本文選題：宮頸癌　切入點(diǎn)：miR-145　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景及目的： 宮頸癌是世界范圍內(nèi)女性最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)每年的新增發(fā)病人數(shù)就高達(dá)約13萬(wàn)，且患病女性年齡呈年輕化的趨勢(shì)�，F(xiàn)已明確，高危型人乳頭瘤病毒持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因。在治療方面，根治性子宮切除術(shù)及輔助性放化療的不斷完善，使早期宮頸癌患者的5年生存率提高到90%左右，但是對(duì)于晚期宮頸癌患者的治療效果仍不容樂(lè)觀。放射治療是局部晚期宮頸癌最主要的治療方式之一，但腫瘤輻射抵抗效應(yīng)的產(chǎn)生，進(jìn)而誘發(fā)腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等，嚴(yán)重影響了放療效果。 微小RNA（microRNAs，miRNAs）是一類長(zhǎng)度約為20-22個(gè)核苷酸的短小非編碼RNA。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs的異常表達(dá)在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用，，影響著腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、分化、轉(zhuǎn)移等。此外miRNAs還與腫瘤的治療反應(yīng)密切相關(guān)，且越來(lái)越多的研究證實(shí)多個(gè)miRNAs可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的放療敏感性。篩選能預(yù)測(cè)放療敏感性的miRNAs，并研究其在放療敏感性調(diào)節(jié)中的作用及機(jī)制，能更好地解釋輻射抵抗效應(yīng)產(chǎn)生的原因，進(jìn)而有助于為癌癥患者制定更加高效、低害的個(gè)體化的治療方案，并為放療增敏治療提供一個(gè)新的思路，有著重要的臨床意義。 以往研究證實(shí)，Hsa-miR-145-5p（miR-145）是重要的抑癌相關(guān)miRNA，在多種腫瘤中降調(diào)表達(dá)，同時(shí)也是放療相關(guān)miRNAs中頗具研究?jī)r(jià)值的一個(gè)分子。miR-145的表達(dá)受p53的調(diào)控，而后者作為基因衛(wèi)士，在細(xì)胞應(yīng)激刺激時(shí)起著促進(jìn)細(xì)胞周期阻滯、凋亡的抑癌作用。多個(gè)基于宮頸癌的芯片研究發(fā)現(xiàn)miR-145在宮頸癌組織中顯著下調(diào)表達(dá)，而上調(diào)后可有效抑制癌細(xì)胞增殖、增加藥物敏感性。且有研究發(fā)現(xiàn)，輻射致癌小鼠模型的胸腺腫瘤組織、輻射刺激后的前列腺癌細(xì)胞中，miR-145的表達(dá)都出現(xiàn)了明顯的變化。然而，miR-145與宮頸癌臨床病理因素的相關(guān)性，及是否能夠參與宮頸癌的放療敏感性調(diào)節(jié)，尚無(wú)相關(guān)研究報(bào)道。在本課題中，我們結(jié)合臨床樣本，進(jìn)一步驗(yàn)證、分析miR-145的降調(diào)有何臨床意義，并在細(xì)胞、動(dòng)物層面過(guò)表達(dá)miR-145，研究其對(duì)宮頸癌細(xì)胞放療敏感性的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制。 材料與方法： 我們首先收集42例臨床宮頸癌患者的宮頸癌組織及癌旁非腫瘤組織中，利用RNA抽提、反轉(zhuǎn)錄及實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，檢測(cè)組織中miR-145表達(dá)水平的變化。并分析miR-145表達(dá)水平與宮頸癌臨床病理因素的相關(guān)性。隨后，我們挑選了對(duì)放療較為敏感的人宮頸表皮癌細(xì)胞Me180細(xì)胞株及傾向于放療抵抗的人宮頸腺癌來(lái)源的HeLa細(xì)胞和人宮頸鱗癌來(lái)源的SiHa細(xì)胞，檢測(cè)不同放療敏感性的宮頸癌細(xì)胞株中miR-145的表達(dá)差異，以及輻射處理后的變化情況。我們又利用miRNA模擬物mimic在宮頸癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-145，用Cell Counting Kit-8（CCK-8）試劑、酶標(biāo)儀檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞輻射后細(xì)胞活性的變化情況。采用Annexin V-FITC聯(lián)合碘化丙啶染色液（Propidium Iodide，PI）雙標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞輻射處理后的凋亡情況。我們還構(gòu)建了HeLa細(xì)胞株裸鼠移植瘤模型，行輻射治療，并予瘤內(nèi)注射miRNA長(zhǎng)效激動(dòng)劑agomir，在瘤內(nèi)外源性過(guò)表達(dá)miR-145，在體外水平研究miR-145對(duì)宮頸癌細(xì)胞放療敏感性的影響。最后，我們利用生物信息學(xué)分析及芯片技術(shù)，篩選出miR-145與宮頸癌及放療相關(guān)的靶基因，在組織樣本中驗(yàn)證其與miR-145的相關(guān)性，并在過(guò)表達(dá)miR-145的細(xì)胞中行RT-qPCR和Western blot，檢測(cè)其mRNA、蛋白水平變化，還對(duì)裸鼠移植瘤中行免疫組織化學(xué)檢測(cè)，分析其表達(dá)水平的變化。 研究結(jié)果 miR-145在宮頸癌組織中顯著低表達(dá)，且其降調(diào)水平與臨床晚期、較大的腫瘤體積、中低分化程度密切相關(guān)。miR-145在放療敏感細(xì)胞Me180中表達(dá)水平高于放療抵抗細(xì)胞HeLa、SiHa，且放療抵抗細(xì)胞在放療后，miR-145的水平也相應(yīng)上調(diào)。過(guò)表達(dá)miR-145，可增加放療后宮頸癌細(xì)胞的凋亡水平，降低細(xì)胞存活率。瘤內(nèi)注射miR-145agomir，抑制腫瘤的生長(zhǎng)速度，增強(qiáng)放療敏感性。經(jīng)生物信息學(xué)及芯片分析，我們挑選出與宮頸癌及放療敏感性相關(guān)的靶基因HLTF。在細(xì)胞和組織水平，實(shí)驗(yàn)結(jié)果示miR-145可抑制HLTF的表達(dá)。 研究結(jié)論 ①miR-145在宮頸癌中下調(diào)表達(dá)，且與臨床晚期、較大的腫瘤體積、中低分化程度密切相關(guān)。 ②miR-145可通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞凋亡、降低細(xì)胞存活率來(lái)正向調(diào)節(jié)宮頸癌的放療敏感性。 ③miR-145可抑制HLTF的表達(dá)，miR-145可能通過(guò)降調(diào)HLTF來(lái)發(fā)揮降低宮頸癌細(xì)胞放療抵抗性的作用。
[Abstract]:Research background and purpose:
Cervical cancer is one of the most common malignant tumor in women in the world, after the incidence of breast cancer. According to statistics, the number of new onset in our country every year is up to about 130 thousand, and the prevalence of female age was younger. It is now clear that HPV infection is a major cause for cervical cancer. In treatment, radical hysterectomy and adjuvant chemotherapy continues to improve, the early cervical cancer patients with 5 year survival rate increased to about 90%, but for the patients with advanced cervical cancer treatment effect is still not optimistic. Radiotherapy is one of the treatment of locally advanced cervical cancer primary tumor, but the radiation resistance effect, and thus induce tumor recurrence, metastasis, serious impact on the effect of radiotherapy.
Small RNA (microRNAs, miRNAs) is a short length of about 20-22 nucleotides encoding RNA. in recent years, the study found that the abnormal expression of miRNAs in tumorigenesis and development plays an important role in affecting tumor cell proliferation, apoptosis, differentiation and metastasis. In addition reaction of miRNAs and tumor therapy closely related, and more and more studies have confirmed that the radiosensitivity of multiple miRNAs can regulate tumor cells. Screening can predict the radiosensitivity of miRNAs, and study the radiation sensitivity in the regulation effect and mechanism, can better explain the effect of radiation resistance, and then contribute to cancer patients to make more efficient. Individualized treatment programs and low harm, and provides a new idea for radiosensitization treatment, have important clinical significance.
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本文編號(hào)：1638579