本文選題：POI + MCM8��； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：[背景]原發(fā)性卵巢功能不全(Primary ovarian insufficiency,POI)又稱為卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF),是嚴(yán)重影響育齡期女性身心健康的常見生殖內(nèi)分泌疾病之一。其臨床特征主要表現(xiàn)為原發(fā)性閉經(jīng)或40歲之前繼發(fā)性閉經(jīng),并伴有高促性腺激素以及雌激素水平低下等一系列圍絕經(jīng)期表現(xiàn)。POI病因高度異質(zhì),已知病因包括染色體異常、基因突變、免疫因素、醫(yī)源性損傷以及環(huán)境因素等,其中遺傳學(xué)因素約占20%-25%。迄今為止,僅有少數(shù)基因通過功能研究證實(shí)其致病性,包括位于X染色體的BMP15、PGRMC1和FMR1基因,以及常染色體的FSHR、GDF9、NR5A、NOBOX、FIGLA和FOXL2等基因。近年來,國內(nèi)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因與女性早絕經(jīng)、卵巢儲備功能下降以及POI的發(fā)生密切相關(guān),其中,微小染色體微粒蛋白8(Minichromosome maintenance complex component 8,MCM8)基因是研究熱點(diǎn)之一。微小染色體微粒蛋白8是微小染色體微粒蛋白(Minichromosome maintenance complex component,MCM)家族成員,參與 DNA 復(fù)制、減數(shù)分裂和DNA雙鏈斷裂同源重組修復(fù)過程。Mcm8基因敲除雌鼠表現(xiàn)為卵母細(xì)胞減數(shù)分裂障礙,卵泡進(jìn)行性減少,卵巢萎縮。Aleksandar Rajkovic等利用全外顯子組測序在POI家系中發(fā)現(xiàn)MCM8純合錯義突變,并證實(shí)該突變破壞了染色體穩(wěn)定性。但MCM8在散發(fā)性POI患者中的致病性尚未見報(bào)道。因此,我們在192例散發(fā)性POI患者中進(jìn)行基因突變篩查,以明確MCM8與散發(fā)性POI相關(guān)性和致病機(jī)制。[目的]探討MCM8與中國漢族散發(fā)性POI的相關(guān)性,并闡明致病機(jī)制。[方法]選擇192例中國漢族散發(fā)性POI患者為病例組。入選標(biāo)準(zhǔn)包括:a.年齡在20-35歲;b.原發(fā)性或繼發(fā)性閉經(jīng);c.促卵泡生成素(FSH)40IU/L;d.染色體核型為46,XX;e.無POI家族史。排除標(biāo)準(zhǔn)包括:既往有免疫性疾病、盆腔感染、卵巢手術(shù)、放化療、其他醫(yī)源性損傷等。同時收集312例中國漢族健康女性作為對照組(包括192例年齡匹配、月經(jīng)規(guī)律的育齡期女性以及120例年齡45歲以上、FSH12 IU/L、雙側(cè)卵巢竇狀卵泡數(shù)≥3個、月經(jīng)規(guī)律的健康女性)。提取病例組和對照組女性外周血全基因組DNA,采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增MCM8基因的19個外顯子及相應(yīng)側(cè)翼序列,進(jìn)行直接測序。將測序結(jié)果與Ensembl提供的正常堿基序列進(jìn)行序列比對。針對新發(fā)現(xiàn)的變異類型設(shè)計(jì)DNA損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證新發(fā)MCM8基因變異的致病性及機(jī)制。[結(jié)果]測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)2個新發(fā)錯義突變:c.A950T(p.H317L)和c.A1802(p.H601R),6 個已知單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)(Single-nucleotide polymorphisms,SNP)(5 個非同義 SNP:rs236110、rs116926921、rs58487183、rs16991591、rs61752028,1個同義SNPrs3761873)。DNA損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與野生型HeLa細(xì)胞(WT)相比,過表達(dá)p.H317L以及p.H601R突變型MCM8的HeLa細(xì)胞(MT)對DNA損傷誘導(dǎo)劑絲裂霉素C(MMC)更為敏感,表現(xiàn)為磷酸化組蛋白H2A(γH2AX)表達(dá)水平明顯上調(diào)。MMC處理后更換新培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2小時,WT和p.H601R突變體γH2AX的表達(dá)水平明顯降低或消失,而p.H317L突變體γH2AX的表達(dá)水平卻沒有明顯變化,提示突變p.H317L和p.H601R均影響了 MCM8的DNA損傷修復(fù)功能,而p.H317L對MCM8蛋白DNA損傷修復(fù)能力影響更為顯著。[結(jié)論及意義]首次在中國漢族散發(fā)性POI患者中發(fā)現(xiàn)MCM8基因突變,并通過功能實(shí)驗(yàn)證實(shí)突變p.H317L和p.H601R型MCM8 DNA損傷修復(fù)功能受損,由此推測該基因突變導(dǎo)致的卵母細(xì)胞減數(shù)分裂障礙可能是POI的致病機(jī)制之一。
[Abstract]:Abstract : Primary ovarian insufficiency ( POI ) is also known as ovarian failure ( POIs ) , which is one of the most common reproductive endocrine diseases in women ' s physical and mental health . Methods : 192 Chinese Han Chinese sporadic POI patients were selected as a case group . Inclusion criteria included : a . age ranged from 20 to 35 years ; b . primary or secondary amenorrhea ; c . FSH 40 IU / L ; d . chromosomal karyotype 46 , XX ; e . No family history of POIs . DNA was amplified by polymerase chain reaction ( PCR ) and sequenced . The results showed two new missense mutations : c . A 950 T ( p . H317L ) and c . A1802 ( p . H601R ) , 6 known single nucleotide polymorphisms ( SNPs ) ( 5 non - synonymous SNPs : rs236110 , rs116926921 , rs58487183 , rs169991 , rs617520 28 , 1 synonymous SNPrs3761873 ) . The results of DNA damage repair showed that overexpression of p . H317L and p . H601R mutant MCM8 were more sensitive than wild type HeLa cells ( WT ) .

【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R711.75

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本文編號：1748874