本文選題：陰道炎 + 孕期婦女�。� 參考：《江蘇大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：人體體表及與外界相通的腔道內(nèi)寄居著大量的不同類型的微生物,不同個體及身體不同部位含有不同的微生物群落。陰道感染會導(dǎo)致女性特別是孕婦進(jìn)一步的并發(fā)癥如早產(chǎn)、產(chǎn)后感染、盆腔炎等疾病,增加致病性病毒、細(xì)菌及真菌感染的風(fēng)險。另外,女性懷孕時如患有陰道炎會影響精子質(zhì)量,嚴(yán)重的情況下甚至可以導(dǎo)致不孕;即使懷孕,孕期也極易引起宮內(nèi)感染、產(chǎn)道感染等,進(jìn)而感染胎兒、新生兒,造成流產(chǎn)、早產(chǎn)、先天發(fā)育畸形或智力低下等嚴(yán)重的后果。目前,國內(nèi)外多數(shù)研究針對的都是陰道內(nèi)細(xì)菌群落的組成、分布及其與女性相關(guān)疾病如陰道炎的聯(lián)系,而對陰道微環(huán)境內(nèi)病毒群落的研究較少。作為陰道微生物類群的重要成員,陰道內(nèi)病毒群落的種類和分布對于女性特別是孕婦群體的健康有重要意義。探討陰道內(nèi)復(fù)雜的病毒群落的組成及其與孕期婦女的健康和疾病的關(guān)系,探討特定生理病理條件下陰道微環(huán)境內(nèi)病毒群落的組成及其變化可以為相關(guān)疾病的診斷、治療奠定理論基礎(chǔ)。妊娠期婦女傳統(tǒng)的細(xì)菌及病毒性感染可使用有效的抗生素、疫苗或抗體以達(dá)到治療和預(yù)防的目的,因此我們對傳統(tǒng)的妊娠期婦女陰道細(xì)菌及病毒性感染并不恐慌,而暫未被發(fā)現(xiàn)的新型病毒則可能是引起未知病因妊娠期婦女的宮內(nèi)感染、產(chǎn)道感染等繼而感染胎兒、新生兒,造成流產(chǎn)、早產(chǎn)等嚴(yán)重后果的罪魁禍?zhǔn)住Ｌ崆巴诰驖撛诘闹虏⌒孕虏《緦⑹侨祟愓鞣掳l(fā)病毒性傳染病的最好選擇。病毒宏基因組學(xué)(Viral Metagenomics)是近年出現(xiàn)的病毒檢測新方法,該方法突破了只能檢測已知病毒的傳統(tǒng)病毒檢測方法的局限性,直接以生物樣本中的所有病毒核酸為研究對象,不但可以有效地鑒定出存在的已知病毒,還可以迅速發(fā)現(xiàn)各種未知新型病毒。因此,本研究以患有陰道炎的孕期婦女為研究對象,采用病毒宏基因組學(xué)方法,在解析孕期婦女陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落組成的基礎(chǔ)上鑒定新型潛在致病性病毒、探討新型病毒的分子起源及進(jìn)化并研究新型病毒與疾病的相關(guān)性,從而為妊娠期婦女產(chǎn)道新型病毒感染的預(yù)防及臨床治療等提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。本研究主要內(nèi)容和結(jié)果如下:(一)孕期婦女陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落組成分析本研究從鎮(zhèn)江市婦幼保健醫(yī)院采集總計88份患有陰道炎孕期婦女的陰道分泌物拭子樣品,基于Illumina Miseq測序平臺建立病毒宏基因組二代測序文庫。通過Miseq測序平臺深度測序獲得原始病毒核酸數(shù)據(jù),利用基于病毒宏基因組學(xué)技術(shù)的生物信息學(xué)技術(shù)分析平臺,對原始高通量測序數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,獲取文庫中存在的所有可能的病毒基因序列,對孕婦陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落的組成進(jìn)行分析。結(jié)果顯示孕期婦女陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落中各種類型病毒基因序列數(shù)由多到少組成為:乳頭瘤病毒科(Papillomaviridae)81.62%、指環(huán)病毒科(Anelloviridae)13.36%、未分類病毒(Unclassified)1.03%、人類內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒科(HERV)0.85%、細(xì)小病毒科(Parvoviridae)0.62%、杯狀病毒科(Caliciviridae)0.51%、藻類DNA病毒科(Phycodnaviridae)0.40%、小RNA病毒科(Picornaviridae)0.23%、Mimiviridae病毒科0.20%、其它病毒科(Others)1.18%。孕婦陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落的組成具有以下特點:(1)病毒群落組成呈現(xiàn)病毒種類多樣性,其真核病毒類型包含至少30個病毒科或類群。(2)人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)構(gòu)成了孕婦陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落的主體。通過對乳頭瘤病毒進(jìn)一步按種和型進(jìn)行分類,發(fā)現(xiàn)孕婦陰道炎微環(huán)境內(nèi)HPV種類豐富,且滴度較高,包括HPV16、HPV52等各種高危型別和HPV6、HPV42等各種低危型別。其中序列數(shù)最多的是Alphapapillomavirus14種中的HPV71,占HPV序列總數(shù)的38.64%。(3)陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落中含有多種潛在人體致病性病毒,如指環(huán)病毒、杯狀病毒、細(xì)小病毒及小RNA病毒等。(二)新型HPV的發(fā)現(xiàn)及其遺傳特征研究通過對孕婦陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落的分析,結(jié)合基于病毒基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析,本研究發(fā)現(xiàn)編號為KYD08的病毒文庫內(nèi)含有11個contig,其與Gen Bank內(nèi)提交的HPV序列具有較低的相似度,可能是新型HPV毒株。根據(jù)該11個contig中的最大片段,本研究設(shè)計了一對套式PCR檢測引物,對該文庫內(nèi)15個陰道拭子樣品進(jìn)行PCR篩查,發(fā)現(xiàn)該文庫中編號為52號的樣品為陽性。為了獲取該新型HPV的全基因組序列,本研究基于宏基因組文庫內(nèi)的11個HPV contig序列,設(shè)計了8對套式引物進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增各contig之間的gap序列,最終獲得了該新型HPV的全基因組序列。該HPV毒株命名為HPV-ZJ01,并將該毒株序列登錄Gen Bank,獲得Gen Bank登錄號為KX082661�；蚪M序列分析顯示,HPV-ZJ01全基因組為7358bp,由6個開放性閱讀框(E6、E7、E1、E2、L2和L1)和一個非編碼區(qū)(LCR)組成�；贖PV-ZJ01和相關(guān)代表性HPV的L1蛋白及全基因組的系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果均顯示HPV-ZJ01與Gamma屬19種的成員HPV161、HPV162和HPV166聚集。在L1基因水平上,HPV-ZJ01與HPV161的核苷酸同源性是71.1%,根據(jù)國際病毒分類委員會(ICTV)的規(guī)定,乳頭瘤病毒同一種中各成員基于L1基因上的核苷酸同源性在71-89%。以上進(jìn)化分析表明HPV-ZJ01是屬于Gamma-19種的新型HPV。(三)新型HPV與孕婦陰道炎及女性宮頸癌相關(guān)性初步研究為了初步探討本研究發(fā)現(xiàn)的新型HPV與孕婦陰道炎及女性宮頸癌的相關(guān)性,本研究進(jìn)一步采集了鎮(zhèn)江地區(qū)128份女性宮頸癌樣品,加上本研究中的88份患有陰道炎孕婦的陰道分泌物拭子樣品,采用基于HPV-ZJ01序列設(shè)計的套式PCR檢測方法,對患有陰道炎孕婦的陰道分泌物拭子及女性宮頸癌樣品進(jìn)行該新型HPV的PCR篩查,結(jié)果顯示88個患有陰道炎孕期婦女的陰道分泌物拭子及另外收集的128份女性宮頸癌樣品中,除之前陽性病毒文庫中的52號樣品是陽性外,其它標(biāo)本均是陰性。該結(jié)果初步提示本研究發(fā)現(xiàn)的新型HPV毒株與孕婦陰道炎和女性宮頸癌無較大相關(guān)性,其致病性有待于進(jìn)一步基于更大樣品量的分子流行病學(xué)研究。結(jié)論:(1)運用病毒宏基因組學(xué)方法解析了孕期婦女陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落的組成;(2)孕期婦女陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落呈現(xiàn)病毒種類多樣性并含有多種致病性病毒;(3)孕期婦女陰道炎微環(huán)境內(nèi)病毒群落中發(fā)現(xiàn)了一株新型HPV,其屬于乳頭瘤病毒Gamma-19種的一個新基因型;(4)該新型HPV與陰道炎和宮頸癌可能無相關(guān)性。
[Abstract]:In addition , it is important to study the composition and distribution of virus communities in vaginal microenvironments and their relationship with women ' s health and disease . The results showed that the number of various types of viral genes in the microenvironments of pregnant women vaginitis was 80.62 % , 13.36 % , 0 . 62 % , 0 . 23 % , 0 . 20 % and 1 . 18 % , respectively . In order to obtain the complete genome sequence of HPV - ZJ01 and HPV 161 , a pair of nested PCR primers were designed . ( 3 ) A new type of human papillomavirus ( HPV - ZJ01 ) was used to detect vaginal discharge swab and cervical cancer . The results showed that 88 women with vaginitis had no significant correlation with vaginal discharge swab and cervical cancer .
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R714.2;R711.31

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1996822