宮頸癌組織中miRNA-34c的表達(dá)水平分析及其靶基因PLK4的鑒定
本文關(guān)鍵詞: miRNA-c PLK 宮頸癌 出處:《中國腫瘤臨床》2015年22期 論文類型:期刊論文
【摘要】:目的:分析miRNA-34c在宮頸癌組織中的表達(dá)水平并鑒定其新的靶基因。方法:利用熒光實(shí)時定量PCR(q RT-PCR)檢測甘肅省婦幼保健醫(yī)院34例宮頸癌和癌旁正常組織中miRNA-34c表達(dá)水平。利用miRNA靶基因預(yù)測數(shù)據(jù)庫預(yù)測miRNA-34c新的靶基因Polo樣激酶4(PLK4)。將含有PLK4的3‘UTR片段熒光素酶載體分別與miRNA-34c模擬物或陰性對照共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞,并檢測其熒光素酶活性。在人宮頸癌細(xì)胞Si Ha細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染miRNA-34c模擬物或陰性對照,利用q RT-PCR法和Western blot法分別檢測靶基因的m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。結(jié)果:與癌旁正常組織相比,miRNA-34c在宮頸癌組織中表達(dá)下調(diào)。在HEK293T細(xì)胞中,miRNA-34c模擬物顯著抑制熒光素酶的活性(P0.01)。miRNA-34c模擬物顯著下調(diào)Si Ha細(xì)胞中PLK4的m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)(P0.01)。結(jié)論:miRNA-34c在人宮頸癌組織中表達(dá)下調(diào),且能與PLK4的3’UTR結(jié)合并下調(diào)其m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。
[Abstract]:Objective: to analyze the expression level of miRNA-34c in cervical carcinoma and identify its new target gene. Methods: Real-time quantitative PCR(q RT-PCR was used. The expression of miRNA-34c was detected in 34 cases of cervical cancer and adjacent normal tissues in Gansu Maternal and Child Health Care Hospital. The miRNA target gene prediction database was used to predict the new target gene of miRNA-34c. Polo like kinase 4 (. The luciferase vector containing PLK4 was cotransfected into HEK293T cells with miRNA-34c analogue or negative control. The luciferase activity was detected. MiRNA-34c mimics or negative controls were transfected into human cervical cancer cell line SIHA. The expression levels of m RNA and protein in target gene were detected by Q RT-PCR and Western blot methods respectively. Results: compared with normal tissues adjacent to cancer, the expression of m RNA and protein were detected by Q RT-PCR method and Western blot method respectively. The expression of miRNA-34c was down-regulated in cervical cancer tissues and in HEK293T cells. MiRNA-34c mimics significantly inhibited luciferase activity (P0.01). MiRNA-34c mimics significantly down-regulated the expression of m RNA and protein of PLK4 in SIHA cells (P0.01). Conclusion the expression of 10% miRNA-34c is down-regulated in human cervical carcinoma. And it could bind to PLK4 and down-regulate the expression of m RNA and protein.
【作者單位】: 甘肅省婦幼保健醫(yī)院婦產(chǎn)科重癥救護(hù)中心;
【分類號】:R737.33
【正文快照】: 宮頸癌是最常見的女性惡性腫瘤之一,其死亡率居女性惡性腫瘤的首位,其發(fā)病率呈升高和低齡化趨勢[1-2]。micro RNA(mi RNA)是一種長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈小RNA,通常與靶基因m RNA完全或不完全匹配結(jié)合,誘導(dǎo)靶m RNA降解或阻遏其轉(zhuǎn)錄后翻譯[3-4]。mi RNA-34家族包括mi RN
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