本文選題：宮頸癌　切入點(diǎn)：LKB1　出處：《山東大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分LKB1對(duì)宮頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄譜的影響及抑癌機(jī)制研究 宮頸癌是全球范圍內(nèi)女性第二大常見惡性腫瘤,每年新發(fā)宮頸癌病例大約53萬。盡管在發(fā)達(dá)國(guó)家隨著篩查方法的改進(jìn),宮頸癌的發(fā)病率已經(jīng)降低,但是在發(fā)展中國(guó)家,由于社會(huì)經(jīng)濟(jì)因素,宮頸癌的篩查方法不能廣泛普及,因此宮頸癌仍然是威脅婦女的主要致死因素。 宮頸癌的發(fā)生有病毒方面的因素,高危型人乳頭瘤病毒(High-risk type human papilloma virus, hr-HPV)感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。這一事實(shí)提供了預(yù)防宮頸癌的方法,即預(yù)防接種HPV疫苗阻止感染。盡管HPV疫苗已經(jīng)上市,但是對(duì)于已經(jīng)感染HPV或者患有免疫抑制的病人沒有效果。 HPV是一類無包膜的小DNA病毒,可以在表皮和粘膜上皮細(xì)胞復(fù)制增殖。根據(jù)HPV的臨床意義,可將其分為高危和低危型。持久的高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的主要致病因子。全球大約70%的宮頸癌由HPV16,18型引起。高危型HPVs的兩個(gè)癌蛋白E6和E7具有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用,在宮頸癌的惡性轉(zhuǎn)化過程中起重要作用。E6、E7分別與抑癌蛋白p53和pRb相互作用,促進(jìn)它們的降解誘發(fā)腫瘤發(fā)生。盡管HPVs在宮頸癌的發(fā)生中發(fā)揮了重要的作用,但是只有一小部分感染了高危型HPVs的女性最終發(fā)展為宮頸癌,而且從最初感染HPVs到最終進(jìn)展為宮頸癌,這一過程需要幾十年的時(shí)間,提示高危型HPVs的感染對(duì)于宮頸的癌變是必要的但不是充分的條件。此外,有些宮頸癌檢測(cè)不到HPVs。因此,在宮頸的癌變過程中,一定有一些其它協(xié)同因子或遺傳事件參與其中。 肝激酶B1(liver kinaseB1,LKB1)又稱絲氨酸-蘇氨酸激酶(serine threonine kinase, STK11),最初在黑斑息肉綜合征(Peutz-Jeghers syndrome, PJS)研究發(fā)現(xiàn),LKB1基因突變是導(dǎo)致PJS發(fā)生的因素,PJS患者對(duì)胃腸道腫瘤,乳腺腫瘤,婦產(chǎn)腫瘤的易感性增加。繼而在散發(fā)性腫瘤中,也發(fā)現(xiàn)了LKB1基因的體細(xì)胞突變,如非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌和宮頸癌等,因而LKB1已作為一個(gè)比較公認(rèn)的抑癌基因被廣泛研究。LKB1抑癌的分子機(jī)制目前尚不十分清楚,現(xiàn)有的研究表明,LKB1是一種重要的上游蛋白激酶,LKB1與偽激酶STRAD和清道夫蛋白M025形成功能三聚體,這個(gè)復(fù)合體可以磷酸化至少14種在T環(huán)活化位點(diǎn)具有保守蘇氨酸的絲氨酸-蘇氨酸激酶,而使之激活。個(gè)研究非常多的LKB1底物是AMP-活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK),AMPK是細(xì)胞、機(jī)體代謝的主要調(diào)節(jié)劑,LKB1可通過AMPK對(duì)外界各種生理病理刺激作出反應(yīng),例如：骨骼肌收縮,低氧,饑餓,H202,二甲雙胍和苯乙雙胍等。重要的是,LKB1通過激活A(yù)MPK調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞周期,活化的AMPK激活TSC2復(fù)合體和nTOR伴侶分子raptor,進(jìn)而負(fù)向調(diào)控nTOR信號(hào)通路,抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。此外,LKB1參與調(diào)控細(xì)胞極性,細(xì)胞增殖,細(xì)胞遷移,細(xì)胞衰老,凋亡,DNA損傷反應(yīng),細(xì)胞分化和有氧糖酵解過程等,也與其抑制腫瘤發(fā)生的機(jī)制有關(guān)。 LKB1基因突變?cè)趯m頸癌中的研究最早始于1999年,根據(jù)不同的文獻(xiàn)報(bào)道,宮頸癌中LKB1基因突變率在2-20%,但有關(guān)宮頸癌組織中LKB1蛋白表達(dá)狀況的報(bào)道尚很少。 目前,宮頸癌細(xì)胞中LKB1抑制細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究主要集中于LKB1/AMPK通路。已有文獻(xiàn)報(bào)道,在宮頸癌細(xì)胞HeLa、SiHa中過表達(dá)LKB1可以抑制其生長(zhǎng),且依賴于LKB1的激酶活性；LKB1可抑制HeLa細(xì)胞的錨定非依賴性生長(zhǎng),但對(duì)SiHa細(xì)胞沒有此作用；應(yīng)用AMPK激活劑(如AICAR、二甲雙胍等)對(duì)于具有LKB1/AMPK/mTOR完整信號(hào)通路的宮頸癌細(xì)胞系有抑制作用。但是,LKB1抑癌分子機(jī)制的研究尚存在許多的未知,LKB1是否可調(diào)控更多的下游基因?是否有新的通路參與其抑癌作用機(jī)制?LKB1在宮頸正常組織及癌組織中的蛋白表達(dá)及功能?這些都是尚待解決的問題。深入研究LKB1的抑癌分子機(jī)制將有助于發(fā)現(xiàn)更多的關(guān)鍵分子,為治療干預(yù)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展提供新的思路和靶標(biāo)。 基于LKB1在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的潛在重要作用,本研究在宮頸癌細(xì)胞中初步研究了LKB1的生物學(xué)活性,并對(duì)臨床宮頸癌組織中LKB1蛋白的表達(dá)狀況進(jìn)行了檢測(cè)。重要的是,我們首次利用基因芯片Microarray技術(shù)研究了LKB1對(duì)宮頸癌細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄譜的影響,通過生物信息學(xué)對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行了分析,繼而在mRNA和蛋白水平給予驗(yàn)證。其中,在磷脂酰肌醇(PI3K)信號(hào)通路中,我們發(fā)現(xiàn)II型四磷酸肌醇磷酸酶(Inositol polyphosphate4-phosphatase type II, INPP4B)基因的表達(dá)在LKB1過表達(dá)后明顯上調(diào),進(jìn)一步的細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明INPP4B是LKB1重要的下游靶分子。INPP4B也是一種潛在的腫瘤抑制因子,LKB1對(duì)INPP4B表達(dá)的調(diào)控作用尚未見報(bào)道。 一.LKB1表達(dá)對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖的影響 為檢測(cè)LKB1蛋白表達(dá)對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖的影響,我們將編碼LKB1的質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染了HeLa細(xì)胞(LKB1表達(dá)缺失)并經(jīng)歷短期G418篩選,Western blot檢測(cè)此細(xì)胞中有明顯的LKB1蛋白表達(dá)。進(jìn)一步采用CCK-8方法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性,結(jié)果顯示,過表達(dá)LKB1的HeLa細(xì)胞增殖能力顯著低于載體對(duì)照組。采用BrdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了細(xì)胞周期改變,結(jié)果發(fā)現(xiàn)HeLa細(xì)胞過表達(dá)LKB1后,位于S期的細(xì)胞數(shù)目顯著降低,DNA復(fù)制合成減少,表明細(xì)胞生長(zhǎng)增殖能力下降。以上結(jié)果說明LKB1蛋白抑制宮頸癌細(xì)胞HeLa的生長(zhǎng)增殖。LKB1穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系HeLa-LKB1的研究結(jié)果表明：LKB1蛋白在穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系中有效表達(dá),而且可檢測(cè)至p-AMPK磷酸化水平的升高,說明在HeLa-LKB1細(xì)胞中LKB1可磷酸化其下游的MPK使其活化,LKB1具有活性,且LKB1-AMPK的信號(hào)通路是完整的。 二.LKB1蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá) 為探究LKB1蛋白在臨床宮頸癌組織中的表達(dá)狀況,我們對(duì)78例宮頸癌(包括25例宮頸腺癌、53例宮頸鱗癌)和25例正常宮頸組織進(jìn)行了免疫組化檢測(cè)。結(jié)果表明,在44%(11/25)的宮頸腺癌、60.4%(32/53)的宮頸鱗癌組織中LKB1蛋白表達(dá)缺失。以上結(jié)果說明,宮頸癌組織中LKB1蛋白表達(dá)有較高的缺失率,這與公認(rèn)的LKB1是一個(gè)抑癌基因一致。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在正常宮頸組織中存在LKB1表達(dá)弱陽性或不表達(dá),這與文獻(xiàn)中報(bào)道的正常結(jié)直腸、胰腺組織LKB1的表達(dá)情況類似。 三.LKBl轉(zhuǎn)錄譜的研究以及LKB1的新靶標(biāo)INPP4B的發(fā)現(xiàn) 盡管已知LKB1可以調(diào)控至少14種下游激酶,但是LKB1的作用機(jī)制仍然沒有完全清楚,為探究宮頸癌細(xì)胞中受LKB1調(diào)控的基因,我們進(jìn)行了Microarray基因芯片水平的轉(zhuǎn)錄譜研究。通過Microarray實(shí)驗(yàn),在穩(wěn)定表達(dá)LKB1蛋白的HeLa細(xì)胞系中,我們識(shí)別了222個(gè)LKB1調(diào)控的差異表達(dá)基因,其中下調(diào)的基因有117個(gè),上調(diào)的基因有105個(gè)。qRT-PCR技術(shù)對(duì)七個(gè)差異表達(dá)基因LKB1、PLK2、ABCC2、GLP2R、KYNU、MAL2和AKAP12進(jìn)行了mRNA水平的驗(yàn)證,結(jié)果證實(shí)Microarray數(shù)據(jù)真實(shí)反映了基因在轉(zhuǎn)錄水平的變化。 生物信息學(xué)方法進(jìn)一步分析差異表達(dá)基因�；虮倔w方法(gene ontology,GO)對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行了分類,GO數(shù)據(jù)庫分為生物學(xué)過程分類,分子功能分類以及細(xì)胞組分分類。分析結(jié)果顯示,222個(gè)差異表達(dá)基因可歸屬在40個(gè)生物學(xué)過程分類,23個(gè)分子功能分類以及20個(gè)細(xì)胞組分分類中。LKB1調(diào)控的基因多參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),蛋白間相互作用以及定位于膜上。KEGG信號(hào)通路數(shù)據(jù)庫對(duì)差異表達(dá)基因的分析發(fā)現(xiàn)了8個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的生物學(xué)通路。其中兩條通路是與代謝有關(guān),分別是精氨酸和脯氨酸代謝通路、肌醇磷酸代謝通路,這與LKB1參與代謝的觀點(diǎn)一致。另外一條重要的信號(hào)通路是磷脂酰肌醇(PI3K)信號(hào)通路,有文獻(xiàn)報(bào)道LKB1-AMPK信號(hào)通路可與PI3K-Akt信號(hào)通路匯合在mTOR,參與調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)與代謝。另外LKB1還參與了軸突發(fā)育通路和造血干細(xì)胞系分化通路。 在PI3K信號(hào)通路中的分析中我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)重要的磷酸肌醇磷酸酶INPP4B基因的表達(dá)在LKB1過表達(dá)后明顯上調(diào)。采用qRT-PCR進(jìn)一步證實(shí)在過表達(dá)LKB1的HeLa中INPP4B mRNA水平顯著增加。Western blot結(jié)果表明：LKB1穩(wěn)轉(zhuǎn)HeLa細(xì)胞中INPP4B蛋白水平升高1.4倍,同時(shí)在瞬轉(zhuǎn)LKB1且經(jīng)歷G418短期篩選的HeLa細(xì)胞中INPP4B蛋白水平升高1.9倍。進(jìn)一步采用特異性siRNA,在表達(dá)LKB1且LKB1-AMPK通路完整的宮頸癌CaSki細(xì)胞中敲低LKB1, Western blot檢測(cè)INPP4B的表達(dá)變化,發(fā)現(xiàn)敲低LKB1后,INPP4B蛋白表達(dá)水平也隨之降低。我們進(jìn)一步檢測(cè)了LKB1穩(wěn)轉(zhuǎn)HeLa細(xì)胞系中p-Akt水平改變,結(jié)果表明,與空載對(duì)照細(xì)胞HeLa-vetor相比,HeLa-LKB1細(xì)胞中Akt磷酸化水平明顯下降。以上結(jié)果證明,抑癌蛋白LKB1可正向調(diào)控INPP4B的表達(dá),INPP4B是LKB1下游的一個(gè)新靶蛋白。在過表達(dá)LKB1的HeLa細(xì)胞系中INPP4B表達(dá)上調(diào),而磷酸化Akt水平下降,提示LKB1通過上調(diào)INPP4B參與了PI3K/Akt通路的負(fù)向調(diào)控,這可能是LKB1抑制細(xì)胞增殖的一個(gè)新通路。 綜上所述,本研究探討了抑癌蛋白LKB1在宮頸癌中的作用；并首次應(yīng)用Microarray技術(shù)對(duì)表達(dá)LKB1的宮頸癌細(xì)胞進(jìn)行了基因轉(zhuǎn)錄譜分析,進(jìn)一步對(duì)發(fā)現(xiàn)的新靶標(biāo)INPP4B進(jìn)行了初步研究。研究證實(shí),過表達(dá)LKB1對(duì)宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖有抑制作用,在超過50%的宮頸癌組織中LKB1蛋白表達(dá)缺失,說明LKB1的抑癌活性在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中具有重要作用�；贛icroarray分析我們識(shí)別了222個(gè)受LKB1調(diào)控的基因,發(fā)現(xiàn)了8個(gè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的生物學(xué)通路。在PI3K信號(hào)通路中一個(gè)重要的抑癌基因INPP4B在LKB1過表達(dá)后明顯上調(diào),細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明INPP4B是LKB1下游的一個(gè)新靶標(biāo)。在過表達(dá)LKB1的HeLa細(xì)胞系中INPP4B上調(diào),而磷酸化Akt水平下降,提示LKB1通過上調(diào)INPP4B參與了P13K/Akt通路的負(fù)向調(diào)控,這可能是LKB1抑制細(xì)胞增殖的一個(gè)新通路。以上發(fā)現(xiàn)為深入研究LKB1調(diào)控的分子信號(hào)通路奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),為宮頸癌的治療干預(yù)提供了新的分子靶標(biāo)。第二部分CIP2A調(diào)控宮頸腺癌多藥耐藥的研究 宮頸癌是世界范圍內(nèi)最常見的婦科腫瘤疾病之一,嚴(yán)重威脅女性的身體健康,死亡率位居發(fā)展中國(guó)家女性腫瘤的第二位。近年來,全球?qū)m頸癌的發(fā)病率呈現(xiàn)上升和年輕化的趨勢(shì)。流行病學(xué)研究結(jié)果表明,高危型人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染是婦女宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變的高危因素。 雖然宮頸癌篩查方法的普及和HPV預(yù)防性疫苗的出現(xiàn)有效降低了全球?qū)m頸癌的發(fā)病率。然而,在發(fā)展中國(guó)家宮頸癌仍然是影響和威脅女性健康的重要因素。手術(shù)和放療是宮頸癌的主要治療方法,早期以手術(shù)治療為主,中晚期多采用放射治療。過去,一直認(rèn)為宮頸癌屬于化療不敏感的腫瘤,僅在晚期及復(fù)發(fā)的患者中將化療作為綜合治療的一部分。近年來,國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)化療在宮頸癌中的應(yīng)用進(jìn)行了大量的基礎(chǔ)和臨床研究,發(fā)現(xiàn)經(jīng)化療后患者5年生存率明顯提高,因此確立了化療在宮頸癌治療中的重要地位�；煹膬�(yōu)勢(shì)在于可以治療腫瘤周圍肉眼看不見的微小轉(zhuǎn)移灶以及可能存在的全身亞臨床轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的病人。近10年來對(duì)宮頸癌的綜合治療日益受到關(guān)注,綜合治療已成為現(xiàn)代治療宮頸癌的一個(gè)重要策略。 然而,盡管人們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到化療在宮頸癌中的作用,并且已經(jīng)將化療作為宮頸癌治療的重要手段,但是宮頸癌多藥耐藥的產(chǎn)生卻大大限制了化療藥物的療效和應(yīng)用,導(dǎo)致治療失敗,腫瘤復(fù)發(fā)。宮頸癌細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥的機(jī)制分為兩大類：①對(duì)天然化療藥物的耐藥機(jī)制,主要包括P糖蛋白的過度表達(dá)及DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶酶含量與活性的改變；②對(duì)鉑類化合物和烷化劑耐藥的機(jī)制,主要包括藥物在細(xì)胞內(nèi)積聚減少,巰基化合物(GSH、GST、MT)對(duì)藥物的解毒力增加,DNA損傷修復(fù)能力增加等。 P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)是一種跨膜糖蛋白,由多藥耐藥基因(MDR1)編碼。P糖蛋白是ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的一員,通過與抗癌藥物結(jié)合后再與ATP結(jié)合,經(jīng)ATP供能將細(xì)胞內(nèi)藥物逆濃度梯度運(yùn)出胞外,使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度不斷下降從而使之達(dá)不到有效殺傷濃度,最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生。在使用天然化療藥物后,幾乎50%的腫瘤都有P-gp蛋白的表達(dá)增加。宮頸癌的耐藥問題也與P-gp的表達(dá)增加密切相關(guān)。 Cancerous inhibitor of protein phosphatase2A (CIP2A)是一種2007年發(fā)現(xiàn)的癌蛋白,CIP2A可抑制PP2A對(duì)c-Myc62位絲氨酸(S62)的去磷酸化,從而增加細(xì)胞中c-Myc的蛋白水平。研究發(fā)現(xiàn),CIP2A在很多人類惡性腫瘤中過表達(dá),例如胃癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、急性白血病、前列腺癌、宮頸癌等。CIP2A還可以促進(jìn)細(xì)胞的惡性生長(zhǎng)增殖,并與化療藥物導(dǎo)致肝細(xì)胞癌、乳腺癌、白血病細(xì)胞的凋亡有關(guān)。那么,CIP2A是否也和宮頸癌的耐藥性相關(guān)?進(jìn)而是否參與了宮頸癌多藥耐藥機(jī)制的產(chǎn)生?CIP2A在宮頸癌中與P-gp蛋白的表達(dá)有無關(guān)聯(lián)?這些問題是我們此項(xiàng)研究的重點(diǎn)。 一.敲低CIP2A提高了宮頸癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性 我們?cè)趯m頸腺癌細(xì)胞系HeLa中特異性敲除CIP2A后,使用臨床常用的三種腫瘤化療藥物多柔比星(Dox)、順鉑(Cis)和紫杉醇(Pac)處理細(xì)胞,通過MTT實(shí)驗(yàn)觀察藥物對(duì)HeLa細(xì)胞的殺傷作用。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,多柔比星(Dox)、順鉑(Cis)和紫杉醇(Pac)三種化療藥物抑制HeLa細(xì)胞增殖,在特異性敲低CIP2A后,三種化療藥物對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的抑制能力顯著增加。這表明,在HeLa細(xì)胞中CIP2A與化療藥物療效有關(guān),敲低CIP2A能夠提高HeLa細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性,因此本部分實(shí)驗(yàn)提示CIP2A可能參與腫瘤的多藥耐藥(MDR)。二. CIP2A和P-gp蛋白的表達(dá)在宮頸癌組織中密切相關(guān) 我們?cè)谏綎|大學(xué)齊魯醫(yī)院收集了103例石蠟包埋組織塊,其中包括15例正常宮頸組織、16例CIN I、17例CIN II、12例CIN III、43例宮頸腺癌,利用免疫組化技術(shù)檢測(cè)CIP2A和P-gp的蛋白表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示CIP2A和P-gp在15例正常組織、16例CIN I、17例CIN II組織中均不表達(dá)；12例CIN III組織中有1例(8.3%)CIP2A陽性,在43例宮頸腺癌組織中有16例(37.2%)有CIP2A的表達(dá)；P-gp在12例CIN III組織中表達(dá)陰性,在43例宮頸腺癌組織中有13例(30.2%)有P-gp的表達(dá)。CIP2A主要表達(dá)于胞漿,而P-gp主要位于細(xì)胞膜上。免疫組化結(jié)果顯示,CIP2A和P-gp的表達(dá)在同一個(gè)宮頸癌標(biāo)本上強(qiáng)度一致。并且統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示在宮頸腺癌組織中,CIP2A和P-gp表達(dá)正相關(guān)((r2=0.617,p0.001)),P-gp表達(dá)和病人年齡、腫瘤大小、臨床分期、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴轉(zhuǎn)移無相關(guān)性,但與腫瘤分化成度有關(guān)(p=0.029)。以上結(jié)果顯示,在宮頸腺癌組織標(biāo)本中,CIP2A和P-gp表達(dá)成正相關(guān)。三. CIP2A通過調(diào)控P-gp蛋白影響宮頸癌的多藥耐藥 為了進(jìn)一步驗(yàn)證CIP2A與P-gp蛋白之間的關(guān)系,我們進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：多柔比星(Dox)、順鉑(Cis)和紫杉醇(Pac)三種化療藥物處理HeLa細(xì)胞,檢測(cè)化療藥物作用后CIP2A與P-gp蛋白的表達(dá)水平；同時(shí)檢測(cè)抗Dox HeLa細(xì)胞系HeLa/Dox中CIP2A與P-gp蛋白的表達(dá)水平,同時(shí)在該細(xì)胞系中特異敲低CIP2A后,檢測(cè)P-gp蛋白的水平變化；在HeLa、HeLa/Dox細(xì)胞系中特異性敲低CIP2A后,羅丹明外排實(shí)驗(yàn)檢測(cè)P-gp蛋白的功能。 研究結(jié)果顯示,化療藥物處理HeLa細(xì)胞后,CIP2A與P-gp蛋白的表達(dá)水平均明顯上升；耐藥細(xì)胞系HeLa/Dox中CIP2A與P-gp蛋白的表達(dá)水平較HeLa細(xì)胞顯著增高,在干擾CIP2A后,P-gp蛋白的表達(dá)水平隨之降低；在HeLa、 HeLa/Dox細(xì)胞系干擾CIP2A后,羅丹明外排實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示細(xì)胞內(nèi)熒光信號(hào)顯著增強(qiáng),表明P-gp蛋白的藥物外排功能受到抑制。上述結(jié)果提示,CIP2A通過P-gp蛋白實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸腺癌耐藥的調(diào)控。 綜上,本研究利用體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)首次驗(yàn)證了CIP2A參與宮頸腺癌多藥耐藥的形成,這種作用主要是CIP2A通過上調(diào)P-gp蛋白的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。在宮頸腺癌組織中CIP2A和P-gp蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)；敲低CIP2A可提高宮頸腺癌細(xì)胞對(duì)多種化療藥物的敏感性,P-gp蛋白的表達(dá)水平也隨之降低。因此,我們的研究結(jié)果提示,CIP2A作為一個(gè)新的基因治療靶標(biāo),在宮頸腺癌的綜合治療中有著潛在的應(yīng)用前景。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王玲;劉世坤;;腫瘤多藥耐藥機(jī)制的研究進(jìn)展[J];右江醫(yī)學(xué);2006年03期

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本文編號(hào)：1594824