本文選題：子宮內(nèi)膜腫瘤 + 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1　； 參考：《鄭州大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：背景與目的 近些年來子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)病率逐年上升。肥胖，高血壓，糖尿病和血脂異常的多種危險(xiǎn)因素共同構(gòu)成的代謝綜合征與子宮內(nèi)膜腺癌的發(fā)病密切相關(guān)。而胰島素抵抗是代謝綜合征的中心環(huán)節(jié)。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(insulinlike growth factor binding proteins，IGFBPs)是胰島素樣生長因子(insulin-1ikegrowth factor，IGF)體系中的重要成員，其中包括與IGF有較高的結(jié)合能力的IGFBP1-6，及新近發(fā)現(xiàn)的與胰島素有較高結(jié)合能力的IGFBP7-15，又被稱為胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白(insulin like growth factor binding protein-relatedprotein，IGFBP-rP)，其中研究最多最重要的是lGFBP-rP1，與IGFBP1-6相比，lGFBP-rP1與IGF1和IGF2的結(jié)合能力分別要弱5倍和20-25倍，但與胰島素的結(jié)合能力要強(qiáng)500倍。胰島素和IGFBP-rP1結(jié)合后使胰島素降低或喪失正常生理作用，導(dǎo)致機(jī)體胰島素敏感性下降，引起胰島素抵抗，，從而參與一些惡性腫瘤如結(jié)腸癌、乳腺癌等的發(fā)生發(fā)展，并且高胰島素血癥和低IGFBP-rP1水平是子宮內(nèi)膜癌的高危因素。但是lGFBP-rP1在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞發(fā)揮何種作用尚不清楚，因此，本研究應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法將重組質(zhì)粒pEX-2 IGFBP-rP1轉(zhuǎn)染lGFBP-rP1低表達(dá)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A，觀察上調(diào)lGFBP-rP1對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A的增殖速率，凋亡及細(xì)胞周期的影響，探討lGFBP-rP1在子宮內(nèi)膜癌中發(fā)揮的具體作用。 方法 1.細(xì)胞轉(zhuǎn)染：應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1A，分為三組：轉(zhuǎn)染pEX-2 IGFBP-rP1組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組、空白對照組（僅轉(zhuǎn)染試劑），并用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率； 2.應(yīng)用QRT-PCR技術(shù)檢測各組細(xì)胞中IGFBP-rP1的RNA表達(dá)； 3.應(yīng)用蛋白印跡法（Western Blot）測定各組細(xì)胞IGFBP-rP1蛋白表達(dá)； 4.應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法分別檢測各組細(xì)胞24h、48h、72h增殖抑制率； 5.采用流式細(xì)胞技術(shù)應(yīng)用AnnexinV-APC/PI雙染法測定各組細(xì)胞的凋亡率。采用PI單染法測定各組細(xì)胞的細(xì)胞周期； 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，所得結(jié)果以X±s表示。采用重復(fù)測量的方差分析來比較各組細(xì)胞的增殖抑制率，用單因素方差分析比較各組細(xì)胞的mRNA，蛋白表達(dá)，細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期，兩兩比較采用LSD法。 結(jié)果 1.轉(zhuǎn)染pEX-2 IGFBP-rP1組IGFBP-rP1mRNA的相對拷貝量為：2.699±0.293，蛋白相對表達(dá)量為：1.126±0.074與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組（1.296±0.169，0.889±0．040）及空白對照組（1.031±0.301，0.884±0.043）相比明顯升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01）； 2.轉(zhuǎn)染pEX-2 IGFBP-rP1組24h，48h，72h增殖抑制率分別為：(37.3±5.4)%、(39.9±4.7)%、(38.0±5.3)%，與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組（3.6±0.6）%，(4.0±0.5)%，(3.3±0.6）%和空白對照組（2.7±0.3）%，(3.2±0.2)%，(2.4±0.2）%相比，增殖抑制率明顯上升，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)； 3.轉(zhuǎn)染后48h，轉(zhuǎn)染pEX-2 IGFBP-rP1組凋亡率為（20.667±2.055）％，明顯高于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組（3.967±0.351）％及空白對照組（4.967±0.252）％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0．01）； 4.轉(zhuǎn)染pEX-2 IGFBP-rP1組S+G2／M期細(xì)胞的比例為：（30.980±1.461）％，明顯低于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組（38.797±2.419）％和空白對照組(37.800±0.350)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p0．01)。 結(jié)論 上調(diào)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞HEC-1A中IGFBP-rP1的表達(dá)，可以抑制該細(xì)胞系的增殖，促進(jìn)其凋亡，引起細(xì)胞周期阻滯。
[Abstract]:Background and Purpose

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本文編號(hào)：2013863