發(fā)布時間：2018-06-09 12:27

  本文選題：宮頸癌細胞 + X線照射　； 參考：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:探討不同劑量X線照射對宮頸癌Hela細胞PIWIL2蛋白表達及HPV病毒、細胞凋亡、細胞周期分布變化的影響,并分析照射后宮頸癌Hela細胞PIWIL2蛋白表達與HPV病毒、細胞凋亡和細胞周期分布變化的相關(guān)性。方法:(1)宮頸癌Hela細胞的培養(yǎng):以含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基,置于CO2濃度為5%、溫度為37℃、飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),細胞培養(yǎng)至對數(shù)期進行實驗處理。(2)分組及X線照射:設(shè)置對照組(0Gy組)、2Gy組、4Gy組、8Gy組,采用6MV X線直線加速器照射,照射距離100cm,劑量率400cGy/min,分別給予劑量0Gy、2Gy、4Gy、8Gy照射。(3)克隆集落形成實驗:取對數(shù)期Hela細胞計數(shù)后接種于培養(yǎng)皿中,按分組及照射條件照射后繼續(xù)培養(yǎng)14天進行染色計數(shù)克隆集落形成率及細胞存分數(shù)。(4)細胞周期及凋亡檢測:將Hela細胞培養(yǎng)至對數(shù)期,按分組及照射條件照射后繼續(xù)培養(yǎng),采用流式細胞儀分別檢測照射后6、12、24、48小時細胞周期分布及細胞凋亡率。(5)Western blot及熒光定量PCR法檢測PIWIL2及HPV-18 E6/E7的表達:將Hela細胞培養(yǎng)至對數(shù)期,按分組及照射條件照射后繼續(xù)培養(yǎng),分別檢測對照組及各實驗組放療后6、12、24、48小時PIWIL2及HPV E6/E7表達情況。結(jié)果:(1)各實驗組在照射后48小時內(nèi)piwil2蛋白的表達隨時間推移呈先增加后降低,2gy組piwil2表達峰在照射后6小時,4gy組和8gy組在照射后12小時;hela細胞照射后6小時各實驗組piwil2表達水平上調(diào),但隨照射劑增加上調(diào)作用逐漸下降,上調(diào)作用與照射劑量呈負相關(guān)(r=-0.898,p0.05),x線照射后12~48小時宮頸癌hela細胞piwil2表達呈劑量依賴性增加。(2)x線照射后hela細胞存活分數(shù)與照射后6小時piwil2表達水平呈正相關(guān)((r=0.921,p0.05),與照射后其它時間點piwil2表達無相關(guān)性(p0.05)。(3)與對照組比較,各實驗組照射后g2/m期比例隨時間推移先增加后降低,2gy組g2/m期阻滯峰在照射后6小時,4gy組和8gy組在照射后12小時;x線照射后g2/m期比列與piwil2蛋白表達水平隨時間變化趨勢一致,兩者呈正相關(guān)(2gy組r=0.896,p0.05;4gy組r=0.903,p0.05;8gy組r=0.873,p0.05)。(4)照射后48小時內(nèi)隨時間推移各實驗組18型hpve6/e7的表達均呈降低—增加—降低的趨勢,2gy和4gy組照射后12、24小時其表達水平高于對照組(p0.05),其余時間點及8gy組各時間點18型hpve6/e7表達均顯著受抑制(p0.05),照射后6、48小時小時18型hpve6/e7表達呈劑量依賴性降低;照射后48小時內(nèi)18型hpve6/e7表達水平與piwil2的表達水平均無相關(guān)性(p0.05)。(5)2gy和4gy組x線照射后24小時內(nèi)在各時間點的細胞凋亡率高于對照組(p0.05),與x線照射后24小時內(nèi)piwil2表達呈負相關(guān)(2gy組r=-0.671,p0.05;4gy組r=-0.783,p0.05);8gy組x線照射后48小時內(nèi)細胞凋亡率均高于對照組(P0.05),與照射后48小時內(nèi)PIWIL2表達呈負相關(guān)(r=-0.595,P0.05)。結(jié)論:(1)X線照射后48h內(nèi)Hela細胞PIWIL2蛋白表達水平上調(diào),隨時間推移其表達水平先增加后降低,2Gy組表達峰值在照射后6h,4Gy和8Gy組在照射后12h。(2)X線照射能抑制Hela細胞HPV18型E6/E7的表達,抑制作用呈劑量依賴性增加,但在4Gy以下劑量照射后12~24小時E6/E7表達明顯增高;X線照射后Hela細胞HPV18型E6/E7的表達與PIWIL2表達無相關(guān)性。(3)X線照射后Hela細胞PIWIL2表達水平與G2/M期阻滯比例、細胞存活分數(shù)呈正相關(guān)。(4)X線照射后Hela細胞PIWIL2表達與細胞凋亡呈負相關(guān)。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of different doses of X - ray irradiation on the expression of PIWIL2 protein and HPV , apoptosis and cell cycle distribution in Hela cells of cervical cancer . Results : ( 1 ) After irradiation , the expression level of piwil2 protein in each experimental group was significantly lower than that in the control group ( r = - 0.898 , p < 0.05 ) . ( 5 ) The apoptosis rate of the cells was higher than that of the control group ( P < 0.05 ) within 24 hours after the irradiation of 2gy and 4gy groups . The apoptosis rate of the cells was significantly higher than that in the control group ( P 0.05 ) within 48 hours after irradiation with x - ray irradiation ( r = - 0.595 , P0.05 ) . Conclusion : ( 1 ) After X - ray irradiation , the expression level of pWIL2 protein in Hela cells increased , and the expression level of HPV18 E6 / E7 in Hela cells was significantly increased at 6h , 4Gy and 8Gy after irradiation .
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33

【參考文獻】

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本文編號：1999725