本文關(guān)鍵詞：Sympk基因?qū)π∈笊彻δ艿挠绊懠俺醪綑C(jī)制探索　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：哺乳動(dòng)物的配子(精子和卵子)都是由原始生殖細(xì)胞發(fā)展而來。其中精子發(fā)生包括精原細(xì)胞的增殖、精母細(xì)胞的減數(shù)分裂和精子細(xì)胞的變形,是一個(gè)高度專一的分化過程。生精細(xì)胞基因表達(dá)的一個(gè)重要特征就是通過選擇性多聚腺苷酸化產(chǎn)生細(xì)胞特異性的mRNAs,而且通常是利用非經(jīng)典的AAUAAA非依賴性的多聚腺苷酸化信號(hào)通路。研究表明,生精細(xì)胞似乎比體細(xì)胞更青睞選擇多聚腺苷酸化,而且大量的生精細(xì)胞轉(zhuǎn)錄本與體細(xì)胞轉(zhuǎn)錄本相比具有較短的3'UTR,這說明了在生精細(xì)胞中優(yōu)先利用了更多的近端多聚腺苷酸化位點(diǎn)。在前期實(shí)驗(yàn)室蛋白質(zhì)組學(xué)工作中,我們構(gòu)建了多個(gè)與精子發(fā)生相關(guān)的蛋白表達(dá)譜系,其中在四倍體生精細(xì)胞譜系中,我們鑒定到了Sympk基因,并投入了更多的關(guān)注。文獻(xiàn)報(bào)道在體細(xì)胞的經(jīng)典多聚腺苷酸化通路中,SYMPK蛋白作為一個(gè)腳手架蛋白協(xié)調(diào)CPSF和CstF的相互作用,但在精子發(fā)生過程中,其是否參與生精細(xì)胞特異的多聚腺苷酸化通路,以及由此非經(jīng)典的多聚腺苷酸化通路與體細(xì)胞的通路究竟存在哪些差異,是否還有其特異的相互作用的蛋白存在,這些問題都促使我們深入研究Sympk在小鼠精子發(fā)生過程中的功能。本研究首先對(duì)該基因在小鼠體內(nèi)不同時(shí)期的表達(dá)情況進(jìn)行了定量(Real time PCR)和定位研究(免疫組化和熒光),同時(shí)引進(jìn)了具有兩個(gè)loxP位點(diǎn)的類似于Sympk基因全敲的雜合子小鼠,在該小鼠保種和繁殖的過程中,我們發(fā)現(xiàn)敲除鼠生出的子代小鼠沒有純合子的存在,這不符合孟德爾遺傳定理,因此我們猜測(cè)小鼠在胚胎時(shí)期純合子致死。進(jìn)一步我們將此雜合子小鼠與生精細(xì)胞特定DDX4-Cre小鼠進(jìn)行交配構(gòu)建了生精細(xì)胞特異性敲除小鼠(CKO),并進(jìn)行一系列生殖力測(cè)試和表型分析。在成年小鼠中我們確認(rèn)了其雄性不育的表型,但是在剛出生的CK○小鼠中,我們卻能見到精原細(xì)胞。隨后我們進(jìn)一步分析表型出現(xiàn)的時(shí)間,2周的小鼠睪丸生精小管內(nèi)已經(jīng)出現(xiàn)了大量空泡化,而1周小鼠睪丸生精小管雖然沒有明顯改變,但是生精細(xì)胞數(shù)量已經(jīng)開始有所下降,因此,我們將表型發(fā)生的時(shí)間點(diǎn)初步確定在1w左右的小鼠。目前我們正在取1w的睪丸組織作為標(biāo)本留作RNA芯片數(shù)據(jù)的分析。我們希望在芯片結(jié)果中可以鑒定出與Sympk基因表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致的相關(guān)基因的顯著改變,并試圖與多聚腺苷酸化機(jī)制進(jìn)行聯(lián)系,闡明Sympk基因在精子發(fā)生特定多聚腺昔酸化通路中的作用。
[Abstract]:In this study , we found that there is no homozygous mutation in spermatogenic cells .

【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R711.6

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本文編號(hào)：1437273