本文關(guān)鍵詞： N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶V 卵巢癌 增殖 遷移 侵襲　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的卵巢癌是死亡率最高的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤,發(fā)病隱匿,其發(fā)病率和死亡率近年來有逐漸上升的趨勢。由于缺乏特異性癥狀及有效的檢查手段,大多數(shù)患者診斷時已處于卵巢癌晚期,且常已發(fā)生盆腹腔轉(zhuǎn)移,給治療帶來很大的困難。盡管近年來手術(shù)和化療藥物都有所改進(jìn),但晚期卵巢癌患者的5年生存率仍然非常低。因此,探索卵巢癌的早期診斷方法和新的治療靶點是當(dāng)前研究的熱點。N-糖基化是蛋白質(zhì)翻譯后修飾最常見的方式之一,與腫瘤細(xì)胞的各種生物學(xué)功能息息相關(guān)。N-糖基化的進(jìn)程由多種不同的糖基轉(zhuǎn)移酶催化,其中研究最多的是N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶V(Gn T-V)。研究發(fā)現(xiàn)Gn T-V在許多腫瘤的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用,但其在卵巢癌中的功能尚不明確。本研究主要探討Gn T-V對卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780和SKOV3的增殖、遷移及侵襲等生物學(xué)行為的影響,并初步探討其作用機制,為卵巢癌的早期診斷與治療靶點研究提供理論依據(jù)。研究方法分別構(gòu)建干擾與過表達(dá)Gn T-V的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780和SKOV3,轉(zhuǎn)染成功后通過RT-PCR技術(shù)檢測病毒干擾/過表達(dá)效率,并通過細(xì)胞增殖實驗(CCK-8法)、細(xì)胞劃痕實驗、Transwell實驗及流式細(xì)胞術(shù)來觀察Gn T-V的干擾/過表達(dá)對卵巢癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲等生物學(xué)行為的影響。利用Western blot檢測Gn T-V的干擾/過表達(dá)后卵巢癌細(xì)胞內(nèi)E-cadherin、laminin、MMP-2和MMP-9等蛋白的變化,初步探討Gn T-V影響卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)行為的作用機制。研究結(jié)果用慢病毒干擾了Gn T-V的表達(dá)后,RT-PCR結(jié)果顯示A2780和SKOV3細(xì)胞內(nèi)Gn T-V的表達(dá)明顯下降,CCK-8法檢測發(fā)現(xiàn)A2780和SKOV3細(xì)胞的增殖能力增強,劃痕實驗發(fā)現(xiàn)A2780和SKOV3細(xì)胞的遷移能力增強,Transwell實驗發(fā)現(xiàn)A2780和SKOV3細(xì)胞的侵襲能力增強,流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)A2780和SKOV3細(xì)胞的細(xì)胞周期得到促進(jìn),Western blot結(jié)果顯示Gn T-V的表達(dá)降低后,A2780和SKOV3細(xì)胞內(nèi)的E-cadherin的表達(dá)水平下降,而MMP-2及MMP-9的表達(dá)增加。反之,過表達(dá)Gn T-V后,A2780和SKOV3細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力都明顯減弱,同時細(xì)胞內(nèi)的E-cadherin的表達(dá)水平增強,laminin、MMP-2及MMP-9的表達(dá)下降。結(jié)論卵巢癌細(xì)胞中Gn T-V的表達(dá)能抑制細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,其生物學(xué)功能可能與上調(diào)E-cadherin的表達(dá)及下調(diào)laminin、MMP-2與MMP-9的表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:The purpose of the study of ovarian cancer is the highest mortality of female genital malignant tumors, the incidence of occult, the incidence and mortality of the trend has gradually increased in recent years. Due to the lack of specific symptoms and effective means of inspection, the majority of patients are in advanced ovarian cancer, and often have abdominal metastasis, which brought great difficulties to although in recent years the treatment. Surgery and chemotherapy drugs have been improved, but the 5 year survival rate of patients with advanced ovarian cancer is still very low. Therefore, to explore the method of early diagnosis of ovarian cancer and new therapeutic targets is a hotspot of current research of.N- glycosylation is one of the most common protein post-translational modifications, and various the biological function of tumor cells is closely related to the.N- glycosylation process of enzyme catalyzed by different glycosyl transfer, most of them are N- N-acetylglucosaminyltransferase V (Gn T-V). The discovery of Gn T-V proliferation in many tumors, play an important role in invasion and metastasis in ovarian cancer, but its function is not clear. This study focused on Gn T-V and SKOV3 A2780 on the proliferation of ovarian cancer cell lines, the influence of biological behavior of migration and invasion, and to explore its mechanism. For ovarian cancer early diagnosis and treatment and provide a theoretical basis for the research target. Research methods were constructed interference and overexpression of Gn T-V lentiviral vector was transfected into ovarian cancer cell lines A2780 and SKOV3, after the success of transfection by detecting virus interference / RT-PCR expression efficiency, and by cell proliferation assay (CCK-8 method), cell the scratch test, interference / Transwell assay and flow cytometry was used to observe the Gn expression of T-V in ovarian cancer cell proliferation, migration and invasion influence the biological behavior of the Western / blot. The interference detection Gn T-V table As ovarian cancer cells E-cadherin, laminin, MMP-2 and MMP-9 protein in the preliminary mechanism of Gn T-V influence the biological behavior of ovarian cancer cells. The results of the study by lentiviral expression of Gn after T-V, RT-PCR showed that the expression of A2780 and SKOV3 cells in Gn T-V decreased significantly, CCK-8 detecting method enhanced A2780 and SKOV3 cell proliferation, scratch test showed enhanced migration of A2780 and SKOV3 cells, Transwell showed enhanced A2780 and SKOV3 cell invasion ability, found that A2780 and SKOV3 can promote the cell cycle by flow cytometry, Western blot showed decreased expression of Gn after T-V, the expression level of A2780 and SKOV3 of E-cadherin cells decreased, while the expression of MMP-2 and MMP-9 increased. On the other hand, over expression of Gn after T-V, A2780 and SKOV3 cell proliferation, migration and invasion were significantly reduced, with the The expression level of E-cadherin cells in the enhancement of laminin, decreased expression of MMP-2 and MMP-9. Conclusion the expression of Gn in ovarian cancer cell T-V can inhibit cell proliferation, migration and invasion, the expression of its biological function may be related to the upregulation of E-cadherin and downregulation of laminin, the expression of MMP-2 and MMP-9.

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.31

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7 趙U，

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