本文選題：線粒體功能　切入點(diǎn)：線粒體融合蛋白-2　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景:子癇前期是妊娠期特有的疾病,其發(fā)病機(jī)制尚不明確,目前廣泛認(rèn)同的發(fā)病機(jī)制為“兩階段學(xué)說(shuō)”,其主要內(nèi)容為滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)功能障礙及子宮螺旋小動(dòng)脈重鑄異常,致使胎盤(pán)缺血缺氧,引起子癇前期的發(fā)生[1]。線粒體融合蛋白2(Mfn2)是線粒體動(dòng)力蛋白之一,定位于線粒體外膜,促進(jìn)線粒體融合,參與線粒體的形態(tài)和功能調(diào)節(jié)、細(xì)胞能量代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、增殖、凋亡等眾多細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程[2,3]。已有研究發(fā)現(xiàn)線粒體融合蛋白2在子癇前期患者胎盤(pán)組織中表達(dá)下降,并且線粒體融合蛋白-2在孕早期胚胎的發(fā)育中起著重要作用[4-6]。但線粒體融合蛋白-2在孕婦母體外周血清中的表達(dá)及對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力的影響尚不清楚。目的:了解線粒體融合蛋白-2在子癇前期母體外周血清及正常孕婦外周血清中的表達(dá)情況,研究線粒體融合蛋白-2低表達(dá)對(duì)絨毛膜癌滋養(yǎng)細(xì)胞JEG-3細(xì)胞侵襲能力的影響,進(jìn)而探討線粒體融合蛋白-2在子癇前期中的作用機(jī)制。方法:1標(biāo)本采集:收集子癇前期、妊娠期高血壓及正常孕婦母體外周血,5000轉(zhuǎn)/分,離心5分鐘,將血清收集于1.5毫升EP管,-80度冰箱保存。2使用Mfn2 ELISA試劑盒(優(yōu)爾生)檢測(cè)三組母體外周血清中線粒體融合蛋白-2水平。3構(gòu)建并篩選Mfn2低表達(dá)質(zhì)粒。4 JEG-3細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染:所有試驗(yàn)中JEG-3細(xì)胞均分為3組培養(yǎng),即空白對(duì)照組、轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組、Mfn2低表達(dá)組。其中細(xì)胞培養(yǎng)使用DMEM培養(yǎng)基,血清濃度為10%,轉(zhuǎn)染試劑為T(mén)IANGEN轉(zhuǎn)染試劑。5檢測(cè)指標(biāo):(1)應(yīng)用Western Blot方法檢測(cè)各處理組線粒體融合蛋白-2的表達(dá)情況;(2)通過(guò)MTT試驗(yàn)檢查各組中JEG-3細(xì)胞的增殖能力;(3)通過(guò)劃痕試驗(yàn)分析線粒體融合蛋白-2表達(dá)下降后JEG-3細(xì)胞的遷移運(yùn)動(dòng)能力;(4)通過(guò)Transwell試驗(yàn)分析線粒體融合蛋白-2表達(dá)下降后JEG-3細(xì)胞的侵襲能力。6通過(guò)SPSS18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1收集的子癇前期患者血清標(biāo)本20例,妊娠期高血壓患者血清標(biāo)本18例,正常妊娠血清標(biāo)本35例。所有患者的入選標(biāo)準(zhǔn)均根據(jù)ACOG標(biāo)準(zhǔn),且滿足以下條件:孕周大于32周;單胎;非IVF-ET妊娠;年齡介于20-35歲;無(wú)其他妊娠合并癥。2入選的三組間年齡構(gòu)成:子癇前期組平均年齡為29.65±4.66歲,妊娠期高血壓組平均年齡為31.00±4.65歲,正常妊娠組平均年齡為29.11±3.55歲,各組在年齡構(gòu)成上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05。3使用ELISA試劑盒對(duì)母體外周血清Mfn2蛋白檢測(cè)結(jié)果:子癇前期及妊娠期高血壓患者母體外周血清Mfn2蛋白表達(dá)水平較正常妊娠組母體外周血清水平升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。但是子癇前期組與妊娠期高血壓組比較,線粒體融合蛋白-2在母體外周血清的表達(dá)水平?jīng)]有明顯差異,P0.05。4構(gòu)建并篩選質(zhì)粒結(jié)果:由吉?jiǎng)P基因公司構(gòu)建3個(gè)Mfn2低表達(dá)質(zhì)粒,并在其中篩選出干擾效果最優(yōu)的質(zhì)粒為Mfn2RNAi19851。5細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果:將構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染JEG-3細(xì)胞后,線粒體融合蛋白-2低表達(dá),提示成功構(gòu)建線粒體融合蛋白-2低表達(dá)的細(xì)胞模型;在線粒體融合蛋白-2低表達(dá)組,JEG-3細(xì)胞的侵襲、遷移能力下降(P0.05),但細(xì)胞增殖能力無(wú)明顯變化(P0.05)。結(jié)論:1線粒體融合蛋白-2可能作為子癇前期早期篩查的標(biāo)記物。2線粒體融合蛋白-2可能通過(guò)影響滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲能力而參與子癇前期的發(fā)生與發(fā)展。
[Abstract]:Background : Preeclampsia is a unique disease in pregnancy . Its pathogenesis is not clear . The pathogenesis of widespread identification is " two - stage theory " . Its main contents are nourishing cell infiltration dysfunction and abnormal uterine spiral arterioles . The effects of mitochondrial fusion protein - 2 on the invasion ability of JEG - 3 cells in maternal peripheral blood and normal pregnant women were investigated . Conclusion : 1 Mitochondrial fusion protein - 2 may be used as a marker for early stage screening of eclampsia . Conclusion : 1 Mitochondrial fusion protein - 2 may participate in the occurrence and development of pre - eclampsia by affecting the invasion ability of trophoblasts .

【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R714.244

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本文編號(hào)：1724265