發(fā)布時(shí)間：2018-05-18 14:20

  本文選題：胚胎著床 + 蛻膜化��； 參考：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的胚胎著床是妊娠的關(guān)鍵環(huán)節(jié),是具備著床能力的胚胎與容受態(tài)子宮建立緊密聯(lián)系的過程。圍著床期小鼠子宮主要依賴以下步驟完成胚胎著床過程:小鼠子宮在孕D4天處于容受態(tài),子宮內(nèi)膜處于允許囊胚粘附的狀態(tài);在小鼠孕D5天,囊胚粘附并侵入子宮內(nèi)膜,子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞隨即廣泛地增殖和分化,發(fā)生蛻膜化樣改變,孕D6天形成初級(jí)蛻膜區(qū)。胚胎的正常著床對于后續(xù)妊娠維持、分娩均起著重要的作用。然而,目前關(guān)于胚胎著床機(jī)制的研究還不夠全面。自噬是存在于真核細(xì)胞的普遍現(xiàn)象,依賴溶酶體對物質(zhì)進(jìn)行降解,來維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)以及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的更新。近年研究證實(shí)自噬參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展;胚胎侵入子宮與腫瘤發(fā)生過程存在相似性,但是自噬是否參與胚胎著床過程并未見報(bào)道。課題組前期基因芯片研究發(fā)現(xiàn)孕D5天小鼠著床點(diǎn)子宮內(nèi)膜中自噬相關(guān)標(biāo)志分子的表達(dá)低于著床旁子宮內(nèi)膜。因此,我們推測自噬可能參與了圍著床期子宮內(nèi)膜正常功能的維持,進(jìn)而調(diào)節(jié)胚胎著床。方法1.自噬相關(guān)標(biāo)志分子在圍著床期小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)1)建立小鼠正常妊娠模型,收集孕D4、D5、D6天小鼠子宮內(nèi)膜,采用westernblot檢測小鼠圍著床期子宮內(nèi)膜中自噬相關(guān)標(biāo)志分子lc3、atg5的表達(dá)。2)建立小鼠正常妊娠模型,收集孕d5天著床點(diǎn)與著床旁子宮內(nèi)膜組織。采用透射電鏡尋找自噬小體,分別用real-timepcr和westernblot檢測自噬相關(guān)標(biāo)志物cathepsinb、p62等分子在著床點(diǎn)和著床旁子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)。3)建立自噬抑制劑3-ma干預(yù)的小鼠妊娠模型,收集孕d5天小鼠子宮著床點(diǎn)與著床旁子宮內(nèi)膜組織;驗(yàn)證模型建立成功后,尾靜脈注射臺(tái)盼藍(lán)后觀察小鼠胚胎著床情況,he染色觀察自噬被抑制后小鼠子宮組織形態(tài)的改變。并采用westernblot檢測自噬抑制后蛻膜化標(biāo)志因子hoxa10、pr的表達(dá)。2.自噬在子宮蛻膜化中的作用1)建立假孕小鼠人工誘導(dǎo)蛻膜化模型,收集誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)和對照側(cè)子宮內(nèi)膜組織;分別使用real-timepcr和westernblot檢測自噬相關(guān)標(biāo)志物cathepsinb、atg5、p62等分子在誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)以及對照側(cè)子宮內(nèi)膜中的表達(dá)。體外分離并培養(yǎng)小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞,誘導(dǎo)細(xì)胞蛻膜化后,westernblot檢測自噬相關(guān)標(biāo)志物lc3、atg5、p62的表達(dá)。2)建立自噬抑制劑3-ma干預(yù)的假孕小鼠人工誘導(dǎo)蛻膜化模型,驗(yàn)證模型建立成功后,使用westernblot檢測自噬抑制后蛻膜化標(biāo)志因子hoxa10、pr的表達(dá),he染色觀察自噬被抑制后的子宮組織形態(tài)。體外分離并培養(yǎng)小鼠子宮基質(zhì)細(xì)胞,自噬抑制劑3-ma處理細(xì)胞后誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化,檢測蛻膜化標(biāo)志因子hoxa10、pr的表達(dá)。結(jié)果1.自噬相關(guān)標(biāo)志分子在圍著床期小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)1)自噬相關(guān)標(biāo)志物lc3-ii、atg5在小鼠孕d5、d6天子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)水平較孕d4天顯著降低。2)自噬小體的數(shù)目在孕d5天著床點(diǎn)低于著床旁,自噬相關(guān)標(biāo)志分子cathepsinb、p62mrna水平及蛋白水平在小鼠孕d5天著床點(diǎn)顯著低于著床旁。3)自噬抑制劑3-ma干預(yù)后,肉眼觀察可見孕鼠胚胎著床點(diǎn)數(shù)量無顯著差異,但分布不均。he檢測發(fā)現(xiàn)小鼠孕d5天子宮腔上皮出現(xiàn)異常折疊且植入室閉合不完全。此外,子宮蛻膜化標(biāo)志因子hoxa10、er-α、pr蛋白的表達(dá)均顯著降低。2.自噬在子宮內(nèi)膜蛻膜化中的作用1)與對照側(cè)相比,人工誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)的小鼠子宮內(nèi)膜組織中自噬相關(guān)標(biāo)志分子p62、atg5、cathepsinb、ulk1以及becn1mrna表達(dá)顯著降低;自噬相關(guān)分子lc3-ii、atg5以及p62蛋白在誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)顯著下調(diào)。原代分離培養(yǎng)小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞,體外誘導(dǎo)蛻膜化后,自噬相關(guān)標(biāo)志物lc3-ii、atg5、p62蛋白表達(dá)水平較未誘導(dǎo)的基質(zhì)細(xì)胞顯著降低。2)肉眼觀察發(fā)現(xiàn),與對照組相比,自噬抑制劑3-MA干預(yù)組中誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)子宮外觀異常,且子宮濕重顯著降低;HE染色顯示,在自噬抑制劑3-MA的作用下,誘導(dǎo)蛻膜化側(cè)子宮內(nèi)膜細(xì)胞界限不清;蛻膜化標(biāo)志因子HOXA10、PR蛋白的表達(dá)水平在自噬受到抑制后顯著下調(diào)。此外,在自噬抑制劑3-MA的作用下,體外誘導(dǎo)基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化后,蛻膜化標(biāo)志因子HOXA10、PR的表達(dá)較對照組均顯著降低。結(jié)論本研究提示自噬參與圍著床期子宮內(nèi)膜功能的正常維持,其可能與妊娠早期小鼠子宮內(nèi)膜蛻膜化有關(guān),但其具體影響過程和機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Objective : To establish a normal pregnancy model of mice , and to study the expression of autophagy - related marker molecules ( lc3 , atg5 ) in the endometrium of pregnant mice . The expression of autophagy - related markers lc3 - ii , atg5 and p62 in the endometrium of mice induced by autophagy was significantly lower than that in the control side .
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R714

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1906161