本文選題：HeLa細胞 + LC3　； 參考：《武漢大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分槲皮素誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細胞自噬的研究目的：檢測不同濃度的槲皮素對宮頸癌HeLa細胞增殖的抑制作用,觀察在槲皮素作用HeLa細胞的過程中,細胞內(nèi)自噬水平的變化,并初步探討影響自噬可能的機制。方法：利用MTT法檢測不同濃度的槲皮素對宮頸癌HeLa細胞增殖的抑制作用,通過單丹磺酰戊二胺(MDC)熒光染色觀察HeLa細胞內(nèi)的自噬水平,免疫印跡法檢測LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化水平及Beclin 1、active caspase 3、p-S6Kl的蛋白表達水平,用透射電鏡(TEM)觀察細胞內(nèi)自噬的超微結(jié)構(gòu)。結(jié)果：槲皮素能顯著抑制宮頸癌HeLa細胞的增殖,其抑制作用呈濃度依賴性。MDC熒光染色顯示HeLa細胞經(jīng)不同濃度的槲皮素處理后,綠色熒光在其濃度為50μmol/L時達到最強,隨后減弱。免疫印跡結(jié)果顯示槲皮素濃度在50μmol/L以下時,LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化水平及Beclin 1蛋白的表達水平逐漸上升,而在100μmol/L時下降,active caspase 3蛋白水平隨著槲皮素濃度的增高而逐漸升高,S6K1的磷酸化水平隨著自噬水平的逐漸升高而降低。透射電鏡超微結(jié)構(gòu)的觀察表明在槲皮素濃度為50μmol/L時HeLa細胞內(nèi)的自噬溶酶體最多。結(jié)論：槲皮素對宮頸癌HeLa細胞的增殖有明顯的抑制作用,槲皮素能誘導(dǎo)HeLa細胞發(fā)生自噬,隨著槲皮素濃度的增加,在50μmol/L的槲皮素作用時細胞內(nèi)自噬水平最強,在100μmol/L時較前減弱,其機制可能與mTORCl通路調(diào)控有關(guān)。第二部分槲皮素抑制宮頸癌HeLa細胞增殖中自噬與凋亡的關(guān)系目的：探討中藥槲皮素抑制宮頸癌HeLa細胞增殖過程中自噬與凋亡之間的關(guān)系,抑制自噬后對細胞凋亡的影響。方法：將槲皮素作用HeLa細胞,利用自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬,MTT法檢測自噬抑制后槲皮素對HeLa細胞增殖的影響,AnnexinV-FITC/PI流式細胞術(shù)檢測槲皮素對HeLa細胞凋亡率的影響,免疫印跡法檢測細胞內(nèi)LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化水平和active caspase 3蛋白的表達。結(jié)果：用3-MA抑制自噬后,槲皮素對HeLa細胞的增殖抑制率增高,細胞凋亡率增高。LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ轉(zhuǎn)化率降低,提示這一自噬過程能夠被3-MA抑制。而active caspase 3蛋白的表達升高,說明抑制自噬后促進了細胞的凋亡。結(jié)論：抑制自噬能增加槲皮素對宮頸癌HeLa細胞的抑制作用,細胞的凋亡率增加,低濃度的槲皮素作用時,自噬發(fā)揮保護作用,自噬的下調(diào)能增強HeLa細胞對槲皮素治療的敏感性。第三部分 自噬在槲皮素抑制裸鼠移植瘤生長中的作用研究目的：研究自噬在槲皮素抑制裸鼠宮頸癌移植瘤生長中的作用。方法：建立裸鼠宮頸癌的動物模型,利用3-甲基腺嘌呤(3-MA)和槲皮素干預(yù)移植瘤的生長,觀察不同的干預(yù)措施對移植瘤生長的影響,測量腫瘤大小的變化,HE染色觀察移植瘤的病理特征,免疫組化檢測移植瘤中Beclin 1和LC3-Ⅱ的表達。結(jié)果：對照組、槲皮素組、3-MA+槲皮素組三組之間用藥前后移植瘤大小的比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,槲皮素能夠在體內(nèi)抑制裸鼠移植瘤的生長,3-MA+槲皮素組對裸鼠移植瘤的抑制作用較單用槲皮素組增加,3-MA能夠增強槲皮素的抗腫瘤作用,腫瘤的生長得到了進一步的抑制,HE染色見3MA+槲皮素組移植瘤組織中明顯的壞死區(qū),槲皮素組中可見部分壞死區(qū),而對照組中壞死區(qū)不明顯,Beclin1和LC3-Ⅱ的表達在3-MA+槲皮素組中最低。結(jié)論：槲皮素能夠在體內(nèi)抑制裸鼠移植瘤的生長,抑制自噬能增加槲皮素對裸鼠移植瘤生長的抑制作用。
[Abstract]:The effect of quercetin on the proliferation of HeLa cells was observed by MTT assay . The results showed that quercetin could inhibit the proliferation of HeLa cells . The results showed that quercetin could inhibit the proliferation of HeLa cells . The results showed that quercetin could inhibit the growth of transplanted tumor in nude mice . The results showed that quercetin could inhibit the growth of transplanted tumor in nude mice . The results showed that quercetin could inhibit the growth of transplanted tumor in nude mice .

【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孟德勝,汪士良;槲皮素及其苷類研究進展[J];中國藥房;2000年05期

2 王劭妤,杜宗良,李瑞霞,吳大誠,邰源臨;槲皮素在無水乙醇中溶解度的實驗測定與關(guān)聯(lián)[J];國際沙棘研究與開發(fā);2004年03期

3 張學(xué)武,關(guān)麗萍,李天洙;反相高效液相色譜法測定珍珠梅中槲皮素的含量[J];時珍國醫(yī)國藥;2005年09期

4 許進軍;何東初;;槲皮素研究進展[J];實用預(yù)防醫(yī)學(xué);2006年04期

5 薛王君;李鳳儀;;中草藥中槲皮素測定方法的研究[J];江西化工;2006年04期

6 趙文彬;樊蓮蓮;劉桂花;劉金榮;;精制槲皮素的制備及其含量測定方法研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2006年12期

7 嚴軍;劉忠芳;劉紹璞;;汞(Ⅱ)-槲皮素螯合物共振瑞利散射光譜法測定槲皮素[J];分析化學(xué);2007年01期

8 薛s，

本文編號：1827863