發(fā)布時(shí)間：2018-04-18 08:53

  本文選題：微小RNA + 順鉑��； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：背景卵巢癌是女性生殖器官常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位,致死率方面,卵巢上皮癌死亡率高于其他各婦科腫瘤,是致死率最高的癌癥,對(duì)婦女生命造成嚴(yán)重威脅。腫瘤組織耐藥性常常導(dǎo)致癌癥細(xì)胞化療藥物敏感性降低,因此,研究卵巢癌腫瘤細(xì)胞耐藥性,增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的藥物敏感性的方法在腫瘤治療及延長(zhǎng)癌癥患者生存時(shí)間有著非常重要的意義。雖然如今鉑類(lèi)抗腫瘤藥物腫瘤越來(lái)越多,但因?yàn)殂K類(lèi)抗腫瘤藥物在化學(xué)結(jié)構(gòu)上都非常相似,與腫瘤組織細(xì)胞的作用機(jī)制也相同,臨床使用過(guò)程中的耐藥性或者交叉耐藥性已經(jīng)成為了順鉑類(lèi)抗腫瘤藥物繼續(xù)推廣的最大障礙�？朔拗沏K類(lèi)抗腫瘤藥物的耐藥性或交叉耐藥性,提高腫瘤組織細(xì)胞的順鉑藥物敏感性,指導(dǎo)并拓展臨床應(yīng)用都具有重要的意義。目的MicroRNA是最近發(fā)現(xiàn)存在于細(xì)胞質(zhì)中的一大類(lèi)短小非編碼RNA,具有廣泛的基因轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控作用,鉑類(lèi)藥物耐藥的卵巢癌細(xì)胞株中miR-23A表達(dá)明顯上升,以我們推測(cè)miR-23A基因表達(dá)的異常上調(diào)將有可能影響腫瘤細(xì)胞的化療敏感性,可能在卵巢癌的化療耐藥中發(fā)揮了作用。本研究將基于RNA沉默技術(shù)抑制卵巢癌組織細(xì)胞中miR-23A基因的表達(dá),考察基因沉默后卵巢癌細(xì)胞順鉑敏感性的變化,分析抑制miR-23A表達(dá)后,耐藥卵巢癌A2780細(xì)胞對(duì)化療藥物順鉑的敏感性變化及其初步機(jī)制,進(jìn)而為臨床解決卵巢癌化療過(guò)程中耐藥性困擾提供新的思路和方案。方法對(duì)卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株A2780進(jìn)行培養(yǎng)后,分別培養(yǎng)耐藥性和非耐藥性的卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞,將細(xì)胞分為兩組,其中A組耐藥性腫瘤組織細(xì)胞,B組為非耐藥性卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞,應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)耐藥/非耐藥性卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞中miR-23A表達(dá)水平;應(yīng)用MTT法檢測(cè)antago mir-23a抑制miR-23A并經(jīng)鉑處理后細(xì)胞增殖抑制率;流式細(xì)胞分析細(xì)胞周期分布;Hoechst33258染色分析細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化;Western blot法分析耐藥糖蛋白P-gp的表達(dá)變化;Western blot考察卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞中E-cadherin及N-cadherin表達(dá)水平的變化;Transwell實(shí)驗(yàn)考察卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞的遷移能力。應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。正態(tài)分布的計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn);非正態(tài)分布的計(jì)量資料用中位數(shù)表示;計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和率表示,組間比較采用卡方檢驗(yàn)。結(jié)果耐藥性卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞中miR-23A的表達(dá)水平明顯高于非耐藥性卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;抑制miR-23A并經(jīng)鉑處理后,細(xì)胞增殖抑制率顯著上升(P0.01),藥物中效濃度IC50為17.89μmol/L,比對(duì)照組IC50110.18μmol/L降低了83.76%(P0.01),細(xì)胞被阻滯于G0/G1期且凋亡率增加(P0.01);Hoechst33258染色見(jiàn)細(xì)胞核濃縮、染色增強(qiáng)。Western blot檢測(cè)提示細(xì)胞P-gp蛋白表達(dá)隨著順鉑濃度加大而逐漸減低(P0.001);miR-23A被抑制后,卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞中E-cadherin及N-cadherin表達(dá)水平發(fā)生明顯變化,卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力明顯減弱(P0.001);Transwell實(shí)驗(yàn)表明,miR-23A被抑制后,卵巢癌腫瘤組織細(xì)胞的遷移能力降低明顯(P0.001)。結(jié)論抑制耐藥卵巢癌A2780細(xì)胞內(nèi)miR-23A表達(dá)后,細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性顯著增加,這可能miR-23A靶基因負(fù)性調(diào)控因素得以緩解,并由此引發(fā)P-gp蛋白表達(dá)受抑有關(guān)�；诒狙芯康膶�(shí)驗(yàn)結(jié)果及已證實(shí)的相關(guān)結(jié)果,我們推測(cè),耐藥卵巢癌A2780細(xì)胞中miR-23A表達(dá)顯著增高,miR-23A與Runx3 3'UTR區(qū)結(jié)合,抑制Runx3的表達(dá),從而限制了Runx3對(duì)MDR1的表達(dá)沉默作用,使得耐藥細(xì)胞P-gp表達(dá)明顯上升,進(jìn)而通過(guò)經(jīng)典途徑發(fā)揮了耐藥作用。而抑制miR-23A的表達(dá)使其調(diào)控作用減弱,可提高Runx3的表達(dá)量,促進(jìn)Runx3對(duì)MDR1的表達(dá)沉默作用,使得P-gp蛋白表達(dá)減少,不同程度的抑制了經(jīng)典耐藥途徑作用,從而提高耐藥細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬棟;孫學(xué)軍;;Runx3和CHD5基因在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及臨床意義[J];國(guó)際腫瘤學(xué)雜志;2016年05期

2 李冉紅;陳晨;劉輝;;小分子干擾RNA干擾相關(guān)基因表達(dá)對(duì)卵巢癌化療敏感性影響的研究進(jìn)展[J];中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志(電子版);2016年01期

3 李霞;史惠蓉;鄧佑興;張瑞濤;;沉默MACC1的表達(dá)對(duì)卵巢癌細(xì)胞系SKOV-3順鉑化療敏感性的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2016年01期

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本文編號(hào)：1767650