本文選題：宮頸癌 + 宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)��； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：宮頸癌是一種嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤,在我國(guó)女性惡性腫瘤死亡排名中占第二位,且山西省為宮頸癌的高發(fā)區(qū)。而宮頸癌是一個(gè)連續(xù)發(fā)生的過(guò)程,宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasias, CIN)為宮頸癌的癌前病變,如何阻斷CIN進(jìn)展為宮頸癌成為目前亟待解決的問(wèn)題。眾所周知,宮頸癌的發(fā)生受多種因素的影響,目前最新研究表明microRNA及葉酸缺乏均可導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生,且是HPV感染的協(xié)同因素,而他們的作用機(jī)制如何目{前尚無(wú)定論,因此本研究的目的是：1.檢測(cè)宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌組織標(biāo)本中,miR-375的表達(dá)水平,探討其在宮頸癌變中的作用；2.檢測(cè)在不同濃度葉酸干預(yù)下宮頸癌細(xì)胞中 miR-375的表達(dá)水平,研究葉酸與miR-375表達(dá)水平的關(guān)系,并進(jìn)一步研究其在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。3.檢測(cè)在不同濃度葉酸干預(yù)下宮頸癌細(xì)胞中 miR-375啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài),探討葉酸與miR-375啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)的關(guān)系,研究其在宮頸癌中的作用,進(jìn)一步了解宮頸癌的發(fā)生機(jī)制,為宮頸癌的治療提供新思路。方法：1.標(biāo)本來(lái)源收集2013年5月-2014年1月,在我院婦科門(mén)診確診為CIN及宮頸鱗癌(Ⅰ a-Ⅱa期)患者的病變組織各30例,取宮頸病變組織離體后,立即用生理鹽水沖洗血液,置于組織凍存管,將標(biāo)本在液氮桶內(nèi)放置1h后,放入-80℃冰箱保存待實(shí)驗(yàn)用；另取確診為粘膜慢性炎患者的宮頸組織30例作為對(duì)照組。2.檢測(cè)miR-375的表達(dá)水平取上述所選90例患者的宮頸組織標(biāo)本,根據(jù)病理結(jié)果分為CIN組、宮頸癌組和正常對(duì)照組,提取總RNA,采用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)miR-375的表達(dá)水平。3.檢測(cè)miR-375啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)宮頸癌細(xì)胞株CaSki常規(guī)體外培養(yǎng),不同濃度葉酸干預(yù)后,提取基因組DNA,采用甲基化特異性PCR(methylation specific PCR, MSP)技術(shù),檢測(cè)miR-375啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)。4.結(jié)果判定取10μL PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上電泳,Ethidium Brmide染料染色,成像儀觀察并攝像。獲得甲基化產(chǎn)物,無(wú)論是否出現(xiàn)非甲基化產(chǎn)物,均判定為甲基化陽(yáng)性；只出現(xiàn)非甲基化產(chǎn)物時(shí)記為非甲基化；既未獲得甲基化產(chǎn)物也未獲得非甲基化產(chǎn)物則標(biāo)志本次實(shí)驗(yàn)失敗。6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,正態(tài)分布資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述；兩組資料的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),多組資料的比較采用one-wayANOVA和LSD-t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)；P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.miR-375的表達(dá)水平在三組之間進(jìn)行兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且在CIN及宮頸癌組織的表達(dá)水平與宮頸正正常上皮組織相比顯著下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.在不同濃度葉酸干預(yù)的宮頸癌細(xì)胞中,隨著葉酸濃度的升高,miR-375啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化陽(yáng)性率分別為56.67%(17/30)、56.67%(17/30)、53.33%(16/30)、46.67%(14/30)、36.67%(11/30)、20.00%(6/30)、6.67%(2/30),呈現(xiàn)出遞減趨勢(shì),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)3.在不同濃度葉酸干預(yù)的宮頸癌細(xì)胞中,隨著葉酸濃度的升高,miR-375的表達(dá)水平逐漸升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.在不同濃度葉酸干預(yù)下,宮頸癌細(xì)胞中miR-375的表達(dá)水平與甲基化狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論：1.與正常宮頸組織相比,CIN及宮頸癌組織中miR-375的表達(dá)水平明顯下調(diào)。2.葉酸缺乏可能通過(guò)誘導(dǎo)miR-375啟動(dòng)子區(qū)的異常高甲基化,使miR-375表達(dá)水平下調(diào),在宮頸癌變的過(guò)程中發(fā)揮一定作用。
[Abstract]:Objective : Cervical cancer is a kind of malignant tumor which is harmful to women ' s health . It is the second place in the death rank of female malignant tumor in China , and Shanxi is the high incidence area of cervical cancer . It is well known that cervical cancer has been affected by many factors . It is well known that the lack of microRNA and folic acid can lead to cervical cancer , and how to block CIN is the co - factor of HPV infection . So the aim of this study is to : 1 . To detect the expression level of miR - 375 in cervical epithelial neoplasia and cervical cancer tissue specimen , and to explore its role in cervical cancer .
2 . To investigate the expression level of miR - 375 in cervical cancer cells at different concentrations of folic acid , investigate the relationship between folic acid and miR - 375 expression level , and further study its role in the development of cervical cancer .
The expression level of miR - 375 was determined by fluorescence quantitative polymerase chain reaction ( MSP ) and methylation specific PCR ( MSP ) .
Only non - methylated products appear as non - methylated ;
No non - methylated products were obtained from methylated products , indicating that the experiment was failed . 6 . SPSS 16.0 software was used for data analysis , and the normal distribution data was described by mean 鹵 standard deviation .
Two groups of data were compared with t - test of two independent samples , one - way ANOVA and LSD - t test were used for the comparison of multiple sets of data .
The correlation analysis was correlated with man ' s rank .
Results : 1 . The expression level of miR - 375 in cervical cancer cells was significantly lower than that of normal cervical tissue ( P0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：1808206