本文選題：宮頸癌　切入點：Hela細胞　出處：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：背景:宮頸癌是婦科最為常見的惡性腫瘤,其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上漲的趨勢,并且宮頸癌發(fā)病趨向年輕化。目前宮頸癌的發(fā)病機制研究尚不十分明確,臨床治療多以手術(shù)擴大切除以及放/化療為主,給宮頸癌患者尤其年輕患者帶來巨大創(chuàng)傷。因此針對宮頸癌的早期診斷、預(yù)防及合理有效的治療顯得尤為重要。目前,HPV感染作為宮頸癌發(fā)病的風險因素已得到公認,HPV感染啟動下游相關(guān)機制導(dǎo)致HPV病毒顆粒的不斷復(fù)制、感染以及宮頸上皮細胞的惡性增殖是宮頸癌發(fā)病的主要原因,但是HPV感染影響下游的關(guān)鍵分子和信號通路尚不十分明確,限制了宮頸癌的早期快速篩查以及靶向性生物治療的快速發(fā)展和應(yīng)用。因此,針對HPV感染下游關(guān)鍵機制進行解析,尋找高效特異的靶分子用于宮頸癌的診斷和靶向治療研究具有重要的臨床意義。BCAP31是B細胞受體相關(guān)蛋白家族的重要成員,主要定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng),負責多種蛋白向高爾基體的轉(zhuǎn)運。BCAP31作為載體蛋白在介導(dǎo)膜整合蛋白質(zhì)的錨定以及轉(zhuǎn)運、錯誤折疊蛋白的識別及降解、調(diào)節(jié)Caspase依賴的細胞凋亡等方面發(fā)揮重要功能。本課題組前期利用自己獨創(chuàng)的生精細胞特異性單克隆抗體篩選腫瘤/睪丸抗原的方法,結(jié)合免疫沉淀-質(zhì)譜分析鑒定,獲得一個新的腫瘤/睪丸抗原BCAP31。利用組織芯片分析其蛋白表達規(guī)律,發(fā)現(xiàn)BCAP31分子在人正常組織中不表達(除睪丸組織外),在宮頸、卵巢、肺、乳腺、肝臟、食道、直腸和結(jié)腸等腫瘤組織中顯著高表達,其中以宮頸癌組織中BCAP31的表達強度和陽性率最高可達87.5%,提示BCAP31作為一個新的腫瘤/睪丸抗原可能參與宮頸癌的發(fā)病。本課題擬從臨床樣本入手,明確BCAP31與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)性,并進一步探討B(tài)CAP31調(diào)節(jié)宮頸上皮細胞增殖、侵襲和遷移的作用,揭示宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中BCAP31的關(guān)鍵作用及其分子機制,從而深化對宮頸癌發(fā)病機理的認識,并為其治療提供新的思路。目的:1.系統(tǒng)分析BCAP31在宮頸癌患者組織中的表達變化,明確BCAP31表達水平與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;2.探討B(tài)CAP31對宮頸癌細胞系相關(guān)生物學(xué)行為的影響;3.研究BCAP31影響宮頸癌細胞生物學(xué)行為可能的分子機制,闡明BCAP31在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的重要作用。方法:1.臨床收集不同病理分級的宮頸癌組織標本,利用Western blot,Real-time PCR以及免疫組織化學(xué)染色分析BCAP31在宮頸癌患者組織中的表達,統(tǒng)計學(xué)分析其與腫瘤大小、臨床分期、病理分級、是否發(fā)生遠端轉(zhuǎn)移以及患者生存期等臨床指標的關(guān)聯(lián)性;2.利用siRNA特異性干涉宮頸癌細胞系中BCAP31的表達,從細胞生長、周期、凋亡、遷移和侵襲等多個方面評估BCAP31對宮頸癌細胞生物學(xué)行為的影響;3.構(gòu)建BCAP31干涉后低表達的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系,結(jié)合裸鼠荷瘤模型,從瘤體大小、腫瘤轉(zhuǎn)移、小鼠生存等指標分析BCAP31對宮頸癌發(fā)生發(fā)展的影響;4.利用免疫共沉淀、激光共聚焦等方法,研究與BCAP31相互作用的靶分子,并對其進行干涉,分析下游相關(guān)分子和功能變化,研究BCAP31影響宮頸癌發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在分子機制。結(jié)果:1.Real-time PCR和Western blot分析結(jié)果顯示,BCAP31在宮頸癌患者腫瘤增生組織顯著高表達,而在周邊正常組織BCAP31僅有微量表達;2.161例宮頸癌患者組織免疫組化染色結(jié)果顯示,高表達BCAP31的例數(shù)為135例,占總例數(shù)的83.6%;相關(guān)性分析結(jié)果顯示,BCAP31高表達可能與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,腫瘤分化程度以及宮頸癌臨床分期密切相關(guān);3.107例宮頸癌患者電話回訪后生存分析結(jié)果顯示,BCAP31高表達的患者術(shù)后生存時間明顯縮短;4.細胞功能學(xué)研究發(fā)現(xiàn),干涉宮頸癌細胞系BCAP31的表達后,細胞的增殖、遷移和侵襲能力受到明顯的抑制;5.Western blot和周期分析結(jié)果顯示,干涉宮頸癌細胞系BCAP31的表達后細胞周期蛋白Cyclin D、Cyclin E和Cyclin E2的表達受到明顯抑制,同時細胞處于G1期阻滯;6.成功構(gòu)建BCAP31穩(wěn)轉(zhuǎn)干涉Hela細胞裸鼠荷瘤模型,在該模型中下調(diào)BCAP31表達后,Hela細胞的成瘤能力明顯降低、荷瘤小鼠的存活時間明顯延長,細胞向肝臟轉(zhuǎn)移能力受到抑制;7.免疫共沉淀及Western blot結(jié)果顯示,BCAP31具有調(diào)節(jié)侵襲遷移相關(guān)蛋白Drebrin、M-RIP、SPECC1和Nexilin的表達和亞細胞定位的功能;8.進一步功能分析發(fā)現(xiàn),BCAP31主要通過調(diào)節(jié)Drebrin的表達和亞細胞定位,影響細胞內(nèi)F-actin的裝配,發(fā)揮其調(diào)節(jié)宮頸癌細胞侵襲遷移能力。結(jié)論:通過本課題的研究,我們首次明確了腫瘤/睪丸抗原BCAP31與宮頸癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)性,揭示了BCAP31在調(diào)節(jié)宮頸癌細胞增殖、遷移和侵襲參與宮頸癌惡化中的作用及其分子機制,進一步豐富宮頸癌的發(fā)病機制研究,同時針對BCAP31進行靶向干預(yù)有可能成為宮頸癌新的治療策略。
[Abstract]:BACKGROUND : Cervical cancer is one of the most common malignant tumors in the world . The incidence of cervical cancer has been increasing year by year , and the incidence of cervical cancer has become younger . It is very important to study the role of BCAP31 as a new tumor / testis antigen in the diagnosis and treatment of cervical cancer . The expression of BCAP31 in cervical cancer patients was analyzed by Western blot , Real - time PCR and immunohistochemistry . The results showed that BCAP31 had the function of regulating the expression of Dreamy , M - RIP , SPECA and Nexilin and its molecular mechanism in regulating the proliferation , migration and invasion of cervical cancer cells , and further enriched the pathogenesis of cervical cancer .

【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.33
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本文編號：1713698