本文選題：宮頸鱗狀細胞癌 + miRNA　； 參考：《新疆醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：目的：1）探討高危人乳頭瘤病毒(HR-HPV)在新疆維吾爾族宮頸鱗癌患者中的感染狀態(tài)，分析其表達狀態(tài)與宮頸鱗癌的相關(guān)性。2)研究miRNA在新疆維吾爾族正常宮頸(normal cervical epithelium，NCE)與高危HPV感染的侵襲性宮頸癌(invasivecarcinoma of cervix，ICC)中的表達水平差異，及其在侵襲性宮頸癌中與各臨床指標(biāo)間的相關(guān)性。3)在體外細胞實驗中研究驗證miRNA在HPV陽性宮頸鱗癌細胞中的生物學(xué)功能。方法：1）選擇第二代雜交捕獲(Hybrid capture,HC2)檢測HR-HPV陽性的30例維吾爾族宮頸鱗癌患者，利用巢式PCR檢測其組織標(biāo)本中的HPV16-DNA的表達，多重Taqman探針熒光定量PCR檢測HPV16-DNA在組織中的存在狀態(tài)。2）應(yīng)用miRNA基因芯片（Agilent Human miRNA8*60K）檢測新疆維吾爾族正常宮頸及HPV陽性的宮頸鱗癌組織樣本各6個，利用T檢驗的p值和倍數(shù)變化值進行差異miRNA篩選，篩選的標(biāo)準為上調(diào)或者下調(diào)倍數(shù)變化值"g2.0且P值"f0.05，對差異miRNA進行聚類分析。3）根據(jù)基因芯片結(jié)果，篩選出19個差異表達的miRNA、5個差異表達的靶基因，進而采用RT-PCR的方法檢測其在20例NCE和20例ICC 組織樣本中miRNA的表達狀況，并結(jié)合臨床病理資料進行統(tǒng)計學(xué)分析；4）在siHa細胞中篩選表達豐度下調(diào)的miRNA，挑選出豐度下調(diào)的15個miRNA，，經(jīng)慢病毒包被后經(jīng)高通量篩選（HTS），篩選出有功能的miRNA，進一步推測其在發(fā)病機制中的作用及功能做準備。結(jié)果：1）宮頸鱗癌(SCC)患者HPV-16陽性率為96.7%，與HC2檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p㧐0.05)； HPV-16DNA在宮頸鱗癌組織中以整合態(tài)存在，其整合率為89.7%；HPV-16DNA的表達水平與宮頸鱗癌患者的年齡、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P㧐0.05），但在病理分級高的患者中表達高于病理分級低的患者（P㩳0.05），臨床分期高的患者中表達高于低分期患者（P㩳0.05）；2）基因芯片檢測顯示在新疆維吾爾族正常宮頸組織及HPV陽性的宮頸鱗癌組織中有64個上調(diào)的miRNA，76個下調(diào)的miRNA，經(jīng)RT-PCR方法在組織中驗證基因芯片結(jié)果顯示，在組織中11個表達上調(diào)的miRNA的表達與基因芯片結(jié)果一致，表達下調(diào)的miRNA其中3個與基因芯片結(jié)果一致，5個與基因芯片結(jié)果相反,基因芯片符合率達73.8%。3）miRNA96、17、196、21、15等在宮頸鱗癌組織的表達水平與患者臨床分期、病理分級和間質(zhì)浸潤深度有關(guān)（P0.01）,在級別高的腫瘤患者中表達高于級別低的患者，而與患者年齡、腫瘤直徑大小和絕經(jīng)與否均無明顯關(guān)系（P0.05）。4)篩選出siHa細胞中豐度下調(diào)的15個miRNA，經(jīng)慢病毒包被后經(jīng)高通量篩選，篩選出miRNA-1224，Let7c明顯抑制腫瘤細胞的增殖。結(jié)論：1）HR-HPV感染是導(dǎo)致宮頸癌的主要因素，而HPV-16是新疆維吾爾族宮頸鱗癌主要的病毒類型，其在組織中多以整合態(tài)存在，在宮頸癌發(fā)病中起主要作用，HPV-DNA整合狀態(tài)與宮頸細胞的惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。2）miRNA-196，miRNA-21， miRNA-17、miRNA-15在HPV陽性的宮頸鱗癌組織中表達較正常組織有統(tǒng)計學(xué)差異，并與病理分級、間質(zhì)浸潤深度、臨床分期相關(guān)，可能在宮頸癌的發(fā)生與進展中起重要作用，是宮頸癌診斷和預(yù)后的潛在標(biāo)記物。3)miRNA-1224， Let7c在體外細胞系中明顯抑制腫瘤細胞的增殖。
[Abstract]:Objective: 1) to investigate the infection status of high risk human papillomavirus (HR-HPV) in the Uygur cervical squamous cell carcinoma (Uygur squamous cell carcinoma) in Xinjiang, and analyze the relationship between the expression status and cervical squamous cell carcinoma (.2) to study the invasive cervical cancer (invasivecarcinoma of cerv) in the normal cervical (normal cervical epithelium, NCE) and high-risk HPV infection of the Uygur in Xinjiang (invasivecarcinoma of cerv). The difference in expression level in IX, ICC, and its correlation with various clinical indicators in invasive cervical cancer.3) in vitro cell test to verify the biological function of miRNA in HPV positive cervical squamous cell carcinoma. Method: 1) select second generation hybrid capture (Hybrid capture, HC2) to detect 30 cases of Uygur cervical squamous cell carcinoma positive in HR-HPV The patients, using the nested PCR to detect the expression of HPV16-DNA in the tissue specimens, and the multiplex Taqman probe fluorescence quantitative PCR to detect the existence of HPV16-DNA in the tissue.2), the miRNA gene chip (Agilent Human miRNA8*60K) was used to detect 6 samples of the normal cervix of the Uygur and HPV positive cervical squamous cell carcinoma in Xinjiang. And multiplier variation values miRNA screening, screening criteria for up or down multiplier values "g2.0 and P value" f0.05, the difference miRNA clustering analysis.3) according to the gene chip results, screening 19 differentially expressed miRNA, 5 differentially expressed target genes, and using RT-PCR method to detect its in 20 cases NCE and 20 ICC of ICC.
The expression of miRNA in the tissue samples was analyzed in combination with the clinicopathological data. 4) screening the down-regulation of miRNA in siHa cells, selected 15 miRNA down-regulation, and screened the functional miRNA by high throughput screening (HTS) after the lentivirus envelope, and further speculated its role and function in the pathogenesis. Results: 1) 1) the positive rate of HPV-16 in cervical squamous cell carcinoma (SCC) was 96.7%, and there was no significant difference from HC2 (P? 0.05). The integration rate of HPV-16DNA in cervical squamous cell carcinoma was 89.7%, and the expression level of HPV-16DNA was not related to the age of cervical squamous cell carcinoma (P? 0.05), but in pathology, but in pathology The patients with high grade were higher than those with low pathological grade (P? 0.05), and the patients with high clinical stages were higher than those with low stage (P? 0.05); 2) gene chip detection showed that 64 up regulated miRNA, 76 down-regulated miRNA in the Xinjiang Uygur normal cervical tissues and HPV positive cervical squamous cell carcinoma tissues were detected by RT-PCR method in tissue The results showed that the expression of 11 up-regulated miRNA in the tissue was consistent with the gene chip results, and the expression of down regulated miRNA was consistent with the results of gene chip, 5 in contrast to the gene chip results, the coincidence rate of the gene chip was 73.8%.3) miRNA96,17196,21,15 and so on in the squamous cell carcinoma of the cervix and the patients. The clinical stage, pathological grade and interstitial infiltration depth (P0.01) were higher than those with low level in the patients with high level of tumor, and there was no significant relationship with the patient's age, tumor diameter and menopause (P0.05).4). The 15 miRNA in the siHa cell abundances was screened out, and the m was screened by high throughput screening and screened out by high throughput screening. IRNA-1224, Let7c obviously inhibits the proliferation of tumor cells. Conclusion: 1) HR-HPV infection is the main factor leading to cervical cancer, and HPV-16 is the main virus type of cervical squamous cell carcinoma in Xinjiang Uygur, which is mostly integrated in the tissues, plays a major role in the pathogenesis of cervical cancer, and the integration of HPV-DNA is closely related to the malignant transformation of cervical cells. Related.2) miRNA-196, miRNA-21, miRNA-17, miRNA-15 in HPV positive cervical squamous cell carcinoma tissues are significantly different from normal tissues, and are related to pathological classification, interstitial infiltration depth, clinical staging, and may play an important role in the development and progression of cervical cancer. It is a potential marker for the diagnosis and prognosis of cervical cancer,.3) miRNA-1224, Let7c The proliferation of tumor cells was markedly inhibited in vitro.
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R737.33

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本文編號：2053422