織中的變異分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：208944