本文關(guān)鍵詞： 子癇前期 胎盤 血管平滑肌 Kv7通道　出處：《西南醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:通過對比正常血壓妊娠(Normotensive Pregnancy,NP)和子癇前期(Pre-clampsia,PE)胎盤絨毛膜板動脈(Placental Chorionic plate arteries,CPAs)上Kv7通道表達及其對血管張力調(diào)節(jié)功能的差異,探討Kv7通道對子癇前期胎盤絨毛膜動脈血管張力的影響及可能的機制。方法:1、離體血管環(huán)張力實驗:(1)檢測不同濃度Kv7通道阻滯劑XE991(10-7-10-4mol/L)對NP組(n=10)和PE組(n=10)CPAs血管環(huán)基礎(chǔ)張力的影響,并分析比較NP組和PE組CPAs血管在10-6、10-5、5x10-5mol/L不同濃度XE991作用下基礎(chǔ)張力的變化;(2)檢測不同濃度血管預(yù)收縮劑U46619(血栓素A2受體激動劑)(10-10-3X10-6mol/L)在無XE991預(yù)處理或有XE991預(yù)處理時對NP組(n=10)和PE組(n=10)CPAs血管環(huán)張力的影響,并分析比較NP組和PE組XE991對預(yù)收縮劑U46619收縮作用影響的差異;(3)檢測不同Kv7通道開放劑Retigabine、BMS-204352、ICA-27243、ML277(10-7-10-4mol/L)對NP組(n=10)和PE組(n=10)U46619(10-7mol/L)預(yù)收縮CPAs血管環(huán)張力的影響;2、實時熒光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR experiment,QPCR):15例確診為子癇前期并在我院終止妊娠孕婦為PE組,15例我院終止妊娠的血壓正常孕婦為NP組,分離提取胎盤絨毛膜板動脈血管平滑肌總RNA,合成c DNA并進行SYBR Green熒光定量PCR反應(yīng),得到相應(yīng)的Ct值,計算出ΔCt值(=目的基因Ct值-β-actin內(nèi)參基因的Ct值),然后以NP組第一個樣本為參照因子計算ΔΔCt(=目的基因Δct值-np1目的基因Δct值),2-ΔΔct處理后可進行相對表達量分析;3、westernblotting實驗:np組和pe組標(biāo)本各15例均來自定量pcr實驗中研究對象,提取cpas血管平滑肌總蛋白并測定蛋白濃度,sds-page電泳后轉(zhuǎn)至pvdf膜,抗體孵育后凝膠成像系統(tǒng)成像后保存圖像,用quantity-one軟件測量灰度值,以目的蛋白與內(nèi)參β-actin蛋白灰度值比值作為該目的蛋白的相對表達量。實驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用spss11.0和graphpadprism5.0軟件進行統(tǒng)計分析。結(jié)果:⑴.離體血管環(huán)實驗結(jié)果:(1).kv7離子通道非特異阻斷劑xe991(10-7-10-4mol/l)能濃度依賴性的升高np組(n=10)cpas血管環(huán)的基礎(chǔ)張力,與dmso(二甲亞砜溶劑)對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(n=10,Δp0.05,**p0.01,***p0.001,two-wayanova);在5x10-5mol/l時張力變化百分比達最大,為44.67±9.52%,在10-4mol/l時出現(xiàn)明顯舒張反應(yīng),張力下降達29.61±6.47%左右。kv7離子通道非特異阻斷劑xe991(10-6,10-5,5x10-5m/l)收縮pe組(n=10)cpas血管環(huán)的作用較np組明顯減弱,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(n=10,*p0.01,***p0.001,two-wayanova)。(2).對np組來說,未加xe991預(yù)處理時,預(yù)收縮劑u46619(10-10-3x10-6mol/l)能濃度依賴性的收縮cpas血管環(huán),與dmso對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(n=10,**p0.01,two-wayanova);加10-5mol/lxe991孵育后,u46619(10-10-3x10-6mol/l)各濃度引起的張力變化百分比均較未用xe991孵育明顯增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(n=10,*p0.05,**p0.01,two-wayanova)。對pe組來說,加10-5mol/lxe991孵育后,u46619在10-8、10-7、10-6mol/l濃度引起的cpas血管環(huán)張力變化百分比較未加10-5mol/lxe991孵育相比差異不大,不具有統(tǒng)計學(xué)意義(n=10,Δp0.05,two-wayanova)。(3).np組:與dmso對照組相比,kv7通道開放劑retigabine(n=10)、bms-204352(n=10)(10-9~10-4mol/l)均能濃度依賴性的舒張u46619(10-7mol/l)預(yù)收縮的cpas血管環(huán)(差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,**p0.01、***p0.001,two-wayanova),但ica-27243(n=10)、ml277(n=10)對u46619(10-7mol/l)預(yù)收縮的血管環(huán)張力無影響(差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義,Δp0.05、Δp0.05,two-wayanova)。pe組:與np組對比,retigabine(n=10)、bms-204352(n=10)(10-9~10-4mol/l)舒張u46619(10-7mol/l)預(yù)收縮的cpas血管環(huán)的能力明顯減弱(差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,Δp0.05,*p0.05,**p0.01,***p0.001,two-wayanova);ica-27243(n=10)(10-9~10-4mol/l)在10-5mol/l和10-4mol/l濃度能舒張cpas血管環(huán)(差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,*p0.05,two-wayanova)。ml277對u46619(10-7mol/l)預(yù)收縮的cpas血管環(huán)的舒張作用不明顯(差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義,Δp0.05,two-wayanova)。⑵.np組(n=15)和pe組(n=15)兩組比較發(fā)現(xiàn)基因kcnq1、kcnq2、kcnq3、kcnq4、kcnq5的mrna相對表達量分別是:1.1148±0.0351、1.0172±0.0247、1.0337±0.0224、1.0223±0.0473、1.0280±0.0510和1.1017±0.0547、0.9993±0.0589、1.7448±0.0678、0.1123±0.0117、0.1133±0.0129;而且與np組相比,kcnq1和kcnq2的mrna的表達水平差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義(Δp0.05,Δp0.05),基因kcnq3、kcnq4和kcnq5的mrna的表達水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(***p0.01、***p0.01、***p0.01);pe組基因kcnq3的mrna表達水平明顯上調(diào),基因kcnq4和kcnq5的mrna表達水平明顯下調(diào)。⑶.np組(n=15)KCNQ3-5的蛋白相對表達量分別是:0.1845±0.032、0.6147±0.0426、0.5738±0.0192,PE組(n=15)KCNQ3-5的蛋白相對表達量分別是:0.5083±0.0377、0.2657±0.0461、0.2594±0.0587,三者之間兩兩比較差異明顯,具有統(tǒng)計學(xué)意義(***P0.01、***P0.01、***P0.01);與NP組相比,PE組基因KCNQ3的蛋白表達水平明顯上調(diào),基因KCNQ4和KCNQ5的蛋白表達水平明顯下調(diào)。結(jié)論:1.Kv7通道參與調(diào)節(jié)正常血壓妊娠的胎盤絨毛膜板動脈血管張力;與正常血壓妊娠相比,Kv7通道調(diào)節(jié)子癇前期的胎盤絨毛膜板動脈血管張力的能力明顯減弱;2.與正常血壓妊娠相比,子癇前期妊娠婦女CPAs血管平滑肌上KCNQ1、KCNQ2的mRNA表達差異不明顯,KCNQ3亞型的mRNA及蛋白表達明顯上調(diào),KCNQ4、KCNQ5的mRNA及蛋白表達明顯下調(diào);3.Kv7離子通道調(diào)節(jié)子癇前期絨毛膜板動脈張力的能力明顯減弱主要與KCNQ4和KCNQ5亞型表達下調(diào)有關(guān);4.KCNQ3通道可能參與調(diào)節(jié)子癇前期妊娠婦女的CPAs血管的舒張,即KCNQ3通道的表達及功能的轉(zhuǎn)變可以看作是KCNQ4/KCNQ5通道舒張子癇前期CPAs血管平滑肌作用減弱后的補償機制。
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【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R714.244

【參考文獻】

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1 陸家鳳;可燕;蔣嘉燁;栗源;李曉軍;;鹽酸關(guān)附甲素對大鼠血管舒縮功能的影響及其機制[J];中國藥理學(xué)通報;2012年07期

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本文編號：1547025