本文選題：宮頸癌　切入點：miR-183　出處：《武漢大學》2014年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤。據(jù)世界范圍的資料統(tǒng)計,每年全球大約有50萬新發(fā)宮頸癌病例,其中85%新發(fā)病例在發(fā)展中國家。宮頸原位癌高發(fā)年齡為30～35歲,浸潤癌為45～55歲,近年來其發(fā)病有年輕化的趨勢。無論是宮頸癌患者的臨床表現(xiàn)還是宮頸癌細胞的分子生物學表現(xiàn),均具有惡性腫瘤侵襲、轉移的特性,給患者帶去無盡的煩惱及痛苦,嚴重威脅婦女健康安全。至今宮頸癌的發(fā)病機制尚不明確,研究發(fā)現(xiàn)除了高危型人乳頭瘤狀病毒的持續(xù)感染與宮頸癌發(fā)病密切相關外,某些癌基因與宮頸癌的發(fā)病也是有關聯(lián)的,如C-myc基因過度表達,宮頸癌遠處轉移的危險性估計增加了6倍,RAS基因表達增加與淋巴結轉移有關,說明某些癌基因與宮頸癌的發(fā)病過程和腫瘤的擴散有著十分密切的關系。宮頸癌常呈局部擴散和淋巴結轉移,腫瘤蔓延至陰道上段、宮旁、膀胱和直腸是最常見的部位。因此有必要尋求新的理論指導,并發(fā)現(xiàn)新的干預線索降低宮頸癌的發(fā)病率。 微小核糖核酸(microRNA, miRNA)是真核生物體內一類長約22nt的內源性非編碼單鏈小RNA,通過轉錄后調控作用,參與調節(jié)幾乎所有的生命活動和疾病過程。近十年來,在多項宮頸癌的研究中發(fā)現(xiàn)miRNAs在宮頸癌組織與配對的正常宮頸組織之問存在差異表達,并被預測與宮頸癌的發(fā)病和侵襲有重要的關系。最近還有學者發(fā)現(xiàn)并認為血漿miRNAs的檢測可能成為宮頸癌的生物學指標,用于宮頸癌的早期診斷與預后監(jiān)測。這些研究結果極大地鼓勵了我們進行宮頸癌中miRNAS的研究的信心。 本研究利用基因芯片技術篩選宮頸癌組織、宮頸癌轉移組織和正常宮頸組織中的差異miRNAs,結果發(fā)現(xiàn)：miR-183在宮頸癌組織、宮頸癌轉移組織和正常宮頸組織中同時出現(xiàn)下調,在轉移性宮頸癌組織中下降更明顯,而miR-215則在宮頸癌組織中表達明顯上調。目前有關miR-183和miR-215在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中作用機制的研究并無相關報道。經(jīng)實時熒光定量PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR)驗證后發(fā)現(xiàn)結果與初篩結果基本一致,提示miR-183和miR-215在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中可能具有重要作用。 為了驗證miR-183在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用,本研究分別通過過表達及沉默表達策略,從正反兩方面探討miR-183對宮頸癌細胞功能的影響： 1、細胞增殖與細胞周期：應用MTT法檢測細胞增殖,PI-FACS法檢測細胞周期,結果發(fā)現(xiàn)miR-183過表達或表達抑制對宮頸癌CASKI細胞增殖及細胞周期均無影響。 2、細胞凋亡：Annexin V-APC單染,流式細胞儀檢測顯示miR-183過表達增強CASKI細胞凋亡,而miR-183表達抑制則減少CASKI凋亡。 3、CASKI體外侵襲能力研究：Transwell實驗結果顯示miR-183表達抑制導致CASKI侵襲能力顯著提高。 結合宮頸癌臨床上具有高侵襲轉移能力的特點,推測miR-183在宮頸癌的發(fā)病和轉移過程中發(fā)揮作用。 綜上所述,本研究通過篩查目的miRNAs,并結合實驗驗證的方法,系統(tǒng)分析了miR-183在宮頸癌細胞中的表達特征、對間質細胞功能的改變作用,研究發(fā)現(xiàn)miR-183低表達狀態(tài)與宮頸癌發(fā)展、發(fā)生密切有關。同時發(fā)現(xiàn)miR-215的的高表達與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展等密切相關,為進一步尋找宮頸癌診斷及治療的靶標提供了一定的研究基礎。
[Abstract]:Cervical cancer is the most common gynecological malignant tumors worldwide. According to statistics, every year about 50 million new cases of cervical cancer cases, of which 85% new cases in developing countries. The high age of cervical carcinoma in situ was 30~35 years old, invasive carcinoma was 45~55 years old, in recent years the incidence of a younger age trend. Both molecules biology of cervical cancer patients with clinical manifestations or cervical cancer cells, with malignant tumor invasion and metastasis characteristics, to bring endless troubles and suffering, a serious threat to women's health and safety. Now the pathogenesis of cervical cancer is not clear, the research found that in addition to closely related to persistent infection with high-risk cervical cancer human papilloma virus, the incidence of certain cancer gene and cervical cancer is also related, such as overexpression of C-myc, increased by 6 times the risk of cervical cancer metastasis RAS based estimation. Because of increased expression and lymph node metastasis, and tumor pathogenesis that diffusion of oncogenes and cervical cancer has a very close relationship. Cervical cancer often showed local spread and lymph node metastasis, tumor spread to the upper vagina, uterine, bladder and rectum is the most common site. So it is necessary to seek the theory the guidance of the new, and the discovery of new clues intervention to reduce the incidence of cervical cancer.
MicroRNAs (microRNA, miRNA) is a kind of endogenous eukaryotic organisms 22nt long encoding non single stranded small RNA, through post transcriptional regulation, involved in the regulation process of almost all life activities and disease. Over the past ten years, in the study of a number of cervical cancer have been found in the differential expression of miRNAs in normal cervical tissue cervical cancer tissue and paired the question, and is predicted to have important relationship between pathogenesis and invasion and cervical cancer. Recent scholars have found and that the detection of plasma miRNAs may be a biological indicator of cervical cancer, for early diagnosis and prognosis of cervical cancer. The monitoring results of these studies greatly encouraged us to miRNAS cervical cancer in confidence.
Gene chip technology to screen cervical cancer using this study, differences in metastasis in cervical carcinoma tissue and normal cervical tissue, miRNAs, miR-183 were found in cervical cancer, cervical cancer metastasis tissue and normal cervical tissue and decreased in metastatic cervical carcinoma tissues decreased significantly, while miR-215 in cervical cancer tissue expression was up-regulated. The miR-183 and miR-215 in the study reported no mechanism in the occurrence and development of cervical cancer. By real-time fluorescence quantitative PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR) after verification and found the results of screening results showed that the miR-183 and miR-215 in cervical cancer may play an important role in the development.
In order to verify the role of miR-183 in the development of cervical cancer, we investigated the effect of miR-183 on the function of cervical cancer cells from two aspects: overexpression and silencing strategy.
1, cell proliferation and cell cycle: cell proliferation was detected by MTT assay. Cell cycle was detected by PI-FACS assay. It was found that miR-183 overexpression or expression inhibition had no effect on proliferation and cell cycle of cervical cancer CASKI cells.
2, apoptosis: single staining of Annexin V-APC, flow cytometry showed that miR-183 overexpression enhanced apoptosis of CASKI cells, while the inhibition of miR-183 expression reduced apoptosis of CASKI.
3, study of CASKI invasiveness in vitro: the results of Transwell experiment showed that the inhibition of miR-183 expression led to a significant increase in the invasiveness of CASKI.
Combined with the characteristics of high invasion and metastasis in cervical cancer, it is speculated that miR-183 plays a role in the pathogenesis and metastasis of cervical cancer.
In summary, this study through the purpose of screening miRNAs, and experiment method, systematic analysis of the expression of miR-183 in cervical cancer cells. The effect on the function of Leydig cells, the study found that low expression of miR-183 and cervical cancer development, closely related. At the same time that the high expression of miR-215 and cervical cancer the occurrence and development are closely related, provide the research basis for further diagnosis and treatment of cervical cancer targets.

【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.33

【共引文獻】

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本文編號：1633534