發(fā)布時(shí)間：2018-03-24 12:29

  本文選題：唐氏綜合征　切入點(diǎn)：產(chǎn)前篩查　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：唐氏綜合征(Down's syndrome,DS)是人類最常見的引起新生兒智力和發(fā)育缺陷的先天性遺傳疾病,其在出生胎兒的發(fā)病率約為1/700。DS患兒除了智力缺陷以外還常常伴有先天性心臟病、精神和體格發(fā)育遲滯以及多種器官和組織的畸形等疾病,而且目前尚無有效的治療手段,因此,做好DS患兒的篩查避免其出生是預(yù)防DS的最有效方法。DS的產(chǎn)前檢查方案主要分為無創(chuàng)性檢查和有創(chuàng)性檢查,其中無創(chuàng)性檢查主要包括唐氏篩查和無創(chuàng)DNA檢測(cè),有創(chuàng)性檢查包括羊膜腔液體穿刺檢查、絨毛膜穿刺檢查和胎兒臍帶血檢查等。唐氏篩查是目前應(yīng)用最廣泛的DS產(chǎn)前篩查手段,安全性較高,但是特異性較差。無創(chuàng)DNA檢測(cè)的檢查費(fèi)用較高,且檢測(cè)周期較長,目前多在第三方的醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)用,不易在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)推廣。羊膜腔液體穿刺檢查、絨毛膜穿刺檢查和胎兒臍帶血檢查均通過侵入性操作獲得胎兒細(xì)胞并對(duì)其進(jìn)行染色體分型,雖特異性較高,但是受到操作者的臨床經(jīng)驗(yàn)影響大,且有1%導(dǎo)致流產(chǎn)的機(jī)率。因此,建立一種安全、價(jià)格合理又特異的DS產(chǎn)前檢測(cè)手段仍舊是產(chǎn)前診斷領(lǐng)域探索的方向,而與胎兒游離DNA(cell free fetal DNA,cff DNA),同屬于血液常見分子的微小RNA(micro RNA,miRNA)分子開始引起人們的重視。miRNA是一類長度約為20-25個(gè)堿基的非編碼RNA小分子,其主要生理作用是調(diào)控基因的表達(dá)。miRNA可以耐受血液中RNA酶的降解,可以在循環(huán)血液中長期穩(wěn)定的存在,同時(shí)miRNA還可以耐受外界強(qiáng)酸、強(qiáng)堿的處理,為miRNA的檢測(cè)帶來了方便。此外,miRNA還具有很強(qiáng)的組織和器官的特異性,為其成為理想的疾病循環(huán)血液學(xué)標(biāo)志物奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。通過前期研究,我們發(fā)現(xiàn)健康胎兒和唐氏患兒孕中期母體血漿存在135種表達(dá)差異的miRNA分子,其中,hsa-miR-124a-3p是表達(dá)量顯著性升高的miRNA分子中差異值最大的分子。因此,本課題選取hsa-miR-124a-3p作為目標(biāo)分子,擬建立基于母體血液標(biāo)志物hsa-miR-124a-3p的DS產(chǎn)前篩查的無創(chuàng)產(chǎn)前檢查(noninvasive prenatal testing,NIPT)檢測(cè)新方法。研究內(nèi)容包括以下兩部分:(1)血漿hsa-miR-124a-3pRT-qPCR檢測(cè)方法的建立;(2)母體血漿hsa-miR-124a-3p在DS產(chǎn)前篩查中的臨床應(yīng)用效能評(píng)價(jià)。目的:1.構(gòu)建和優(yōu)化血漿hsa-miR-124a-3p的RT-qPCR檢測(cè)方法。2.探討母體血漿hsa-miR-124a-3p在DS產(chǎn)前篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法:選取hsa-miR-124a-3p作為研究目標(biāo)分子,設(shè)計(jì)和合成hsa-miR-124a-3p逆轉(zhuǎn)錄引物及標(biāo)準(zhǔn)品,利用Taq Man?Small RNA assays、TaqMan?master mix with UNG等熒光定量PCR擴(kuò)增試劑,建立hsa-miR-124a-3p的RT-qPCR檢測(cè)方法,并對(duì)反應(yīng)體系和反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化和性能評(píng)價(jià)。利用建立的方法對(duì)36例健康胎兒母體血漿、11例唐氏綜合征胎兒母體血漿的hsa-miR-124a-3p的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)二者的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。同時(shí)將hsa-miR-124a-3p檢測(cè)結(jié)果與臨床常用的血清唐氏篩查方法進(jìn)行比較。結(jié)果:1.設(shè)計(jì)和合成了hsa-miR-124a-3p逆轉(zhuǎn)錄引物,確定引物的最佳工作濃度為100pmol/μL。2.合成了hsa-miR-124a-3p的標(biāo)準(zhǔn)品并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行了驗(yàn)證,結(jié)果表明hsa-miR-124a-3p的標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量合格,可用作RT-qPCR的標(biāo)準(zhǔn)品。3.利用hsa-miR-124a-3p的標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建了hsa-miR-124a-3pRT-qPCR檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線并對(duì)其進(jìn)行了評(píng)價(jià),證明其符合要求。4.構(gòu)建和優(yōu)化了血漿hsa-miR-124a-3pRT-qPCR檢測(cè)方法并對(duì)其進(jìn)行了方法學(xué)評(píng)價(jià),確定其線性范圍為1×10-2至1×10-6pmol/μL、檢測(cè)下限為1×10-8pmol/μL、能夠特異檢測(cè)出hsa-miR-124a-3p的循環(huán)數(shù)為35個(gè),且檢測(cè)重復(fù)性良好。5.檢測(cè)并比較了hsa-miR-124a-3p在DS患兒和健康胎兒母體血漿中的表達(dá)水平,DS妊娠組的hsa-miR-124a-3p濃度顯著高于正常對(duì)照組。6.確定了hsa-miR-124a-3p預(yù)測(cè)DS妊娠高危風(fēng)險(xiǎn)的濃度區(qū)間值為10-5至10-3pmol/μL。7.對(duì)hsa-miR-124a-3pRT-qPCR檢測(cè)方法和唐氏篩查進(jìn)行了比較,結(jié)果提示hsa-miR-124a-3p在DS妊娠風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的價(jià)值中等,但比常規(guī)血清唐氏篩查方法高。結(jié)論:1、成功建立了定量檢測(cè)血漿中hsa-miR-124a-3p的RT-qPCR方法。2、hsa-miR-124a-3p在DS胎兒母體血液中的表達(dá)異常增高,強(qiáng)烈提示hsa-miR-124a-3p可能是DS妊娠特異相關(guān)的母體血液新標(biāo)志物。3、成功將10-5至10-3pmol/μl確定為hsa-miR-124a-3p檢測(cè)方法的DS高危風(fēng)險(xiǎn)的區(qū)間值,為hsa-miR-124a-3p在DS妊娠產(chǎn)前篩查中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。4、hsa-miR-124a-3p預(yù)測(cè)DS的臨床價(jià)值較唐氏篩查更高。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R714.5

【參考文獻(xiàn)】

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1 李雪峰;徐建軍;張青云;;熒光定量PCR檢測(cè)血清微小RNA-21方法的建立及對(duì)乳腺癌診斷的初步應(yīng)用[J];中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2011年10期

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1 姚遠(yuǎn);唐氏綜合征產(chǎn)前篩查母體血液生物新標(biāo)志物篩選及檢測(cè)方法的建立[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

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1 鄭麗莉;胎兒染色體疾病產(chǎn)前篩查方案比較及其應(yīng)用[D];華北理工大學(xué);2015年

2 殷小金;急性心肌梗死患者循環(huán)中三種候選microRNA的檢測(cè)及臨床意義[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

3 熊為;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)骨肉瘤病人血清中microRNA的表達(dá)[D];中南大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：1658294