本文關(guān)鍵詞： MARF1 卵子成熟障礙 突變 單核苷酸多態(tài)性　出處：《山東大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景卵子成熟障礙是引起女性不孕的原因之一。主要包括細(xì)胞核成熟和細(xì)胞質(zhì)成熟兩方面。卵子核成熟主要指卵子從減數(shù)分裂阻滯中恢復(fù),并再次停滯于減數(shù)第二次分裂等待受精。目前生殖臨床對于卵子核成熟與否的判斷主要采用形態(tài)學(xué)觀察的方法判斷減數(shù)分裂進(jìn)程。若卵細(xì)胞質(zhì)內(nèi)見生發(fā)泡(Gv),無極體,則為Gv期卵；若無生發(fā)泡也無極體,為第一次減數(shù)分裂中期(MI)卵。2012年,Youqiang Su et al報道乙基亞硝基脲(ENU)誘導(dǎo)小鼠Marf1基因突變,引起卵子減數(shù)分裂停滯于Gv期,導(dǎo)致小鼠不孕。人類MARF1基因位于16號染色體1區(qū)3帶,包括27個外顯子,編碼1742個氨基酸,與小鼠Marf1編碼的蛋白具有86%同源性,構(gòu)成包含3個RNA識別結(jié)構(gòu)域(RRMs)的蛋白。目前尚未見人類卵母細(xì)胞減數(shù)分裂停滯的MARF1基因突變相關(guān)報道,因此,本課題將對卵子成熟障礙患者M(jìn)ARF1基因的關(guān)鍵外顯子進(jìn)行測序,探討人類卵子成熟障礙是否與MARF1基因變異相關(guān)。 研究方法研究對象選自2008-2013年就診于山東大學(xué)附屬生殖醫(yī)院的患者。研究對象滿足以下條件：1)年齡40歲以下；2)染色體核型正常,均為46,XX；3)兩個或兩個以上IVF/ICSI周期中70%以上卵子出現(xiàn)成熟障礙。對照選擇無流產(chǎn)史且生育過正常孩子的婦女200人。提取其外周血全基因組DNA,應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增其外顯子及相應(yīng)側(cè)翼序列,對PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測序,與NCBI提供的正常序列比較,分析MARF1基因8、11、12及16-27外顯子及側(cè)翼序列是否存在異常堿基改變、插入或缺失。 結(jié)果對91例卵子減數(shù)分裂障礙患者M(jìn)ARF1基因的第8、11、12及16-27號外顯子及側(cè)翼序列測序發(fā)現(xiàn)了一處位于26號外顯子的新發(fā)同義突變(c.4852GA),兩處新發(fā)單核苷酸多態(tài)性位點,分別為位于25號外顯子的c.4715CG和位于21號外顯子的c.3979AT(此處為中國人新發(fā)單核苷酸多肽位點),兩處新發(fā)SNP位點基因型頻率與對照組相比未見統(tǒng)計學(xué)差異。此外還發(fā)現(xiàn)五個已知的SNP位點,分別是rs28670396、rs7185421、rs28509427、rs58075088、rs202242803。結(jié)論本研究未發(fā)現(xiàn)人類卵子成熟障礙與MRAF1基因突變相關(guān)的直接證據(jù),但新發(fā)現(xiàn)同義突變的功能仍需進(jìn)一步研究和驗證。
[Abstract]:Background the obstacle of egg maturation is one of the causes of female infertility. It mainly includes nuclear maturation and cytoplasmic maturation. Egg nuclear maturation mainly refers to the recovery of egg from meiosis block. At present, the judgement of egg nucleus maturation or not in reproductive clinic mainly uses morphological observation method to judge the meiosis process. In 2012, Youqiang Su et al reported that ENU-induced mutation of Marf1 gene in mice, resulting in meiosis in GV stage. The human MARF1 gene, located in region 3 of chromosome 16, contains 27 exons and encodes 1742 amino acids, having 86% homology with the protein encoded by mouse Marf1. There are no reports on the mutation of MARF1 gene in human oocytes with meiosis stagnation. Therefore, the key exons of MARF1 gene in patients with oocyte maturation disorder will be sequenced in this study. To investigate whether the disorder of human egg maturation is related to the variation of MARF1 gene. Methods the subjects were selected from patients who were admitted to the affiliated Reproductive Hospital of Shandong University from 2008 to 2013. The subjects met the following conditions: 1) the age below 40 years old and 2)) the karyotype was normal. In two or more IVF/ICSI cycles, more than 70% oocytes developed maturation disorders. In contrast, 200 women with no history of abortion and who had given birth to normal children were selected. The genomic DNA of peripheral blood was extracted and amplified by polymerase chain reaction (PCR). Their exons and their corresponding flanking sequences, The PCR products were directly sequenced and compared with the normal sequences provided by NCBI. The results showed that there were abnormal base changes, insertions or deletions in the exons 8111112 and 16-27 of MARF1 gene and their flanking sequences. Results in 91 patients with meiosis, a new synonymous mutation, c. 4852 GAA, and two new single nucleotide polymorphisms were found in exons 8111112 and 16-27 of MARF1 gene and flanking sequences. C. 4715CG at exon 25 and c. 3979AT at exon 21, respectively. The genotypes of the two new SNP loci were not significantly different from those of the control group. Five known SNP sites, They are rs28670396rs7185421rs28509427rs58075088andrs20242803.Conclusion there is no direct evidence of the relationship between MRAF1 gene mutation and human oocyte maturation disorder, but the function of the newly discovered synonymous mutation still needs to be further studied and verified.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R714.8

【共引文獻(xiàn)】

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6 滕曉明,程懷瑾;卵細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)單精子注射在治療不育癥中的應(yīng)用[J];中華男科學(xué)雜志;2005年05期

7 孫玲;陳士嶺;李勁;李黎;張為青;楊杰;邱卓琳;邢福祺;;顯微授精穿刺方式與胚胎受精率及閉鎖率相關(guān)性研究[J];中國男科學(xué)雜志;2007年06期

8 劉芳;王瑩;金銳;白剛;劉永杰;唐大偉;包俊華;;常規(guī)IVF短時授精第2極體排出及原核形成與胚胎發(fā)育潛能的相關(guān)性研究[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2013年09期

9 周穎,黃學(xué)鋒,鄭菊芬,林金菊,葉碧綠,趙軍招,林文琴,周瑋,徐炳森;體外受精-胚胎移植中移植胚胎透明帶厚度變量與治療結(jié)果的相關(guān)性研究[J];生殖醫(yī)學(xué)雜志;2002年05期

10 孫瑩璞,徐瑜,蘇迎春,朱桂金,郭藝紅;人胚胎透明帶厚度及其變量與體外受精-胚胎移植妊娠結(jié)局的關(guān)系[J];生殖醫(yī)學(xué)雜志;2004年06期

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3 張寶樂;豬Gpr3基因特征、表達(dá)及其對卵泡顆粒細(xì)胞的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

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6 談雅靜;AQP7在卵母細(xì)胞冷凍保存與成熟中的功能及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2014年

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8 王松;人卵泡液內(nèi)FSH、LH及雌二醇對顆粒細(xì)胞NPPC基因表達(dá)的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

9 史中娜;卵母細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)中央顆�；涂张輰κ芫⑴咛グl(fā)育的影響[D];華中科技大學(xué);2013年

10 曹明雅;體外受精—胚胎移植中影響子宮內(nèi)膜異位癥患者妊娠結(jié)局的相關(guān)因素分析及GDF-9在子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液和顆粒細(xì)胞中的表達(dá)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

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本文編號：1515605