本文選題：宮頸癌 + IFN-γ�。� 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：炎性細(xì)胞因子的異常表達(dá)在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳修飾，主要發(fā)生在基因啟動子區(qū)的CpG序列中胞嘧啶堿基，能直接抑制基因的轉(zhuǎn)錄活性，從而影響基因的表達(dá)。本研究采用甲基化特異性PCR法（MSP）研究子宮頸癌中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)，反轉(zhuǎn)錄-PCR法（RT-PCR）半定量檢測其表達(dá)，旨在探討IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)對其表達(dá)情況的影響，從而探討DNA甲基化異常在子宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為子宮頸癌發(fā)生風(fēng)險的評估、診斷和治療提供新的科學(xué)依據(jù)。 方法： 1采用MSP法檢測2012年3月-2013年3月從唐山工人醫(yī)院婦產(chǎn)科門診和住院部收集的43例正常宮頸組織、62例宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）組織（其中CINⅠ23例，CINⅡ-Ⅲ39例）和43例宮頸癌組織中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。 2采用RT-PCR法進(jìn)行半定量檢測不同宮頸組織中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-17、IL-1β基因的mRNA表達(dá)水平，分析不同基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)對其mRNA表達(dá)的影響以及與不同臨床病理特征之間的關(guān)系。 3數(shù)據(jù)分析采用SPSS16.0軟件，雙變量相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)系數(shù)，各組間甲基化率的比較行卡方檢驗或Fisher確切概率法，Bonferroni校正法調(diào)整檢驗水準(zhǔn)。PCR半定量檢測mRNA相對表達(dá)量原始數(shù)據(jù)處理采用單因素方差分析和獨(dú)立樣本t檢驗。雙側(cè)檢驗P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1IFN-γ基因甲基化率在對照組（4.65%）、CINⅠ組（3.04%）、CINⅡ-Ⅲ組（15.38%）和宮頸癌組（20.93%）依次呈上升趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。CINⅡ-Ⅲ組和宮頸癌組IFN-γ mRNA的表達(dá)均低于對照組（0.71±0.35、0.60±0.29vs0.93±0.43，P＜0.05），宮頸癌組低于CINⅠ組（0.60±0.29vs0.81±0.36，P＜0.05）；IFN-γ mRNA在甲基化組的表達(dá)低于非甲基化組（0.28±0.24vs0.83±0.34，P＜0.05），甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)，但無統(tǒng)計學(xué)意義（rs=-0.155，P＞0.05）。 2TNF-α基因在CINⅡ-Ⅲ組及宮頸癌組的甲基化率顯著低于對照組（15.4%、9.3%vs48.8%，P＜0.05）。mRNA相對表達(dá)量在對照組（0.46±0.18）、CINⅠ組（0.69±0.15）、CINⅡ-Ⅲ組（0.85±0.17）及宮頸癌組（0.96±0.17）依次呈上升趨勢（P＜0.05）； mRNA在甲基化組的表達(dá)顯著低于非甲基化組（0.44±0.17vs0.85±0.20，P＜0.05），甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.411，P＜0.05）。 3IL-4基因甲基化率在不同組分別為：對照組7.0%、CINⅠ組17.4%、CINⅡ-Ⅲ組17.9%和宮頸癌組23.3%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。mRNA相對表達(dá)量在對照組為0.28±0.24、CINⅠ組0.47±0.20、CINⅡ-Ⅲ組0.69±0.27及宮頸癌組0.85±0.18呈上升趨勢（P＜0.05）。IL-4mRNA在甲基化組的表達(dá)低于非甲基化組（0.40±0.25vs0.62±0.32，P＜0.05），甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.258，P＜0.05），但相關(guān)性弱。 4IL-17基因甲基化率在CINⅡ-Ⅲ和宮頸癌組顯著低于對照組（53.8%、46.5%vs83.7%，P＜0.05）。宮頸組織中IL-17mRNA的相對表達(dá)水平在宮頸癌組、CINⅡ-Ⅲ組和CINⅠ組顯著高于對照組（0.76±0.29、0.70±0.19、0.62±0.26vs0.50±0.18，P＜0.05），但三組之間差別不大。IL-17mRNA在甲基化組的表達(dá)低于非甲基化組（0.52±0.16vs0.90±0.17，P＜0.05），甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.627，P＜0.05）。 5IL-1β基因在宮頸癌組、CINⅡ-Ⅲ組的甲基化率低于對照（32.6%、48.7%vs81.4%，P 0.05），宮頸癌組低于CINⅠ組（32.6%vs69.6%，P0.05）。宮頸癌組、CINⅡ-Ⅲ組IL-1β基因mRNA的相對表達(dá)顯著高于CINⅠ組、對照組（0.90±0.35、0.80±0.35vs0.60±0.29、0.49±0.26，P 0.05），IL-1β mRNA在甲基化組的表達(dá)低于非甲基化組（0.46±0.21vs1.03±0.23，P＜0.05），甲基化和mRNA表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)（rs=-0.653，P 0.05）。 6在宮頸癌組，IL-17基因甲基化率在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的宮頸癌組織中分別為64%、27.3%、14.3%，具有顯著性差異（P0.05），而IL-17基因甲基化率在不同年齡段、不同病理分級，及IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-1β在不同年齡、病理分級和臨床分期無差異（P0.05）。 結(jié)論： 1TNF-α、IL-17、IL-1β基因啟動子區(qū)甲基化水平的降低是導(dǎo)致TNF-α、IL-17、IL-1β基因mRNA表達(dá)升高的原因之一，參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。 2IFN-γ mRNA的低表達(dá)和IL-4mRNA高表達(dá)是宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的原因之一。 3宮頸癌患者中，，IL-17基因甲基化狀態(tài)與宮頸癌臨床分期有關(guān)，即IL-17的低甲基化促進(jìn)宮頸癌病情進(jìn)展。
[Abstract]:Objective: the abnormal expression of inflammatory cytokines plays an important role in the development of cervical cancer. DNA methylation is an important epigenetic modification, which mainly occurs in the CpG sequence of the gene promoter region, which can directly inhibit the transcriptional activity of the gene and thus affect the gene expression. This study uses the methylation specificity. The methylation status of IFN- gamma, TNF- alpha, IL-4, IL-17, IL-1 beta gene promoter CpG island in cervical cancer was studied by sexual PCR method (MSP), and the reverse transcriptional -PCR method (RT-PCR) was used to detect its expression. The role of cervical cancer in the development and development of cervical cancer risk assessment, diagnosis and treatment to provide new scientific basis.
Method:
1 MSP was used to detect 43 normal cervical tissues, 62 cases of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) tissue (of which CIN I 23 cases, CIN II - III 39 cases) and 43 cases of cervical cancer tissue, IFN- gamma, TNF- a, IL-4, IL-17, IL-1 beta gene promoter methylation status in March March 2012, which were collected from the Department of Obstetrics and Gynecology, obstetrics and Gynecology and obstetrics and Gynecology of Tangshan workers' hospital.
2 the level of mRNA expression of IFN- gamma, TNF- alpha, IL-4, IL-17, IL-1 beta gene in different cervical tissues was semi quantified by RT-PCR method, and the effect of methylation status on the expression of mRNA in different promoter regions and the relationship with different clinicopathological features were analyzed.
3 data analysis uses SPSS16.0 software, bivariate correlation analysis uses Spearman rank correlation coefficient, the comparison of methylation rates among each group is chi square test or Fisher exact probability method, Bonferroni calibration method adjusts test level.PCR semi quantitative detection mRNA relative expression of original data, single factor variance analysis and independent sample t test are used. Double test P < 0.05. The difference was statistically significant.
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本文編號：2056097