本文關(guān)鍵詞： 卵巢癌 順鉑耐藥 lincRNA H19　出處：《浙江大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤之一,其死亡率居婦科惡性腫瘤之首�；熢l(fā)和繼發(fā)耐藥是導(dǎo)致卵巢癌患者存活率低的重要因素。順鉑和DNA可以形成鏈內(nèi)和鏈間交聯(lián),從而引起DNA損傷。研究表明一些基因間長片段非編碼RNA(lincRNAs)廣泛參與了腫瘤細(xì)胞DNA損傷應(yīng)答的各個環(huán)節(jié)。因此,lincRNAs可能參與了卵巢癌鉑類耐藥發(fā)生。然而,目前關(guān)于"lincRNAs如何參與卵巢癌順鉑耐藥的產(chǎn)生"的認(rèn)識依舊有限。1)本論文通過順鉑間隔刺激法建立了卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株。通過克隆形成率法分析,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞株A2780-DR對順鉑、紫杉醇和雙氧水的抗性都明顯增強(qiáng)。通過轉(zhuǎn)錄組測序分析卵巢癌順鉑敏感和耐藥細(xì)胞株,結(jié)合生物信息學(xué)分析獲得了 436個差異表達(dá)的lincRNAs。經(jīng)熒光定量 PCR驗(yàn)證,linc-RECK-3,H19,LUCAT1,LINC00961 和 linc-CARS2-2等在耐藥細(xì)胞株中明顯增加,而linc-TNFRSF19-1和LINC00515在耐藥株中明顯降低。H19和LUACT1在癌組織中高表達(dá),且H19高表達(dá)的卵巢癌患者容易復(fù)發(fā)。2)H19在敏感細(xì)胞株中能被順鉑誘導(dǎo)表達(dá),而在耐藥細(xì)胞株中不能被誘導(dǎo)。耐藥細(xì)胞株中H19被干擾后,細(xì)胞內(nèi)H19的表達(dá)量明顯下降,同時細(xì)胞對順鉑的敏感性也明顯增加。裸鼠實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了耐藥細(xì)胞中H19被干擾后增加了對順鉑的敏感性。3)采用非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析尋找被H19調(diào)控并參與順鉑耐藥發(fā)生的蛋白。耐藥細(xì)胞株與敏感細(xì)胞株中差異表達(dá)蛋白有113個,其中有27個是NRF2靶蛋白。KEGG分析發(fā)現(xiàn)有6個NRF2靶蛋白參與還原型谷胱甘肽(GSH)代謝。Western-blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有7個蛋白(ALDH1A1,NQO1,GSR,G6PD,GCLC,GCLM和NRF2)均在耐藥細(xì)胞中高表達(dá)。與耐藥細(xì)胞比較,敏感細(xì)胞(A2780和A2780-DR/H19si)對雙氧水更敏感,且細(xì)胞內(nèi)GSH水平更低。耐藥細(xì)胞NRF2干擾或GSH合成酶抑制劑丁硫氨酸亞砜胺(BSO)處理后均增加了對順鉑的敏感性。本論文研究發(fā)現(xiàn)了一些與順鉑耐藥有潛在關(guān)系的lincRNAs,為后續(xù)深入研究這些lincRNAs參與順鉑耐藥分子機(jī)制提供基礎(chǔ)。論文首次提出H19通過NRF2通路調(diào)節(jié)GSH代謝促進(jìn)順鉑耐藥,加深了我們對順鉑耐藥機(jī)制的理解。為腫瘤化療效果的提升提供了理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:Ovarian cancer is one of the most common malignant tumors in women. Chemotherapeutic primary and secondary drug resistance is an important factor leading to low survival rate of ovarian cancer patients. Cisplatin and DNA can form intrachain and inter-chain crosslinking. It is shown that some noncoding RNAs (lincRNASs) are involved in the DNA damage response of tumor cells. LincRNAs may be involved in the development of platinum resistance in ovarian cancer. There is still limited understanding of how lincRNAs is involved in the production of cisplatin resistance in ovarian cancer. In this paper, cisplatin resistant ovarian cancer cell lines were established by cisplatin interval stimulation. It was found that the resistance of cell line A2780-DR to cisplatin, paclitaxel and hydrogen peroxide was significantly increased. 436 differentially expressed lincRNAs were obtained by bioinformatics analysis. Linc-RECK-3 H19 LUCAT1 was confirmed by fluorescence quantitative PCR. LINC00961 and linc-CARS2-2 were significantly increased in drug-resistant cell lines. However, linc-TNFRSF19-1 and LINC00515 significantly decreased the expression of. H19 and LUACT1 in cancer tissues. Moreover, high expression of H19 in ovarian cancer patients can be easily relapsed. 2H19 can be induced by cisplatin in sensitive cell line, but not in drug-resistant cell line. H19 in drug-resistant cell line is interfered with. The expression of H19 decreased significantly. At the same time, the sensitivity of cells to cisplatin was also significantly increased. The results of nude mice also confirmed that H19 in drug-resistant cells increased the sensitivity to cisplatin after being interfered with. 3). Unlabeled quantitative proteomic analysis was used to search for proteins regulated by H19 and involved in cisplatin resistance. There were 113 differentially expressed proteins in drug resistant and sensitive cell lines. Among them, 27 were NRF2 target proteins. KEGG analysis showed that 6 NRF2 target proteins were involved in GSH of reduced glutathione. The results of metabolism. Western-blot analysis showed that there were 7 ALDH1A1 proteins. NQO1GSRG6PDGCLM and NRF2) were highly expressed in drug-resistant cells, compared with those in drug-resistant cells. Sensitive cells such as A2780 and A2780-DRR / H19si) were more sensitive to hydrogen peroxide. NRF2 interference or GSH synthase inhibitor butyronine sulfoxide amines (BSOs) was also found in drug-resistant cells. After treatment, the sensitivity to cisplatin was increased. In this study, we found some lincRNAs which have potential relationship with cisplatin resistance. In order to provide a basis for further study of the molecular mechanism of cisplatin resistance, H19 was proposed to regulate the metabolism of GSH through the NRF2 pathway to promote cisplatin resistance. Our understanding of the mechanism of cisplatin resistance is deepened, which provides a theoretical basis for the improvement of chemotherapy effect.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 魯慧英;Detection of hepatitis C virus RNA sequences in cholangiocarcinomas in Chinese and American patients[J];Chinese Medical Journal;2000年12期

2 ;Detection the HCV RNA by PCR-microplate hybridization method from clinical specimens[J];中國輸血雜志;2001年S1期

3 付漢江,鄭曉飛;類mRNA RNA研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2002年04期

4 Verheyden B ,徐其武;口服脊髓灰質(zhì)炎疫苗核殼和RNA的穩(wěn)定性[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;2002年01期

5 CMBE譯文組;探索小RNA的功能[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2004年03期

6 沈維干;RNA interference and its current application in mammals[J];Chinese Medical Journal;2004年07期

7 ;Potent and specific inhibition of SARS-CoV antigen expression by RNA interference[J];Chinese Medical Journal;2005年09期

8 孫娣;汪洋;張麗娟;閆玉清;;一種簡捷提取植物總RNA的方法[J];黑龍江醫(yī)藥;2005年06期

9 熊慧華;于世英;胡廣原;莊亮;;Effects of Survivin Expression Suppressed by Short Hairpin RNA on MCF-7 Cells[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)英德文版);2006年03期

10 楊益超;;RNA干擾及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];廣西醫(yī)學(xué);2007年10期

相關(guān)會議論文 前10條

1 金由辛;;面向21世紀(jì)的RNA研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊）[C];1999年

2 ;第四屆RNA全國研討會大會報告日程安排[A];第四屆全國RNA進(jìn)展研討會論文集[C];2005年

3 ;Function of Transfer RNA Modifications in Plant Development[A];植物分子生物學(xué)與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——全國植物生物學(xué)研討會論文摘要集[C];2010年

4 王峰;張秋平;陳金湘;;棉花總RNA的快速提取方法[A];中國棉花學(xué)會2011年年會論文匯編[C];2011年

5 關(guān)力;陳本iY;iJ云虹;郭培芝;魏重琴;邱蘇吾;苗健;;關(guān)于動物}D~T中RNAn,定方法的研究[A];中國生理科學(xué)會學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編（生物化學(xué)）[C];1964年

6 夏海濱;;小RNA在免疫學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用研究進(jìn)展[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

7 ;The stability of hepatitis C virus RNA in various handling and storage conditions[A];中國輸血協(xié)會第四屆輸血大會論文集[C];2006年

8 郭德銀;;RNA干擾在病毒研究和控制中的應(yīng)用[A];2006中國微生物學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

9 甘儀梅;楊業(yè)華;王學(xué)奎;曹燕;楊特武;;棉花總RNA快速提取[A];中國棉花學(xué)會2007年年會論文匯編[C];2007年

10 ;Identification and characterization of novel interactive partner proteins for PCBP1 that is a RNA-binding protein[A];中國優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會第四屆全國學(xué)術(shù)論文報告會暨基因科學(xué)高峰論壇論文專輯[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 馮衛(wèi)東;研究人員發(fā)現(xiàn)可破壞腫瘤抑制基因的小RNA[N];科技日報;2009年

2 記者 儲笑抒 通訊員 盛偉;人體微小RNA有望提前發(fā)出癌癥預(yù)警[N];南京日報;2011年

3 瀘州醫(yī)學(xué)院副教授、科普作家 周志遠(yuǎn);“大頭兒子”與環(huán)狀RNA[N];第一財經(jīng)日報;2014年

4 麥迪信;小分子RNA可能有大作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2003年

5 董映璧;美發(fā)現(xiàn)基因調(diào)控可回應(yīng)“RNA世界”[N];科技日報;2006年

6 張忠霞;特制RNA輕推一下,就能“喚醒”基因[N];新華每日電訊;2007年

7 聶翠蓉;RNA：縱是配角也精彩[N];科技日報;2009年

8 馮衛(wèi)東;RNA干擾機(jī)制首次在人體中獲得證實(shí)[N];科技日報;2010年

9 馮衛(wèi)東　王小龍;英在地球早期環(huán)境模擬條件下合成類RNA[N];科技日報;2009年

10 記者 常麗君;新技術(shù)讓研究進(jìn)入單細(xì)胞內(nèi)RNA的世界[N];科技日報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王趙瑋;昆蟲RNA病毒復(fù)制及昆蟲抗病毒天然免疫機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2014年

2 包純;一類新非編碼RNA的發(fā)現(xiàn)以及產(chǎn)生和功能的初探[D];華中師范大學(xué);2015年

3 李語麗;基于MeRIP-seq的水稻RNA m6A甲基化修飾的研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

4 熊瑜琳;miR-122靶位基因STAT3調(diào)控長鏈非編碼 RNA Lethe促進(jìn)HCV復(fù)制的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 范春節(jié);高通量測序鑒定毛竹小RNA及其功能分析[D];中國林業(yè)科學(xué)研究院;2012年

6 王加強(qiáng);小鼠著床前胚胎特異ERV相關(guān)長非編碼RNA的定向篩選及功能研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 王業(yè)偉;非編碼RNA SPIU的結(jié)構(gòu)和功能研究和p19INK4D在APL發(fā)病中的作用[D];上海交通大學(xué);2013年

8 鄒艷芬;子癇前期中非編碼RNA對滋養(yǎng)細(xì)胞功能的調(diào)控及機(jī)制探索[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

9 朱喬;miR-10b在人肝細(xì)胞肝癌發(fā)生中的作用及其機(jī)制的初步探索[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 蔣俊鋒;長鏈非編碼RNA BACE1-AS促進(jìn)Aβ聚集及其調(diào)節(jié)BACE1和SERF1a的ceRNA機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陸聰兒;條紋斑竹鯊再生肝臟中差異RNA的研究[D];浙江理工大學(xué);2015年

2 張曉輝;小鼠幾種長鏈非編碼RNA基因功能的初步研究[D];昆明理工大學(xué);2015年

3 全弘揚(yáng);長鏈非編碼RNA在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中的相關(guān)作用及機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 胡亮;DDX19A識別PRRSV基因組RNA并激活NLRP3炎癥小體[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

5 張帥兵;應(yīng)用RNA干擾技術(shù)對旋毛蟲Nudix水解酶基因功能的研究[D];鄭州大學(xué);2015年

6 鄭芳芳;肺癌RNA-Seq數(shù)據(jù)中RNA編輯事件的識別算法和系統(tǒng)分析[D];蘇州大學(xué);2015年

7 陳瑞東;長鏈非編碼RNA MEG3在胰腺癌發(fā)生發(fā)展中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2015年

8 劉駿武;線蟲和水稻中環(huán)狀RNA的預(yù)測及分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 李猷;利用RNA干擾技術(shù)提高番茄抗TMV侵染能力的研究[D];牡丹江師范學(xué)院;2015年

10 吳術(shù)盛;SVCV感染EPC細(xì)胞microRNA表達(dá)譜的初步研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號：1455824