本文關鍵詞：姜黃素抑制脂多糖誘導的人絨毛外滋養(yǎng)細胞miR-155表達及細胞凋亡　出處：《南京中醫(yī)藥大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 姜黃素 炎癥 miR-155 人絨毛外滋養(yǎng)細胞 凋亡 侵襲

【摘要】：[研究背景及目的]人絨毛外滋養(yǎng)細胞(HTR-8/SVne o)過度凋亡是滋養(yǎng)細胞侵入能力下降的重要因素,是引起子癇前期的原因之一。既往研究發(fā)現(xiàn),PE發(fā)病中Tall Like Receptor4 (TLR4)炎癥通路激活起重要作用。本實驗考察姜黃素對于脂多糖(LPS)誘導的人絨毛外滋養(yǎng)細胞過度凋亡的干預作用及其機制。[研究方法]體外培養(yǎng)人絨毛外滋養(yǎng)細胞(HTR-8/SVneo細胞株),分為姜黃素干預組(12.5,25,50μmol/L)、陽性對照組(LPS組、重組腺病毒Ad-miR-155組)、陰性對照組。采用real-time PCR檢測不同組別細胞內(nèi)的miR-155基因表達量；報告基因檢測NF-κB信號通路活性；Transwell檢測絨毛外滋養(yǎng)細胞侵襲能力；ELISA定量檢測不同組別的細胞凋亡情況以及用BCA試劑盒蛋白定量,Western blotting法分析不同組別細胞內(nèi)的NF-κB (p65)蛋白表達情況。[研究結果11、real-time PCR結果顯示LPS處理可上調(diào)細胞內(nèi)miR-155的表達；NF-κ,B報告基因和Western blotting結果顯示,LPS激活了絨毛外滋養(yǎng)細胞中NF-kB炎癥通路。2、ELISA細胞凋亡檢測和Transwell侵襲試驗證明,LPS通過miR-155誘導絨毛外滋養(yǎng)細胞凋亡過度,導致其侵襲力下降。3、Western blotting和其q-PCR結果顯示,不同劑量的姜黃素預處理組(12.5,25,50μmol/ L)均可降低細胞內(nèi)NF-κB (p65)蛋白含量,當姜黃素濃度為12.5pmol/L時降低作用最顯著；NF-κB報告基因結果提示姜黃素可抑制NF-κB的活性,并呈劑量依賴性。細胞凋亡檢測結果表明與對照組相比,LPS處理可誘導細胞凋亡,而姜黃素(12.5,25,50 μmol/L)預處理后可不同程度地抑制細胞凋亡；細胞侵襲試驗提示姜黃素(12.5,25,50 μmol/L)預處理后可不同程度地抑制人絨毛外滋養(yǎng)細胞遷移能力下降。[研究結論1LPS通過miR-155促進滋養(yǎng)細胞凋亡,姜黃素預處理可以通過抑制TLR4通路激活,使NF-κB (p65)蛋白下調(diào),下調(diào)LPS誘導的miR-155表達水平,從而抑制滋養(yǎng)細胞過度凋亡和侵襲能力下降。
[Abstract]:Background and purpose: human extravillous trophoblast cells (HTR-8/SVne o) is an important factor in the excessive apoptosis of trophoblast invasion ability decreased, which is one of reasons of preeclampsia. Previous studies have found that the incidence of PE in Tall Like Receptor4 (TLR4) inflammatory pathway activation plays an important role. The effects of curcumin on lipopolysaccharide (LPS) cultured human trophoblast cells cultured in vitro. The effect and mechanism of research methods] excessive apoptosis induced human extravillous trophoblast cells (HTR-8/SVneo cells), divided into curcumin intervention group (12.5,25,50 mol/L), positive control group (LPS group, recombinant adenovirus Ad-miR-155 group), negative control group using real-time PCR detection. The expression of miR-155 gene in different groups of cells; report gene detection of NF- kappa B signaling pathway activity; the invasion ability of trophoblast cells to detect Transwell ELISA of different groups; quantitative detection The other cell apoptosis and BCA protein quantitative kit, analysis of different groups of cells within the NF- kappa B Western blotting (p65) protein expression. The results of real-time PCR 11, the results showed that LPS treatment may upregulate the expression of miR-155 in cells; NF- K, B report gene and Western blotting showed that LPS activated extravillous trophoblast cells in NF-kB inflammatory pathways.2, ELISA apoptosis assay and Transwell invasion assay proved that LPS induced by miR-155 trophoblast cell apoptosis, leading to its invasion by.3, Western blotting and the q-PCR results showed that curcumin pretreatment group with different doses (12.5,25,50 mol/ L) can reduce intracellular NF- kappa B (p65) protein content, when curcumin concentration of 12.5pmol/L decreased most significantly; NF- kappa B reporter gene showed that curcumin can inhibit the activity of NF- K B, and dose according to Lai. Cell apoptosis detection results show that compared with the control group, LPS treatment can induce cell apoptosis, and curcumin (12.5,25,50 mol/L) after pretreatment can inhibit cell apoptosis; cell invasion test showed that curcumin (12.5,25,50 mol/L) after pretreatment can inhibit human extravillous trophoblast cell migration ability the conclusion of the study. 1LPS miR-155 by promoting apoptosis of trophoblast cells, curcumin pretreatment can be activated by inhibiting the TLR4 pathway, NF- kappa B (p65) protein expression, downregulation of LPS induced miR-155 expression, thus inhibiting the invasion and apoptosis of trophoblast cells ability decreased.

【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R714.244

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本文編號：1392597