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miR-25靶向RECK促進(jìn)宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖

發(fā)布時(shí)間:2018-03-18 16:03

  本文選題:宮頸癌 切入點(diǎn):He 出處:《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2015年01期  論文類型:期刊論文


【摘要】:目的探討微小RNA-25(miR-25)對(duì)宮頸癌He La細(xì)胞增殖活性的影響及其與逆向誘導(dǎo)的帶Kazal基序的富含半胱氨酸蛋白(RECK)的靶向關(guān)系。方法構(gòu)建pc DNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmir GLO-野生型RECK(RECK-WT)和突變型RECK(RECK-MT)真核表達(dá)載體及miR-25抑制劑(anti-miR-25),采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)pre-miR-25和anti-miR-25在He La細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率,并采用MTT法分析miR-25對(duì)He La細(xì)胞增殖活性的影響,雙螢光素酶報(bào)告基因、qRT-PCR和Western blot法檢測(cè)miR-25與RECK靶向關(guān)系。結(jié)果測(cè)序結(jié)果顯示pc DNATM6.2-GW-pre-miR-25、pmir GLO-RECK-WT和pmir GLO-RECK-MT重組載體構(gòu)建成功,qRT-PCR提示pre-miR-25與anti-miR-25在He La細(xì)胞中具有良好的轉(zhuǎn)染效率。MTT結(jié)果顯示miR-25能夠明顯促進(jìn)He La細(xì)胞的增殖。雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)顯示共轉(zhuǎn)染pre-miR-25與RECK-WT的He La細(xì)胞其螢光活性顯著下降,同時(shí)qRT-PCR及Western blot也顯示anti-miR-25在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平均能夠顯著增加He La細(xì)胞中RECK的表達(dá)。結(jié)論miR-25能夠靶向RECK,促進(jìn)宮頸癌He La細(xì)胞的增殖。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of minimal RNA-25 miR-25) on the proliferation activity of cervical cancer He-La cells and its targeting relationship with reverse-induced cysteine rich protein (RECK) with Kazal motif. Methods the eukaryotic expression of pc-DNATM6.2-GW-pre-miR-25miR-pmir GLO-wild-type RECK-WTand mutant RECK-MTK were constructed. The transfection efficiency of pre-miR-25 and anti-miR-25 in He-La cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR qRT-PCRR, and anti-miR-25, a miR-25 inhibitor, was used to detect the transfection efficiency of pre-miR-25 and anti-miR-25 in He-La cells. The effect of miR-25 on the proliferation of He-La cells was analyzed by MTT assay. Double luciferase reporter gene qRT-PCR and Western blot were used to detect the targeting relationship between miR-25 and RECK. Results the sequencing results showed that pc-DNATM6.2-GW-pre-miR-25 pmir GLO-RECK-WT and pmir GLO-RECK-MT recombinant vectors were successfully constructed, which indicated that pre-miR-25 and anti-miR-25 had good transfection efficiency in he La cells. The results showed that miR-25 could significantly promote the proliferation of He-La cells, and the fluorescence activity of He-La cells co-transfected with pre-miR-25 and RECK-WT was significantly decreased by double luciferase reporter gene assay. QRT-PCR and Western blot also showed that anti-miR-25 could significantly increase the expression of RECK in He-La cells at both transcriptional and post-transcriptional levels. Conclusion miR-25 can target Reck and promote the proliferation of He-La cells.
【作者單位】: 河北省人民醫(yī)院腫瘤二科;河北省人民醫(yī)院腫瘤三科;河北省人民醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科;河北省人民醫(yī)院老年病二科;
【分類號(hào)】:R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):1630293

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