本文選題：紫杉醇　切入點：預(yù)定位技術(shù)　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景卵巢癌的發(fā)病率在女性生殖系統(tǒng)腫瘤中排名第三,其病死率高居第一。雖然卵巢癌患者的死亡與多種因素有關(guān),但早期診斷、早期及正確的治療不可否認(rèn)是降低其死亡率的關(guān)鍵。因此,如何實現(xiàn)卵巢癌的早期診斷、選擇適合不同患者的恰當(dāng)?shù)闹委煼桨?一直以來都是醫(yī)務(wù)工作者們努力的方向。目前,靶向各種腫瘤的PLGA納米粒的制備、載藥、載基因等是超聲分子顯像與治療的研究熱點。將化療藥物紫杉醇包載入靶向卵巢癌的相變型PLGA納米粒中,不僅可以實現(xiàn)卵巢癌超聲分子顯像,實現(xiàn)卵巢癌的早期診斷,還能解決紫杉醇因疏水性而帶來的給藥受限的問題,提高藥物效能、減少藥物用量、降低藥物毒副作用。傳統(tǒng)的腫瘤靶向方式多為直接靶向法,雖操作簡便,但容易受到體內(nèi)微環(huán)境的影響,同時,常用的直接靶向法在配體在與PLGA效應(yīng)分子共價結(jié)合過程中,可能會因競爭性而抑制部分配體上的功能基團(tuán)與受體結(jié)合,而導(dǎo)致靶向性減低。為此,如何提高靶向腫瘤效率成為學(xué)者們努力解決的難題。預(yù)定位技術(shù)源于放射性核素顯像,該技術(shù)可有效提高腫瘤靶/非靶比值。然而鮮有將該技術(shù)運用到超聲分子成像研究中。本研究擬制備攜載廣譜化療藥物紫杉醇的相變型plga多功能納米粒,并采用生物素-鏈霉親和素二步法預(yù)定位技術(shù),研究相變型plga多功能納米粒聯(lián)合預(yù)定位技術(shù)在卵巢癌細(xì)胞的體外尋靶、殺傷癌細(xì)胞中的效能,旨在探索預(yù)定位技術(shù)用于腫瘤靶向超聲分子成像與治療的可行性,為卵巢癌的精準(zhǔn)診療提供新思路。目的1.制備鏈霉親和素化的載紫杉醇相變型plga納米粒(ptx-plga-sa/pfps),檢測該納米粒紫杉醇的包封率、觀察其體外釋藥特征,及低功率聚焦超聲(lifu)致其相變后增強(qiáng)超聲造影情況及光鏡下熱致相變情況。2.探討相變型載藥plga納米聯(lián)合預(yù)定位技術(shù)在卵巢癌細(xì)胞的體外尋靶、殺傷癌細(xì)胞中的效能,為進(jìn)一步研究預(yù)定位技術(shù)提高體內(nèi)腫瘤組織的靶向超聲分子成像與治療提供前期的研究基礎(chǔ)。方法1.采用單乳化法(o/w)制備載紫杉醇相變型plga納米粒(ptx-plga/pfps)并通過碳二亞胺法將其進(jìn)行鏈霉親和素化(ptx-plga-sa/pfps)。通過高效液相色譜法(hplc)檢測紫杉醇的包封率及載藥量,并通過恒溫?fù)u床透析法研究其體外釋藥特征。lifu照射及加熱條件下觀察ptx-plga-sa/pfps納米粒體外增強(qiáng)超聲顯影情況及光鏡下相變過程。dfy軟件分析lifu致相變前后超聲強(qiáng)度變化情況。2.采用碳二亞胺法將抗cea抗體(ab)與ptx-plga/pfps共價連接,制備出載抗cea抗體(ab)的載藥相變型納米粒(ptx-plga-ab/pfps)作為直接靶向?qū)φ战M。通過激光共聚焦顯微鏡分別觀察ptx-plga-sa/pfps與ptx-plga-ab/pfps上sa及ab的連接情況,并通過流式細(xì)胞儀檢測sa及ab的連接率。3.采用共聚焦激光顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)檢測ptx-plga-sa/pfps聯(lián)合二步法預(yù)定位技術(shù)組(載藥預(yù)定位靶向組)、ptx-plga-ab/pfps組(載藥直接靶向組)、ptx-plga/pfps組(載藥非靶向組)及抗體阻斷組對卵巢癌skov3細(xì)胞的體外尋靶效能,并通過cck-8試劑法檢測載藥預(yù)定位靶向組、載藥直接靶向組、載藥非靶向組(ptx-plga/pfps組)、單純納米粒組(plga/pfps)、單純藥物組細(xì)胞存活率,評價ptx-plga-sa/pfps聯(lián)合二步法預(yù)定位技術(shù)靶向殺傷癌細(xì)胞的能力。結(jié)果1.本研究成功制備了ptx-plga-sa/pfps納米粒,粒徑為383.0±75.59nm。光鏡及電鏡下觀察到ptx-plga-sa/pfps大小分布均勻,呈球形。ptx包封率和載藥量分別為(71.56±6.51)%、(6.57±0.61)%。體外釋藥呈突釋特征,釋藥率在2~3d時達(dá)到70%以上。lifu聲功率為7.5w作用3min致相變后,可明顯增強(qiáng)超聲顯像(*p0.05)。加至熱45℃時納米粒開始相變?yōu)槲⑴?當(dāng)加熱板溫度到達(dá)60℃時,大部分納米粒發(fā)生相變,且隨著溫度逐漸上升而發(fā)生破裂。2.激光共聚焦顯微鏡下觀察到呈紅色熒光的pe標(biāo)記的sa(pe-sa)成功連接到ptx-plga/pfps上;fitc標(biāo)記的呈綠色熒光的二抗與dii標(biāo)記的呈紅色熒光的PTX-PLGA/PFPs融合,呈黃色熒光,說明Ab已成功與其連接。流式細(xì)胞儀測得納米粒與鏈霉親和素及抗體的結(jié)合效率分別為(97.16±1.20)%及(92.74±5.75)%。3.體外尋靶實驗結(jié)果表明,載藥預(yù)定位組卵巢癌SKOV3細(xì)胞的DiI標(biāo)記的呈紅色熒光的納米粒明顯多于載藥直接靶向組、載藥非靶向組及抗體阻斷組,流式細(xì)胞術(shù)檢測載藥預(yù)定位組細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度高于其余各組(*P0.05)。癌細(xì)胞殺傷實驗中,載藥預(yù)定位組細(xì)胞存活率低于其余各組(*P0.05),僅次于單純藥物組(*P0.05)。結(jié)論1.本研究成功制備了鏈霉親和素化的載紫杉醇相變型PLGA納米粒(PTX-PLGA-SA/PFPs),該納米粒粒徑分布均勻,紫杉醇包封率高,釋藥快,且釋藥率高。LIFU及加熱可致其相變,且相變后可明顯增強(qiáng)超聲顯影。鏈霉親和素與該納米粒連接效率高。2.通過對比直接靶向方式,證實二步法生物素-鏈霉親和素預(yù)定位技術(shù)能提高載紫杉醇相變型PLGA納米粒對體外卵巢癌細(xì)胞的靶向性及殺傷效能,為卵巢癌的超聲分子靶向顯影與治療提供了一種新的可能途徑。
[Abstract]:Objective 1 . To study the effect of phase change plga multifunctional nanoparticles combined with pre - determined technique on ovarian cancer cell in vitro and to study the effect of phase - modified plga multifunctional nanoparticles combined with the pre - determined technique in the study of ovarian cancer cell . The results showed that the size distribution of ptx - plga - sa / pfps was ( 97.16 鹵 1.20 ) % and ( 92.74 鹵 5.75 ) % respectively .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31;R445.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 駱杰;王志剛;鐘世根;張群霞;宋衛(wèi)香;張勇;;攜紫杉醇和Herceptin高分子超聲造影劑體外尋靶及體內(nèi)腫瘤藥物含量分析[J];中國介入影像與治療學(xué);2016年02期

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本文編號：1727138