本文選題：唐氏綜合征　切入點：產前篩查　出處：《第三軍醫(yī)大學》2017年碩士論文

【摘要】：唐氏綜合征(Down's syndrome,DS)是人類最常見的引起新生兒智力和發(fā)育缺陷的先天性遺傳疾病,其在出生胎兒的發(fā)病率約為1/700。DS患兒除了智力缺陷以外還常常伴有先天性心臟病、精神和體格發(fā)育遲滯以及多種器官和組織的畸形等疾病,而且目前尚無有效的治療手段,因此,做好DS患兒的篩查避免其出生是預防DS的最有效方法。DS的產前檢查方案主要分為無創(chuàng)性檢查和有創(chuàng)性檢查,其中無創(chuàng)性檢查主要包括唐氏篩查和無創(chuàng)DNA檢測,有創(chuàng)性檢查包括羊膜腔液體穿刺檢查、絨毛膜穿刺檢查和胎兒臍帶血檢查等。唐氏篩查是目前應用最廣泛的DS產前篩查手段,安全性較高,但是特異性較差。無創(chuàng)DNA檢測的檢查費用較高,且檢測周期較長,目前多在第三方的醫(yī)療機構應用,不易在基層醫(yī)療機構推廣。羊膜腔液體穿刺檢查、絨毛膜穿刺檢查和胎兒臍帶血檢查均通過侵入性操作獲得胎兒細胞并對其進行染色體分型,雖特異性較高,但是受到操作者的臨床經驗影響大,且有1%導致流產的機率。因此,建立一種安全、價格合理又特異的DS產前檢測手段仍舊是產前診斷領域探索的方向,而與胎兒游離DNA(cell free fetal DNA,cff DNA),同屬于血液常見分子的微小RNA(micro RNA,miRNA)分子開始引起人們的重視。miRNA是一類長度約為20-25個堿基的非編碼RNA小分子,其主要生理作用是調控基因的表達。miRNA可以耐受血液中RNA酶的降解,可以在循環(huán)血液中長期穩(wěn)定的存在,同時miRNA還可以耐受外界強酸、強堿的處理,為miRNA的檢測帶來了方便。此外,miRNA還具有很強的組織和器官的特異性,為其成為理想的疾病循環(huán)血液學標志物奠定了堅實的基礎。通過前期研究,我們發(fā)現健康胎兒和唐氏患兒孕中期母體血漿存在135種表達差異的miRNA分子,其中,hsa-miR-124a-3p是表達量顯著性升高的miRNA分子中差異值最大的分子。因此,本課題選取hsa-miR-124a-3p作為目標分子,擬建立基于母體血液標志物hsa-miR-124a-3p的DS產前篩查的無創(chuàng)產前檢查(noninvasive prenatal testing,NIPT)檢測新方法。研究內容包括以下兩部分:(1)血漿hsa-miR-124a-3pRT-qPCR檢測方法的建立;(2)母體血漿hsa-miR-124a-3p在DS產前篩查中的臨床應用效能評價。目的:1.構建和優(yōu)化血漿hsa-miR-124a-3p的RT-qPCR檢測方法。2.探討母體血漿hsa-miR-124a-3p在DS產前篩查中的臨床應用價值。方法:選取hsa-miR-124a-3p作為研究目標分子,設計和合成hsa-miR-124a-3p逆轉錄引物及標準品,利用Taq Man?Small RNA assays、TaqMan?master mix with UNG等熒光定量PCR擴增試劑,建立hsa-miR-124a-3p的RT-qPCR檢測方法,并對反應體系和反應條件進行優(yōu)化和性能評價。利用建立的方法對36例健康胎兒母體血漿、11例唐氏綜合征胎兒母體血漿的hsa-miR-124a-3p的表達水平進行檢測,并對二者的檢測結果進行統計學分析。同時將hsa-miR-124a-3p檢測結果與臨床常用的血清唐氏篩查方法進行比較。結果:1.設計和合成了hsa-miR-124a-3p逆轉錄引物,確定引物的最佳工作濃度為100pmol/μL。2.合成了hsa-miR-124a-3p的標準品并對其質量進行了驗證,結果表明hsa-miR-124a-3p的標準品質量合格,可用作RT-qPCR的標準品。3.利用hsa-miR-124a-3p的標準品構建了hsa-miR-124a-3pRT-qPCR檢測的標準曲線并對其進行了評價,證明其符合要求。4.構建和優(yōu)化了血漿hsa-miR-124a-3pRT-qPCR檢測方法并對其進行了方法學評價,確定其線性范圍為1×10-2至1×10-6pmol/μL、檢測下限為1×10-8pmol/μL、能夠特異檢測出hsa-miR-124a-3p的循環(huán)數為35個,且檢測重復性良好。5.檢測并比較了hsa-miR-124a-3p在DS患兒和健康胎兒母體血漿中的表達水平,DS妊娠組的hsa-miR-124a-3p濃度顯著高于正常對照組。6.確定了hsa-miR-124a-3p預測DS妊娠高危風險的濃度區(qū)間值為10-5至10-3pmol/μL。7.對hsa-miR-124a-3pRT-qPCR檢測方法和唐氏篩查進行了比較,結果提示hsa-miR-124a-3p在DS妊娠風險預測的價值中等,但比常規(guī)血清唐氏篩查方法高。結論:1、成功建立了定量檢測血漿中hsa-miR-124a-3p的RT-qPCR方法。2、hsa-miR-124a-3p在DS胎兒母體血液中的表達異常增高,強烈提示hsa-miR-124a-3p可能是DS妊娠特異相關的母體血液新標志物。3、成功將10-5至10-3pmol/μl確定為hsa-miR-124a-3p檢測方法的DS高危風險的區(qū)間值,為hsa-miR-124a-3p在DS妊娠產前篩查中的應用奠定了基礎。4、hsa-miR-124a-3p預測DS的臨床價值較唐氏篩查更高。
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【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R714.5

【參考文獻】

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1 李雪峰;徐建軍;張青云;;熒光定量PCR檢測血清微小RNA-21方法的建立及對乳腺癌診斷的初步應用[J];中華檢驗醫(yī)學雜志;2011年10期

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2 殷小金;急性心肌梗死患者循環(huán)中三種候選microRNA的檢測及臨床意義[D];福建醫(yī)科大學;2014年

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本文編號：1658294