IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清高孕酮濃度對(duì)著床期內(nèi)膜影響的研究
本文選題:孕酮 + 胚胎著床率 ; 參考:《浙江大學(xué)》2014年博士論文
【摘要】:第一部分IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度對(duì)胚胎著床率的影響 目的: 已知注射hCG日孕酮濃度對(duì)IVF胚胎著床率有預(yù)測(cè)價(jià)值,然而,注射hCG次日的血清孕酮濃度對(duì)IVF胚胎著床率是否也有預(yù)測(cè)價(jià)值呢?與注射hCG日孕酮濃度相比,其預(yù)測(cè)價(jià)值相對(duì)較低?相同?或更高? 方法: 本研究為單中心、回顧性、觀察性隊(duì)列研究。研究對(duì)象為自2011年1月~2013年5月間于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院生殖中心接受IVF治療的全部5828個(gè)卵巢刺激周期的臨床資料。研究期間,本中心的鮮胚移植策略:僅患者獲卵數(shù)≤15枚,注射hCG日孕酮"f2.0ng/ml,且無(wú)卵巢過(guò)度刺激(ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS)傾向等條件均同時(shí)滿足的前提下,方可進(jìn)行新鮮胚胎移植。否則,建議患者全部新鮮胚胎冷凍,擇期行凍融胚胎移植。 研究期間,所有患者均于注射hCG日及注射hCG次日清晨采取血樣檢測(cè)血清雌二醇濃度和孕酮濃度。研究期間均使用同樣的血清性激素檢測(cè)試劑盒,無(wú)臨床或胚胎實(shí)驗(yàn)室治療方案變動(dòng)。研究期間本中心的胚胎著床率和臨床妊娠率均維持在穩(wěn)定水平。 為研究注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度與胚胎著床率之間的關(guān)系,全部1457個(gè)IVF新鮮胚胎移植周期納入進(jìn)一步研究。 以胚胎著床率為因變量,通過(guò)多因素逐步回歸分析的方法,分析下列因素:年齡,獲卵數(shù),注射hCG日子宮內(nèi)膜厚度,注射hCG日雌二醇水平,注射hCG日孕酮水平,注射hCG次日雌二醇水平,注射hCG次日孕酮水平,注射hCG日孕酮與注射hCG次日孕酮之和,總rFSH用量,總rFSH刺激天數(shù),移植胚胎數(shù),移植優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù),與胚胎著床率之間的關(guān)系。 根據(jù)2011年-2013年間本中心的5828個(gè)IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),將孕酮濃度“升高”定義為孕酮值高于整體孕酮值分布的90%百分位數(shù),未能達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)則定義為孕酮濃度“正常”。 進(jìn)一步將這1457個(gè)新鮮胚胎移植周期根據(jù)注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度正常或升高分為4組:NN組,注射hCG日及注射hCG次日孕酮濃度均正常;NH組,注射hCG日孕酮濃度正常但注射hCG次日孕酮濃度升高;HN組,注射hCG日孕酮濃度升高但注射hCG次日孕酮濃度正常;HH組,注射hCG日及注射hCG次日孕酮濃度均升高,進(jìn)行臨床各指標(biāo)及胚胎著床率和臨床妊娠率的組間比較。 結(jié)果: 1.根據(jù)5828個(gè)IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),注射hCG日孕酮平均水平為1.4±0.8ng/ml,注射hCG次日孕酮水平顯著增加7.9±5.5ng/ml(P0.001)。 2.注射hCG后12小時(shí),血清孕酮濃度較注射hCG之前的孕酮濃度相比,上升5倍。 3.根據(jù)5828個(gè)IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),注射hCG日孕酮正;蛏叩腸ut-off值為1.7ng/ml;注射hCG次日孕酮正;蛏叩腸ut-off值為9.5ng/ml。 4.多因素逐步回歸分析結(jié)果顯示,年齡、獲卵數(shù)、注射hCG日孕酮和注射hCG次日孕酮之和為3個(gè)顯著影響胚胎著床率的因素。若將注射hCG日孕酮和注射hCG次日孕酮之和從自變量列表中剔除,則注射hCG次日孕酮被回歸方程選擇為第三個(gè)顯著影響胚胎著床率的因素;若進(jìn)一步將注射hCG次日孕酮也從自變量列表中剔除,則注射hCG日孕酮被回歸方程選擇為第三個(gè)顯著影響胚胎著床率的因素。 5.1457個(gè)新鮮胚胎移植周期根據(jù)注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度正;蛏叻譃4組后比較發(fā)現(xiàn):與NN組相比,HH組患者顯著更年輕(31.9±4.6歲29.7±3.5歲,P0.001),基礎(chǔ)FSH更低(8.1±1.9IU/L7.9±1.2IU/L,P0.05),獲卵數(shù)更多(7.9±4.0個(gè)12.7±3.3個(gè),P0.001),胚胎數(shù)更多(5.3±3.0個(gè)6.7±2.6個(gè),P0.001),移植胚胎數(shù)/移植周期無(wú)顯著差別(1.8±0.4個(gè)1.8±0.4個(gè)),移植優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/移植周期差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.6±0.5個(gè)1.7±0.5個(gè)),但胚胎著床率卻顯著低下(36.0%22.2%,P0.001,),臨床妊娠率也顯著低下(59.7%37.5%,P0.001)。 結(jié)論: 臨床工作中決定是否進(jìn)行全部胚胎冷凍時(shí),不應(yīng)僅關(guān)注注射hCG日血清孕酮濃度,還應(yīng)結(jié)合考慮注射hCG次日的血清孕酮濃度。 第二部分IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度對(duì)著床期內(nèi)膜形態(tài)學(xué)和uNK細(xì)胞數(shù)目的影響 目的: IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日的高血清孕酮濃度,是否影響著床期子宮內(nèi)膜的形態(tài)變化?以及uNK細(xì)胞的數(shù)目?方法: 本研究為單中心,前瞻性隊(duì)列研究。研究對(duì)象選自2013年7月~2013年12月間于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院生殖中心接受IVF治療的119名患者。 研究期間,本中心的鮮胚移植策略:僅患者獲卵數(shù)"f15枚,注射hCG日孕酮"f2.0ng/ml,且無(wú)卵巢過(guò)度刺激(ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS)傾向等條件均同時(shí)滿足的前提下,方可進(jìn)行新鮮胚胎移植。否則,建議患者考慮全部新鮮胚胎冷凍,擇期行凍融胚胎移植。119名患者均按照本中心已建立的新鮮胚胎移植策略選擇進(jìn)行全部胚胎冷凍。取卵術(shù)后按本中心常規(guī)黃體支持方案給予肌注黃體酮,于注射hCG+7天通過(guò)一次性宮腔組織吸引管取少量?jī)?nèi)膜組織行形態(tài)學(xué)分析和uNK細(xì)胞數(shù)目檢測(cè)。 內(nèi)膜組織學(xué)評(píng)分由兩位有經(jīng)驗(yàn)的觀察者依據(jù)Noyes等(1950)建立的標(biāo)準(zhǔn)按照盲法獨(dú)立完成;uNK細(xì)胞計(jì)數(shù)由兩位觀察者獨(dú)立完成。均進(jìn)行觀察者間差異評(píng)估。 119名患者均于注射hCG日及注射hCG次日的清晨采取血樣檢測(cè)血清雌二醇濃度和孕酮濃度。 分別通過(guò)多因素逐步回歸的方法分析下列因素:注射hCG日孕酮濃度,注射hCG次日孕酮濃度,注射hCG日雌二醇濃度,注射hCG次日雌二醇濃度,rFSH刺激時(shí)間,與內(nèi)膜組織學(xué)評(píng)分結(jié)果和uNK細(xì)胞數(shù)目的關(guān)系。 根據(jù)2011年-2013年間本中心的5828個(gè)IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),將孕酮濃度“升高”定義為孕酮值高于整體孕酮值分布的90%百分位數(shù),未能達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)則定義為孕酮濃度“正!。由此,注射hCG日孕酮正;蛏叩腸ut-off值為1.7ng/ml;注射hCG次日孕酮正常或升高的cut-off值為9.5ng/ml。進(jìn)一步進(jìn)行了內(nèi)膜組織學(xué)評(píng)分結(jié)果、腺體-基質(zhì)發(fā)育不同步比例和uNK細(xì)胞數(shù)目在孕酮正常組和孕酮升高組的組間比較。 結(jié)果: (注射hCG日和注射hCG次日血清高孕酮濃度與內(nèi)膜形態(tài)學(xué)變化之間的關(guān)系) 1.多因素逐步回歸分析結(jié)果顯示:注射hCG次日血清孕酮濃度為唯一顯著影響內(nèi)膜組織學(xué)評(píng)分結(jié)果的因素。 2.將119例樣本根據(jù)注射hCG次日血清孕酮濃度正;蛏(cut-off值:9.5ng/m1)分為兩組:觀察者1結(jié)果:與孕酮正常組(7.6±0.7天)相比,孕酮升高組的內(nèi)膜發(fā)育更為成熟(8.0±0.6天),差異顯著(P0.001,);觀察者2結(jié)果:與孕酮正常組(6.8±1.0天)相比,孕酮升高組的內(nèi)膜發(fā)育更為成熟(7.6±0.8天),差異顯著(P0.001)。 3.兩位觀察者所提供的組織學(xué)評(píng)分結(jié)果具有很顯著的相關(guān)性(r=0.394,P0.001)。整體來(lái)講,70%的結(jié)果差異于1天之內(nèi),95%的結(jié)果差異于2天之內(nèi)。 4.孕酮正常組中腺體-基質(zhì)發(fā)育不同步(腺體-基質(zhì)成熟天數(shù)相差"g4天)的樣本比例約為~51%,顯著(P0.001)高于孕酮升高組中腺體-基質(zhì)發(fā)育不同步所占的樣本比例22%。(注射hCG日和注射hCG次日血清高孕酮濃度與內(nèi)膜uNK細(xì)胞數(shù)目之間的關(guān)系) 5.多因素逐步回歸分析結(jié)果顯示:注射hCG日血清孕酮濃度為唯一顯著影響內(nèi)膜uNK細(xì)胞數(shù)目的因素。 6.兩位觀察者uNK計(jì)數(shù)的結(jié)果顯著相關(guān)(r=0.9,P0.05),uNK細(xì)胞計(jì)數(shù)的平均差異值為2.4%(±3.3%)。 7.將119例樣本根據(jù)注射hCG日血清孕酮濃度正;蛏(cut-off值:1.7ng/m1)分為兩組:孕酮升高者內(nèi)膜的uNK細(xì)胞數(shù)目9.2%(1.3-21.6%)(中位數(shù)(范圍))顯著(P0.001)高于孕酮正常者的內(nèi)膜uNK細(xì)胞數(shù)目6.3%(1.4-18.7%)。 結(jié)論: IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清高孕酮促使著床期內(nèi)膜發(fā)育更為成熟,uNK細(xì)胞數(shù)目顯著增加。 第三部分IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度對(duì)著床期內(nèi)膜基因表達(dá)譜的影響 目的: 研究IVF刺激周期中注射hCG日及注射hCG次日血清高孕酮對(duì)著床期內(nèi)膜基因表達(dá)譜的影響,本部分研究尤其關(guān)注的問(wèn)題是,參與uNK細(xì)胞生成及功能調(diào)節(jié)的相關(guān)基因的表達(dá),在多大程度上受到了高孕酮濃度的影響? 方法: 本研究為單中心,前瞻性隊(duì)列研究。研究對(duì)象選自2013年7月~2013年12月間于本生殖中心接受IVF治療的12名患者。 這12名患者均按照本中心已建立的鮮胚移植策略進(jìn)行全部胚胎冷凍。取卵后按照本中心常規(guī)黃體支持方案肌注黃體酮,于注射hCG+7天通過(guò)一次性宮腔組織吸引管取少量?jī)?nèi)膜組織行基因芯片實(shí)驗(yàn)和組織形態(tài)學(xué)分析。 12名患者均于注射hCG日及注射hCG次日的清晨采取血樣檢測(cè)血清雌二醇濃度和孕酮濃度。根據(jù)2011年-2013年間本中心的5828個(gè)IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日血清孕酮濃度數(shù)據(jù),將孕酮濃度“升高”定義為孕酮值高于整體孕酮值分布的90%百分位數(shù),未能達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)則定義為孕酮濃度“正常”。由此,注射hCG日孕酮正常或升高的cut-off值為1.7ng/ml;注射hCG次日孕酮正;蛏叩腸ut-off值為9.5ng/ml。 根據(jù)注射hCG日孕酮濃度和注射hCG次日孕酮濃度正;蛏,12名患者可分為4組:組1(NN),注射hCG日和注射hCG次日孕酮均正常;組2(NH),注射hCG日孕酮正常但注射hCG次日孕酮升高;組3(HN),注射hCG日孕酮升高但注射hCG次日孕酮正常;組4(HH),注射hCG日和注射hCG次日孕酮均升高。 組間比較表達(dá)差異"g2倍,且P0.05被選擇為顯著差異表達(dá)基因。 分別依次進(jìn)行組間顯著差異表達(dá)基因的比較:組4(HH)與組1(NN)比較,組3(HN)與組1(NN)比較,以及組2(NH)與組1(NN)比較。分別將各組間比較所獲得的顯著差異表達(dá)基因列表向DAVID(基因功能分析網(wǎng)站)提交,通過(guò)DAVID提供的KEGG pathway功能進(jìn)行差異表達(dá)基因的相關(guān)功能分析。 根據(jù)組4(HH)與組1(NN)比較獲得的153個(gè)顯著差異表達(dá)基因,對(duì)12個(gè)樣本進(jìn)行聚類分析。 選擇8個(gè)基因進(jìn)行qRT-PCT驗(yàn)證。這8個(gè)基因中,4個(gè)基因選自NK細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用通路中表達(dá)異常的基因,包括CD247分子(Cd247),殺傷細(xì)胞瘦素樣受體超家族C,成員2(KLRC2),殺傷細(xì)胞瘦素樣受體超家族D,成員1(KLRD1),自然細(xì)胞毒作用觸發(fā)受體1(NCR1),另4個(gè)基因包括:水通道蛋白-3(AQP3),富含亮氨酸重復(fù)因子1(LRRC1),基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP26),和鈣結(jié)合蛋白S100P。 結(jié)果: 1.4組患者年齡、基礎(chǔ)內(nèi)分泌、注射hCG日雌二醇水平、注射hCG次日雌二醇水平、rFSH刺激時(shí)間、獲卵數(shù)等各臨床指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.組4(HH)與組1(NN)比較共153個(gè)基因表達(dá)差異顯著,DAVID KEGG pathway分析結(jié)果顯示4條pathway受到顯著影響,按照受影響程度從大到小依次排序?yàn)椋篘K細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(15個(gè)基因表達(dá)失調(diào)),抗原表達(dá)和提呈(6個(gè)基因表達(dá)失調(diào)),移植物宿主相關(guān)疾病(6個(gè)基因表達(dá)失調(diào)),和淀粉和糖代謝(6個(gè)基因表達(dá)失調(diào))。 3.組3(HN)與組1(NN)的pathway分析結(jié)果顯示3條pathway受到顯著影響,按照受影響程度從大到小依次排序?yàn)椋杭?xì)胞周期(8個(gè)基因表達(dá)失調(diào)),剪接體(7個(gè)基因表達(dá)失調(diào)),NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(7個(gè)基因表達(dá)失調(diào))。 4.組2(NH)與組1(NN)的pathway分析結(jié)果顯示5條pathway受到顯著影響,根據(jù)受影響程度從大到小依次為:細(xì)胞周期(7個(gè)基因表達(dá)失調(diào)),剪接體(7個(gè)基因表達(dá)失調(diào)),NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(7個(gè)基因表達(dá)失調(diào)),wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(7個(gè)基因表達(dá)失調(diào)),和抗原表達(dá)和提呈(5個(gè)基因表達(dá)失調(diào))。 5.注射hCG日和注射hCG次日兩天內(nèi),只要有一天的孕酮濃度升高,NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用通路均受到顯著影響;若兩天的孕酮濃度均升高,NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用通路成為受影響最為顯著的一條pathway(P0.0001)。 6.組4(HHH)與組1(NN)比較時(shí),15個(gè)NK細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用pathway中表達(dá)差異顯著的基因分別為:殺傷細(xì)胞瘦素樣受體超家族C,成員2(KLRC2,上調(diào)3.2倍);殺傷細(xì)胞瘦素樣受體超家族C,成員3(Klrc3,上調(diào)2.2倍);殺傷細(xì)胞瘦素樣受體超家族D,成員1(KLRD1,上調(diào)3.4倍);殺傷細(xì)胞瘦素樣受體超家族K,成員1(KLRKl,上調(diào)2.4倍);自然細(xì)胞毒觸發(fā)受體1(Ncrl,上調(diào)3.1倍);顆粒酶B (GZMB,上調(diào)2.4倍);血細(xì)胞生成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子(HCST,上調(diào)2.5倍);Fc fragment of IgG,低親合力Ⅲa,受體(CD16a)(Fcgr3a,上調(diào)2.3倍);CD247分子(Cd247,上調(diào)2.3倍);Fc fragment of IgE,高親合力I, gamma多肽受體FCER1G,上調(diào)2.8倍);TYRO酪氨酸激酶結(jié)合蛋白(TYROBP,上調(diào)2.6倍);穿孔素1(Prf1,上調(diào)2.4倍);ras-相關(guān)C3肉毒桿菌毒素底物2(rho家族,小GTP結(jié)合蛋白R(shí)ac2)(rac2,上調(diào)2.3倍);殺傷細(xì)胞瘦素樣受體超家族C,成員1(Klrcl,上調(diào)3.2倍);腫瘤壞死因子(配體)超家族,成員10(TNFSF10,下調(diào)2.4倍)。 7.根據(jù)組4(HH)與組1(NN)比較得到的153個(gè)差異表達(dá)基因,對(duì)12個(gè)樣本的聚類結(jié)果顯示,4組患者的基因表達(dá)譜各不相同,其中,組2(NH)和組3(HN)的基因表達(dá)譜相對(duì)較為相似。 8. CD247, KLRC2, KLRD1, NCR1, AQP3, LRRC1, MMP26, S100P的qPT-PCR驗(yàn)證結(jié)果均與芯片結(jié)果一致。結(jié)論:1.注射hCG日孕酮濃度和注射hCG次日孕酮濃度均可影響著床期內(nèi)膜基因表達(dá)譜的改變。 2.IVF刺激周期注射hCG日及注射hCG次日高孕酮對(duì)著床期子宮內(nèi)膜的影響可能是通過(guò)其對(duì)uNK細(xì)胞的作用來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號(hào)】:R714.8
【共引文獻(xiàn)】
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6 陳麗麗;HCG對(duì)β1,4-GaITⅠ在調(diào)控胚胎著床作用中的影響及調(diào)控機(jī)制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年
7 馮樂;18F-FDG PET-CT在腦膠質(zhì)瘤分級(jí)診斷中的優(yōu)勢(shì)及其校正參數(shù)的初步研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年
8 郝潔;ART患者薄型子宮內(nèi)膜發(fā)病危險(xiǎn)因素相關(guān)性研究[D];中南大學(xué);2013年
9 吳曉麗;選擇性孕酮受體調(diào)節(jié)劑Asoprisnil抗小鼠孕卵著床的效果及其對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的影響[D];華中科技大學(xué);2012年
10 崔靜霞;卵巢刺激中雌激素水平與體外受精—胚胎移植結(jié)局的相關(guān)因素及后續(xù)結(jié)果分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年
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