本文選題：糖皮質(zhì)激素　切入點(diǎn)：卵巢癌　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：一、研究背景和目的轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的特點(diǎn)之一,也是造成腫瘤患者死亡的主要原因。腫瘤轉(zhuǎn)移過程極其復(fù)雜,包括腫瘤細(xì)胞從原位腫瘤脫落,脫落的腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)黏附、釋放基質(zhì)水解酶破壞和穿過基底膜,侵襲血管和淋巴管,進(jìn)入循環(huán)并最終達(dá)到轉(zhuǎn)移部位,在新的部位定居并增殖。細(xì)胞的遷移運(yùn)動能力和侵襲能力是決定腫瘤轉(zhuǎn)移能力的重要因素。腫瘤的遷移涉及細(xì)胞骨架和形態(tài)的改變、細(xì)胞的粘附和運(yùn)動,期間參與調(diào)控的有多種生長因子、細(xì)胞粘附分子、與細(xì)胞運(yùn)動有關(guān)的小G蛋白(如小G蛋白Rho亞家族的成員RhoA,RhoB和RhoC),骨架調(diào)節(jié)蛋白和趨化因子等。而腫瘤細(xì)胞的侵襲能力除了與其增殖和運(yùn)動遷移能力有關(guān)外,還與其降解細(xì)胞外基質(zhì)的能力,如分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)以及一些蛋白酶的激活物,如尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)等有關(guān)。近年來的研究已證明腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛力還依賴于腫瘤的微環(huán)境。由于腫瘤轉(zhuǎn)移過程極其復(fù)雜,參與調(diào)控的因素很多,其機(jī)制目前仍不很清楚。最新的臨床資料研究,流行病學(xué)研究和動物模型為基礎(chǔ)的研究均提示慢性應(yīng)激影響腫瘤的進(jìn)展,因此由于應(yīng)激導(dǎo)致的神經(jīng)內(nèi)分泌改變對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響近年來很受關(guān)注。已有一些研究表明交感和腎上腺素系統(tǒng)直接有促進(jìn)腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的作用。糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid,GC)是體內(nèi)另一個重要應(yīng)激激素,在軀體和心理應(yīng)激時血漿中GC明顯增高。此外,人工合成的GC,如地塞米松(Dex)被臨床廣泛用于治療免疫與炎癥性疾病(如紅斑狼瘡和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎),以及作為重要的輔助藥物用于減輕因腫瘤化療治療帶來的不良反應(yīng)(如過敏,惡心嘔吐等),這些也可導(dǎo)致體內(nèi)GC水平的增高。GC的作用通過糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)介導(dǎo)。作為激素依賴性的轉(zhuǎn)錄因子,激活的GR以二聚體的形式與靶基因啟動子中的糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件(glucocorticoid response element,GRE)結(jié)合,直接地調(diào)節(jié)(促進(jìn)或者抑制)基因表達(dá),或者通過與其他轉(zhuǎn)錄因子(如NF-κB和AP-1等)相互作用而間接地調(diào)節(jié)基因表達(dá),產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。近年來的國外和我們的研究都表明GC還可影響細(xì)胞內(nèi)多種信號分子的表達(dá)和活性,并在細(xì)胞內(nèi)的信號網(wǎng)絡(luò)調(diào)控中發(fā)揮重要作用。目前認(rèn)為GC對實(shí)體腫瘤的作用主要通過其對免疫系統(tǒng)的作用,即通過其強(qiáng)大的免疫抑制作用,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸,從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。迄今GC對腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移的研究十分有限,而且已報(bào)道的結(jié)果因腫瘤細(xì)胞的類型以及所用的腫瘤模型不同而各異,既有促進(jìn)作用,也有抑制作用,至今不明確,其作用機(jī)制也不清楚,因此這方面有進(jìn)一步研究的必要。卵巢癌是婦科致死率最高的腫瘤。大于70%的卵巢癌在發(fā)現(xiàn)時就已是晚期,伴有盆腹腔或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。但目前對于卵巢癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制還不清楚,因此研究卵巢癌的轉(zhuǎn)移十分必要。已有的研究表明卵巢癌組織中g(shù)r的陽性率高達(dá)88%,比er和pr都高,表明gc/gr信號通路在卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展中起著十分重要的作用。國外和我們實(shí)驗(yàn)室的研究發(fā)現(xiàn)gc能輕度抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖,增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附,改變多種與細(xì)胞存活和凋亡相關(guān)的信號通路促進(jìn)化療藥作用下卵巢癌細(xì)胞的存活。有研究表明遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的卵巢癌組織中g(shù)r的靶基因糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的亮氨酸拉鏈蛋白(gilz)高表達(dá),且高表達(dá)的gilz能激活pi3k/akt的通路,促進(jìn)卵巢癌的增殖和侵襲,這強(qiáng)烈提示gc與卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。既往的研究也證實(shí)作為應(yīng)激激素之一的gc對卵巢癌細(xì)胞侵襲有促進(jìn)也有抑制作用。是否與卵巢癌細(xì)胞的來源和侵襲性的不同而有差異還不很清楚,有進(jìn)一步研究的必要。因此本課題研究了gc在體外和體內(nèi)對卵巢癌細(xì)胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討了gc促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞遷移侵襲的機(jī)制。二、研究方法我們在卵巢癌ho-8910、skov3和a2780細(xì)胞中進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),100nmdex(人工合成的gc)處理細(xì)胞,用含10%去激素血清的培養(yǎng)基以去除血清中的激素對細(xì)胞的影響。羅丹明-鬼筆環(huán)肽染色肌動蛋白(actin),共聚焦顯微鏡拍照。transwell小室和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測細(xì)胞的垂直和水平遷移能力。預(yù)包被matrigel膠的transwell小室(侵襲小室)檢測細(xì)胞的侵襲能力。細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附能力。rho-gtppulldown實(shí)驗(yàn)檢測rhob和rhoc的活性。westernblot檢測蛋白的表達(dá)和蛋白的磷酸化水平。sirna干擾實(shí)驗(yàn)抑制目的基因的表達(dá)。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面整合素的分布。elisa方法檢測纖連蛋白(fn)的分泌。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)我們采用babl/c裸鼠腹腔注射卵巢癌細(xì)胞制備轉(zhuǎn)移瘤模型。飲水中給予皮質(zhì)酮(小鼠體內(nèi)的gc)升高裸鼠血漿皮質(zhì)酮水平。放射免疫方法檢測裸鼠血漿皮質(zhì)酮水平。he染色確定轉(zhuǎn)移灶的病理性質(zhì)。嘌呤霉素篩選法篩選穩(wěn)定干擾rhob的卵巢癌細(xì)胞。三、研究結(jié)果(一)gc在體外和體內(nèi)均能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。1、人工合成的gc-地塞米松(dex)在體外能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞形態(tài)發(fā)生纖維樣改變,誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重組(應(yīng)力纖維增多),增強(qiáng)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附能力,促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲。2、在babl/c裸鼠腹腔注射卵巢癌細(xì)胞制備的轉(zhuǎn)移瘤模型中,給予皮質(zhì)酮(小鼠體內(nèi)的gc)飲水(50mg/l)能明顯升高裸鼠血漿皮質(zhì)酮水平,并在體內(nèi)促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞腹腔和肝臟轉(zhuǎn)移。(二)gc能影響多種轉(zhuǎn)移相關(guān)信號通路分子的表達(dá)和/或活性,促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。1、糖皮質(zhì)激素受體(gr)拮抗劑ru486能完全阻斷dex對卵巢癌細(xì)胞的遷移促進(jìn)作用,表明dex對卵巢癌細(xì)胞的促遷移作用通過gr介導(dǎo)。2、dex能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞表達(dá)和分泌重要的細(xì)胞外基質(zhì)成分-纖連蛋白(fn),并能增加細(xì)胞粘附分子整合素β1和α5(fn的受體)在卵巢癌細(xì)胞表面的分布,用fnsirna干擾fn的表達(dá)能明顯抑制dex對卵巢癌細(xì)胞的粘附、遷移和侵襲的促進(jìn)作用。3、dex能激活pi3k/akt信號通路,其激活最早的時間點(diǎn)在12小時,表明激活pi3k/akt信號通路不是dex的直接作用,fnsirna干擾fn的表達(dá)能明顯抑制pi3k/akt信號通路的激活,提示整合素α5β1和fn結(jié)合導(dǎo)致的細(xì)胞粘附增強(qiáng)可能與pi3k/akt信號通路的激活有關(guān)。用pi3k/akt通路的抑制劑wortmanin能完全阻斷dex誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞骨架重組和dex對卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲的促進(jìn)作用,表明pi3k/akt通路的激活在dex促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲的作用中十分重要。4、小g蛋白rho亞家族(rhoa,rhob和rhoc)是重要的細(xì)胞遷移和運(yùn)動的調(diào)控蛋白,與gtp結(jié)合是它們的活性形式。我們發(fā)現(xiàn)dex能激活rhob和rhoc,dex還能增加rho下游的rock2蛋白的磷酸化水平,激活rock2。rock2的特異抑制劑fasudil抑制rock2的活性后能明顯抑制dex對卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲的促進(jìn)作用。5、鑒于rhoa和rhoc促進(jìn)細(xì)胞遷移的作用已經(jīng)十分明確,而rhob在細(xì)胞遷移和腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用還不清楚,因此我們重點(diǎn)研究了dex激活rhob在其促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞黏附、遷移、侵襲和腫瘤轉(zhuǎn)移中可能的作用。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用rhobsirna干擾rhob表達(dá)能抑制dex促進(jìn)fn分泌以及激活pi3k/akt信號通路的作用。更為重要的是,干擾rhob的表達(dá)在體外能顯著抑制dex對卵巢癌細(xì)胞的粘附、遷移和侵襲的促進(jìn)作用,在體內(nèi)也能明顯抑制皮質(zhì)酮促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞肝轉(zhuǎn)移的作用。6、dex還能上調(diào)卵巢癌細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶mmp3和mmp7的表達(dá)。用BB-94抑制MMPs的活性能明顯阻斷Dex對卵巢癌細(xì)胞的侵襲促進(jìn)作用。四、結(jié)論GC在體外和體內(nèi)均能促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移,該作用通過GR介導(dǎo)。GC能通過促進(jìn)FN/integrin介導(dǎo)的粘附激活PI3K/AKT信號通路,并能激活RhoC/ROCK2信號通路,在GC促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移和侵襲中發(fā)揮重要作用。GC還能通過上調(diào)和激活小G蛋白RhoB促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移、侵襲和體內(nèi)轉(zhuǎn)移,該作用與其促進(jìn)FN分泌,增加細(xì)胞黏附進(jìn)而激活PI3K/AKT信號通路有關(guān)。此外GC上調(diào)的MMP3和MMP7表達(dá)也與GC促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的侵襲密切相關(guān)。以上結(jié)果首次揭示了GC能通過影響細(xì)胞內(nèi)多種重要信號分子的表達(dá)和活性促進(jìn)卵巢癌的遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉爽;林靜嫻;劉琦;石群立;王建東;吳元赭;;維A酸干預(yù)前后卵巢癌細(xì)胞中維A酸受體的表達(dá)變化及意義[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2007年11期

2 ;發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];生命世界;2009年02期

3 ;美發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細(xì)胞存活機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2009年04期

4 向君彥;夏新蜀;王昕娜;徐靜;王萍;江園;余和平;白定群;許川山;;低強(qiáng)度中頻超聲殺傷卵巢癌細(xì)胞的初步研究[J];激光雜志;2011年01期

5 陳韻仙;;下泌尿道切除作為卵巢癌細(xì)胞減少術(shù)的一部分[J];國外醫(yī)學(xué).婦產(chǎn)科學(xué)分冊;1983年03期

6 仲任,黃瑞濱,宋善俊;組織因子途徑抑制物2對卵巢癌細(xì)胞遷徙和浸潤能力的影響[J];癌癥;2003年10期

7 ;精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[J];發(fā)明與創(chuàng)新;2003年12期

8 高琨,李力,陳心秋,張瑋;雌孕激素對卵巢癌細(xì)胞體外生長的影響[J];腫瘤防治研究;2004年04期

9 王威廉,陳心秋,恩帝安,馬加薩,周德南,唐凱,黃薇;抗卵巢癌細(xì)胞膜抗體對卵巢癌細(xì)胞體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)及荷瘤小鼠的體內(nèi)聚集性的實(shí)驗(yàn)研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年04期

10 仲任,黃瑞濱,宋善俊;組織因子途徑抑制物2表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞浸潤能力的實(shí)驗(yàn)研究[J];腫瘤;2004年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王文霞;孔北華;李鵬;曲迅;;蛋白酶體抑制劑對卵巢癌細(xì)胞的作用機(jī)制[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

2 劉娟娟;林蓓;趙越;李飛飛;郝瑩瑩;張帆;朱連成;張淑蘭;;巖藻糖基化抗原對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];東北三省第四屆婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2008年

3 陳心秋;王威廉;趙芳芳;周德南;唐凱;;~(131)Ⅰ—抗卵巢癌抗體聯(lián)合外放射對卵巢癌細(xì)胞的體外殺傷實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆廣西腫瘤學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2003年

4 王威廉;陳心秋;恩帝安.馬加薩;周德南;唐凱;;抗卵巢癌抗體對卵巢癌細(xì)胞體外細(xì)胞毒及載瘤裸鼠體內(nèi)聚集性實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆廣西腫瘤學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2003年

5 許沈華;牟瀚舟;顧琳慧;朱赤紅;劉祥麟;;高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞差異表達(dá)基因在染色體定位及其功能[A];浙江省生理科學(xué)會2006年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

6 唐東平;陳心秋;唐凱;張潔清;賀海平;;11種化療藥物對卵巢癌細(xì)胞的抑制作用及其有核細(xì)胞細(xì)胞毒性研究[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

7 李曉峰;王欣;馬開東;劉寶林;;卵巢癌細(xì)胞的低溫保存及致死特性研究[A];上海市制冷學(xué)會2007年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2007年

8 梁念慈;何太平;覃燕梅;吳科鋒;;抗癌草藥半邊旗有效成分對卵巢癌細(xì)胞基因表達(dá)的影響[A];第十屆全國生化與分子藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2007年

9 郝瑩瑩;林蓓;趙越;歐陽玲;張淑蘭;;α1,2巖藻糖轉(zhuǎn)移酶基因轉(zhuǎn)染對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 李長東;張為遠(yuǎn);苑春莉;韓麗英;;卵巢癌細(xì)胞對人樹突狀細(xì)胞成熟及功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第一屆全球華人婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會暨第三次全國婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前4條

1 記者 任海軍;卵巢癌為何常常復(fù)活？生死命懸一基因[N];新華每日電訊;2009年

2 靖九江;4-HPR有望用于治療卵巢癌[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

3 邰 舉;韓國醫(yī)學(xué)專家發(fā)現(xiàn)精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

4 邰舉;精液能夠殺死卵巢癌細(xì)胞[N];科技日報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王萍;丙泊酚對卵巢癌細(xì)胞侵襲和紫杉醇誘導(dǎo)的卵巢癌細(xì)胞凋亡的作用中轉(zhuǎn)錄因子Slug的影響[D];山東大學(xué);2015年

2 魏星;CGI-58基因調(diào)控脂代謝介導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 項(xiàng)喜艷;去乙�；窼IRT3調(diào)控卵巢癌細(xì)胞代謝增加BH3模擬物S1凋亡敏感性的研究[D];吉林大學(xué);2016年

4 楊秋云;NEDD4L在卵巢上皮癌的表達(dá)及作用研究[D];吉林大學(xué);2016年

5 王燕;糖皮質(zhì)激素對卵巢癌細(xì)胞遷移和侵襲的影響及其機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

6 李曉;卵巢癌細(xì)胞影響外周血T淋巴細(xì)胞功能和分化的研究[D];浙江大學(xué);2006年

7 彭萍;白細(xì)胞介素12基因轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞后和卵巢癌細(xì)胞融合作為卵巢癌腫瘤疫苗的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

8 張晶晶;卵巢癌細(xì)胞與腹膜間皮細(xì)胞相互作用對侵襲轉(zhuǎn)移微環(huán)境的影響[D];山東大學(xué);2006年

9 李慧慧;雌激素及其代謝物和抗壞血酸對卵巢癌細(xì)胞的作用及相互影響[D];山東大學(xué);2013年

10 李留霞;基因調(diào)控溶血磷脂酸作用通路抑制卵巢癌細(xì)胞生長的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 余丹丹;miRNA-497通過調(diào)控FASN的表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖的初步研究[D];東南大學(xué);2015年

2 趙靜;CD147-Sp1關(guān)系環(huán)對卵巢癌細(xì)胞侵襲性影響的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 薛寶瑤;SDF-1-CXCR4與HIF-1在卵巢癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中相互作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 萬曉蕾;賴氨酸特異性去甲基化酶1參與卵巢癌細(xì)胞對順鉑敏感性的研究[D];江蘇大學(xué);2016年

5 李袁霞;LSD1介導(dǎo)的表觀遺傳學(xué)修飾促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移及侵襲[D];江蘇大學(xué);2016年

6 賴文升;曲古抑菌素A對卵巢癌細(xì)胞分化、增殖的影響[D];江蘇大學(xué);2016年

7 肖俊超;應(yīng)用重組腺病毒35型纖毛突蛋白增強(qiáng)單克隆抗體抗腫瘤的相關(guān)研究[D];山東大學(xué);2016年

8 ，

本文編號：1601199