本文選題：HeLa細(xì)胞 + LC3��； 參考：《武漢大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分槲皮素誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞自噬的研究目的：檢測(cè)不同濃度的槲皮素對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖的抑制作用,觀察在槲皮素作用HeLa細(xì)胞的過程中,細(xì)胞內(nèi)自噬水平的變化,并初步探討影響自噬可能的機(jī)制。方法：利用MTT法檢測(cè)不同濃度的槲皮素對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖的抑制作用,通過單丹磺酰戊二胺(MDC)熒光染色觀察HeLa細(xì)胞內(nèi)的自噬水平,免疫印跡法檢測(cè)LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化水平及Beclin 1、active caspase 3、p-S6Kl的蛋白表達(dá)水平,用透射電鏡(TEM)觀察細(xì)胞內(nèi)自噬的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果：槲皮素能顯著抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖,其抑制作用呈濃度依賴性。MDC熒光染色顯示HeLa細(xì)胞經(jīng)不同濃度的槲皮素處理后,綠色熒光在其濃度為50μmol/L時(shí)達(dá)到最強(qiáng),隨后減弱。免疫印跡結(jié)果顯示槲皮素濃度在50μmol/L以下時(shí),LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化水平及Beclin 1蛋白的表達(dá)水平逐漸上升,而在100μmol/L時(shí)下降,active caspase 3蛋白水平隨著槲皮素濃度的增高而逐漸升高,S6K1的磷酸化水平隨著自噬水平的逐漸升高而降低。透射電鏡超微結(jié)構(gòu)的觀察表明在槲皮素濃度為50μmol/L時(shí)HeLa細(xì)胞內(nèi)的自噬溶酶體最多。結(jié)論：槲皮素對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用,槲皮素能誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞發(fā)生自噬,隨著槲皮素濃度的增加,在50μmol/L的槲皮素作用時(shí)細(xì)胞內(nèi)自噬水平最強(qiáng),在100μmol/L時(shí)較前減弱,其機(jī)制可能與mTORCl通路調(diào)控有關(guān)。第二部分槲皮素抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖中自噬與凋亡的關(guān)系目的：探討中藥槲皮素抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖過程中自噬與凋亡之間的關(guān)系,抑制自噬后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。方法：將槲皮素作用HeLa細(xì)胞,利用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬,MTT法檢測(cè)自噬抑制后槲皮素對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的影響,AnnexinV-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)槲皮素對(duì)HeLa細(xì)胞凋亡率的影響,免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化水平和active caspase 3蛋白的表達(dá)。結(jié)果：用3-MA抑制自噬后,槲皮素對(duì)HeLa細(xì)胞的增殖抑制率增高,細(xì)胞凋亡率增高。LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化率降低,提示這一自噬過程能夠被3-MA抑制。而active caspase 3蛋白的表達(dá)升高,說明抑制自噬后促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡。結(jié)論：抑制自噬能增加槲皮素對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞的抑制作用,細(xì)胞的凋亡率增加,低濃度的槲皮素作用時(shí),自噬發(fā)揮保護(hù)作用,自噬的下調(diào)能增強(qiáng)HeLa細(xì)胞對(duì)槲皮素治療的敏感性。第三部分 自噬在槲皮素抑制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)中的作用研究目的：研究自噬在槲皮素抑制裸鼠宮頸癌移植瘤生長(zhǎng)中的作用。方法：建立裸鼠宮頸癌的動(dòng)物模型,利用3-甲基腺嘌呤(3-MA)和槲皮素干預(yù)移植瘤的生長(zhǎng),觀察不同的干預(yù)措施對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響,測(cè)量腫瘤大小的變化,HE染色觀察移植瘤的病理特征,免疫組化檢測(cè)移植瘤中Beclin 1和LC3-Ⅱ的表達(dá)。結(jié)果：對(duì)照組、槲皮素組、3-MA+槲皮素組三組之間用藥前后移植瘤大小的比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,槲皮素能夠在體內(nèi)抑制裸鼠移植瘤的生長(zhǎng),3-MA+槲皮素組對(duì)裸鼠移植瘤的抑制作用較單用槲皮素組增加,3-MA能夠增強(qiáng)槲皮素的抗腫瘤作用,腫瘤的生長(zhǎng)得到了進(jìn)一步的抑制,HE染色見3MA+槲皮素組移植瘤組織中明顯的壞死區(qū),槲皮素組中可見部分壞死區(qū),而對(duì)照組中壞死區(qū)不明顯,Beclin1和LC3-Ⅱ的表達(dá)在3-MA+槲皮素組中最低。結(jié)論：槲皮素能夠在體內(nèi)抑制裸鼠移植瘤的生長(zhǎng),抑制自噬能增加槲皮素對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用。
[Abstract]:The effect of quercetin on the proliferation of HeLa cells was observed by MTT assay . The results showed that quercetin could inhibit the proliferation of HeLa cells . The results showed that quercetin could inhibit the proliferation of HeLa cells . The results showed that quercetin could inhibit the growth of transplanted tumor in nude mice . The results showed that quercetin could inhibit the growth of transplanted tumor in nude mice . The results showed that quercetin could inhibit the growth of transplanted tumor in nude mice .

【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33

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