本文選題：宮頸癌 + HPV-E基因��； 參考：《病毒學(xué)報(bào)》2017年04期

【摘要】：研究小干擾RNA(siRNA)沉默18型人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus 18,HPV18)E7基因?qū)θ藢m頸癌HeLa細(xì)胞凋亡和增殖的影響。培養(yǎng)人宮頸癌HeLa細(xì)胞株,構(gòu)建靶向E7基因的兩條siRNA,轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞株(實(shí)驗(yàn)組:分為siE7-1組和siE7-2組),以不做任何處理的HeLa細(xì)胞作為空白對(duì)照組(NC),轉(zhuǎn)染無功能siRNA的HeLa細(xì)胞作為陰性對(duì)照組(Scramble,SCR)。轉(zhuǎn)染48h后,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)轉(zhuǎn)染E7siRNA后HeLa細(xì)胞mRNA含量變化;采用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)E7蛋白表達(dá)量變化;流式細(xì)胞術(shù)Flow cytometry(FCM)檢測(cè)HeLa細(xì)胞凋亡情況;克隆形成和CCK-8檢測(cè)HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況。與NC組相比,siE7-1組和siE7-2組E7基因mRNA表達(dá)明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);轉(zhuǎn)染48h后,與NC組相比,siE7-1和siE7-2實(shí)驗(yàn)組HeLa細(xì)胞內(nèi)HPV18-E7蛋白表達(dá)水平明顯下降(P0.05);轉(zhuǎn)染48h后,siE7-1組和siE7-2組的細(xì)胞凋亡率分別為17.78%和36.44%,與NC組相比明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),細(xì)胞凋亡結(jié)果提示siRNA沉默E7促進(jìn)HeLa細(xì)胞凋亡;CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示siE7-1組和siE7-2組細(xì)胞生長(zhǎng)增殖抑制,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果與CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,siE7-1組和siE7-2組HeLa細(xì)胞形成的克隆數(shù)明顯少于NC組,細(xì)胞生長(zhǎng)增殖抑制(P0.01)。研究結(jié)果表明,沉默E7基因促進(jìn)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡,抑制增殖,為宮頸癌治療提供潛在靶點(diǎn)。
[Abstract]:To study the effect of small interference RNA-siRNA-silencing human papillomavirus type 18 (HPV18E7) gene on apoptosis and proliferation of human cervical cancer HeLa cells. Human cervical cancer HeLa cell line was cultured. Two siRNAs targeting E7 gene were constructed and transfected into HeLa cell lines (experimental group: divided into siE7-1 group and siE7-2 group. HeLa cells without any treatment were used as blank control group; HeLa cells transfected with non-functional siRNA as negative control group). After 48 hours of transfection, the changes of mRNA content in HeLa cells after transfection were detected by real-time fluorescence quantitative PCR RT-PCR, E7 protein expression was detected by Western blotting, apoptosis of HeLa cells was detected by flow cytometry (FCM). Clone formation and CCK-8 were used to detect the growth and proliferation of HeLa cells. Compared with NC group, the mRNA expression of E7 gene in siE7-1 group and siE7-2 group was significantly down-regulated (P 0.01). Compared with NC group and siE7-2 group, the expression of HPV18-E7 protein in HeLa cells decreased significantly, and the apoptotic rates of siE7-1 group and siE7-2 group were 17.78% and 36.44%, respectively, which were significantly higher than those in NC group. The result of apoptosis indicated that siRNA silencing E7 could promote apoptosis of HeLa cells. The results of CCK-8 experiment showed that siE7-1 group and siE7-2 group inhibited cell growth and proliferation. The results of Clone formation assay were consistent with those of CCK-8 assay, and the number of HeLa cells in siE7-1 group and siE7-2 group was significantly lower than that in NC group, and the cell growth and proliferation inhibition was P0.01%. The results showed that the silencing of E7 gene could promote apoptosis and inhibit proliferation of human cervical cancer HeLa cells and provide a potential target for cervical cancer therapy.
【作者單位】： 湖北省武漢市東湖醫(yī)院;湖北省武漢市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科;
【基金】：武漢市衛(wèi)生局臨床醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目資助(項(xiàng)目號(hào):WX11B05),題目:多細(xì)胞球體模型分析缺氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)在宮頸癌發(fā)展演進(jìn)進(jìn)程中~~
【分類號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：1780149