本文選題：卵巢癌 + sCD40L�。� 參考：《河北醫(yī)科大學》2014年碩士論文

【摘要】：目的：卵巢癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，已成為首要死亡原因。由于在疾病早期，癥狀較隱匿，多數(shù)病人確診時已進入晚期階段。且由于在臨床治療過程中，對化療藥物的耐藥更使得卵巢癌患者預后差、死亡率高。因此，，探討改善卵巢癌細胞的耐藥以及增強化療藥物敏感性成為亟待解決的問題。研究表明，在存在CD40表達的腫瘤細胞中，sCD40L（可溶性CD40配體）可抑制細胞的增殖，具有調節(jié)腫瘤細胞生長及誘導凋亡的作用。格爾德霉素衍生物17-AAG（17-烯丙胺基一17一脫甲氧基格爾德霉素）是一種Hsp90抑制劑，有較強的抗腫瘤作用。17-AAG已在乳癌、白血病、前列腺癌等研究中表現(xiàn)出抗腫瘤活性，其主要通過抑制腫瘤侵襲、降低耐藥性及誘導凋亡而發(fā)揮作用。關于sCD40L及17-AAG抑制卵巢癌細胞生長的作用機制報道較少。本實驗的相關前期研究發(fā)現(xiàn)：sCD40L及17-AAG對卵巢癌細胞的增殖均有抑制作用，且隨藥物濃度的增加抑制率增高。sCD40L聯(lián)合順鉑作用于SKOV3細胞可能通過下調survivin mRNA、上調caspase-3mRNA及caspase-9mRNA而誘導細胞凋亡。sCD40L聯(lián)合順鉑作用于SKOV3/DDP細胞可能通過下調MDR1mRNA、LRP mRNA、GST-π mRNA及survivin mRNA而逆轉耐藥。sCD40L作用于兩種細胞，抑制作用無顯著差異。17-AAG的增殖抑制作用在SKOV3/DDP細胞中明顯強于SKOV3細胞。sCD40L及17-AAG分別聯(lián)合順鉑作用于卵巢癌細胞后均可逆轉耐藥性。本實驗旨在檢測sCD40L及17-AAG作用于卵巢癌細胞后相關耐藥蛋白及凋亡抑制蛋白的表達情況、探討可能的作用機制。 方法： 1MTT法檢測不同濃度的sCD40L、順鉑及兩者聯(lián)合應用對卵巢癌細胞SKOV3及SKOV3/DDP的增殖抑制作用，并計算藥物作用細胞后48小時的IC50值及逆轉倍數(shù)。 2Western-blot法檢測順鉑、sCD40L及sCD40L聯(lián)合順鉑處理卵巢癌細胞SKOV3及SKOV3/DDP前后細胞內GST-π，LRP，P53，Bcl-2及survivin蛋白的表達情況。 3MTT法檢測不同濃度的17-AAG、順鉑及兩者聯(lián)合應用對卵巢癌細胞SKOV3及SKOV3/DDP的增殖抑制作用，并計算藥物作用細胞后48小時的IC50值及逆轉倍數(shù)。 4Western-blot法檢測順鉑、17-AAG及17-AAG聯(lián)合順鉑處理卵巢癌細胞SKOV3及SKOV3/DDP前后細胞內GST-π，LRP，P53，Bcl-2及survivin蛋白的表達情況。 結果： 1MTT法結果顯示：不同濃度的sCD40L對卵巢癌細胞SKOV3及SKOV3/DDP細胞的增殖均具有抑制作用。隨藥物濃度的增加及作用時間延長，對SKOV3及SKOV3/DDP細胞的增殖抑制作用均增強，呈時間—劑量依賴關系。sCD40L作用于SKOV3細胞及SKOV3/DDP細胞48小時的IC50值分別是2.26μg/ml、2.33μg/ml。不同濃度的順鉑對兩種細胞有增殖抑制作用，也呈時間—劑量依賴關系。順鉑對SKOV3細胞及SKOV3/DDP細胞48小時的IC50值分別是7.34μg/ml、27.06μg/ml。SKOV3/DDP細胞的耐藥指數(shù)為3.69。sCD40L聯(lián)合順鉑對SKOV3及SKOV3/DDP細胞均有明顯的增殖抑制作用，且呈一定的時間—劑量依賴關系。1μg/ml及2μg/ml sCD40L聯(lián)合順鉑作用于SKOV3細胞的IC50值分別是1.40μg/ml、1.05μg/ml，增敏倍數(shù)分別為5.24、6.99。1μg/ml及2μg/mlsCD40L聯(lián)合順鉑作用于SKOV3/DDP細胞的IC50值分別是6.11μg/ml、2.95μg/ml，逆轉倍數(shù)分別為4.43、9.17。1μg/ml sCD40L聯(lián)合順鉑作用于SKOV3細胞及SKOV3/DDP細胞的q值分別為0.92、1.01。2μg/ml sCD40L聯(lián)合順鉑作用于SKOV3及SKOV3/DDP細胞的q值分別為0.97、1.02。各組計算均得0.85≤q≤1.15，說明sCD40L與順鉑兩藥聯(lián)用發(fā)揮相加作用。 2Western-blot法檢測結果示：經(jīng)順鉑單藥、sCD40L單藥、sCD40L聯(lián)合順鉑處理SKOV3及SKOV3/DDP細胞48小時后，survivin、bcl-2蛋白表達量各組間兩兩比較，均無顯著差異（P0.05）。在SKOV3細胞中survivin、bcl-2蛋白的表達量明顯高于SKOV3/DDP細胞（P0.05）。在兩種細胞中，2μg/ml sCD40L聯(lián)合順鉑組的GST-π、LRP和p53蛋白表達水平，與空白對照組、DDP單藥組及sCD40L單藥組相比，兩種蛋白表達均明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。2μg/ml sCD40L聯(lián)合順鉑組GST-π、LRP蛋白下降的幅度在SKOV3/DDP細胞中高于SKOV3細胞（P0.05）。聯(lián)合組及順鉑組p53蛋白下降幅度在兩種細胞間無顯著性差異（P0.05）。 3MTT法結果顯示：不同濃度的17-AAG對SKOV3及SKOV3/DDP細胞具有增殖抑制作用。且隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長，增殖抑制作用明顯增強，呈明顯的時間—劑量依賴關系。17-AAG對SKOV3/DDP細胞的抑制作用明顯強于SKOV3細胞，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。17-AAG作用于SKOV3及SKOV3/DDP細胞48小時的IC50值分別是18.39μg/ml、7.35μg/ml。17-AAG聯(lián)合順鉑對SKOV3及SKOV3/DDP細胞的IC50值分別是2.34μg/ml、1.24μg/ml，逆轉倍數(shù)分別為3.14、5.92。17-AAG聯(lián)合順鉑作用于SKOV3及SKOV3/DDP細胞的q值分別為0.95、1.01。兩組計算均得0.85≤q≤1.15，說明17-AAG和順鉑聯(lián)合應用發(fā)揮相加作用。 4Western-blot法檢測結果示：經(jīng)順鉑單藥、17-AAG單藥、17-AAG聯(lián)合順鉑處理SKOV3及SKOV3/DDP細胞48小時后，GST-π、LRP及Bcl-2蛋白表達量各組間兩兩比較無顯著差異（P0.05）。在SKOV3/DDP細胞中GST-π及LRP蛋白的表達明顯高于SKOV3細胞中的表達，差異有統(tǒng)計學意義（P0.05）。在SKOV3細胞中Bcl-2蛋白的表達明顯高于SKOV3/DDP細胞（P0.05）。聯(lián)合組與順鉑單藥組及17-AAG單藥組相比，聯(lián)合組survivin及p53蛋白的表達均下降，有統(tǒng)計學意義（P0.05）。聯(lián)合組survivin及p53蛋白下降的幅度在兩種細胞間均無顯著差異（P0.05）。 結論： 1sCD40L聯(lián)合順鉑對卵巢癌細胞有明顯的增殖抑制作用。sCD40L聯(lián)合順鉑對SKOV3/DDP細胞的耐藥性有明顯逆轉作用。sCD40L可能通過下調卵巢癌細胞中的耐藥基因GST-π、LRP及P53蛋白的表達，進而改善卵巢癌細胞的順鉑耐藥性。 217-AAG聯(lián)合順鉑對卵巢癌細胞的增殖有明顯的抑制作用。17-AAG聯(lián)合順鉑可明顯逆轉SKOV3/DDP細胞的耐藥性。17-AAG可能通過下調卵巢癌細胞中的survivin及P53蛋白的表達，促進細胞凋亡而改善卵巢癌細胞對順鉑的耐藥。
[Abstract]:Objective: ovarian cancer is one of the most common gynecologic malignancies and has become the leading cause of death. Because in the early stage of the disease, the symptoms are concealed and the majority of the patients have entered the advanced stage. And because in the process of clinical treatment, the resistance to chemotherapy drugs makes the ovarian cancer patients poor prognosis and the mortality is high. Therefore, the improvement of the ovary is to improve the ovary. The drug resistance of cancer cells and the enhancement of chemosensitivity have become an urgent problem. The study shows that in the tumor cells with CD40 expression, sCD40L (soluble CD40 ligand) can inhibit the proliferation of cells and regulate the growth of tumor cells and induce apoptosis. Oxcomycin is a kind of Hsp90 inhibitor, with strong anti-tumor effect,.17-AAG has shown antitumor activity in breast cancer, leukemia, prostate cancer and other studies. It mainly plays a role in inhibiting tumor invasion, reducing drug resistance and inducing apoptosis. The mechanism of action of sCD40L and 17-AAG to inhibit the growth of ovarian cancer cells The previous studies in this experiment have found that sCD40L and 17-AAG have inhibitory effect on the proliferation of ovarian cancer cells, and with the increase of inhibitory rate of drug concentration,.SCD40L combined with cisplatin may induce SKOV3 cells to induce apoptosis by down regulation of Survivin mRNA and up regulation of caspase-3mRNA and caspase-9mRNA to induce apoptosis in combination with cisplatin. The effect of SKOV3/DDP cells on MDR1mRNA, LRP mRNA, GST- PI mRNA and Survivin mRNA to reverse the resistance of.SCD40L to two cells, there is no significant difference in inhibitory effect of.17-AAG, which is significantly stronger in SKOV3/DDP cells than in SKOV3 cells and in combination with cisplatin in ovarian cancer cells. The aim of this experiment is to detect the expression of sCD40L and 17-AAG in ovarian cancer cells and to explore the possible mechanism of the expression of drug resistance protein and apoptosis suppressor protein.
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本文編號：2037082