本文關(guān)鍵詞：姜黃素抑制脂多糖誘導(dǎo)的人絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞miR-155表達(dá)及細(xì)胞凋亡　出處：《南京中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 姜黃素 炎癥 miR-155 人絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞 凋亡 侵襲

【摘要】：[研究背景及目的]人絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞(HTR-8/SVne o)過度凋亡是滋養(yǎng)細(xì)胞侵入能力下降的重要因素,是引起子癇前期的原因之一。既往研究發(fā)現(xiàn),PE發(fā)病中Tall Like Receptor4 (TLR4)炎癥通路激活起重要作用。本實(shí)驗(yàn)考察姜黃素對(duì)于脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的人絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞過度凋亡的干預(yù)作用及其機(jī)制。[研究方法]體外培養(yǎng)人絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞(HTR-8/SVneo細(xì)胞株),分為姜黃素干預(yù)組(12.5,25,50μmol/L)、陽(yáng)性對(duì)照組(LPS組、重組腺病毒Ad-miR-155組)、陰性對(duì)照組。采用real-time PCR檢測(cè)不同組別細(xì)胞內(nèi)的miR-155基因表達(dá)量；報(bào)告基因檢測(cè)NF-κB信號(hào)通路活性；Transwell檢測(cè)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲能力；ELISA定量檢測(cè)不同組別的細(xì)胞凋亡情況以及用BCA試劑盒蛋白定量,Western blotting法分析不同組別細(xì)胞內(nèi)的NF-κB (p65)蛋白表達(dá)情況。[研究結(jié)果11、real-time PCR結(jié)果顯示LPS處理可上調(diào)細(xì)胞內(nèi)miR-155的表達(dá)；NF-κ,B報(bào)告基因和Western blotting結(jié)果顯示,LPS激活了絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞中NF-kB炎癥通路。2、ELISA細(xì)胞凋亡檢測(cè)和Transwell侵襲試驗(yàn)證明,LPS通過miR-155誘導(dǎo)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡過度,導(dǎo)致其侵襲力下降。3、Western blotting和其q-PCR結(jié)果顯示,不同劑量的姜黃素預(yù)處理組(12.5,25,50μmol/ L)均可降低細(xì)胞內(nèi)NF-κB (p65)蛋白含量,當(dāng)姜黃素濃度為12.5pmol/L時(shí)降低作用最顯著；NF-κB報(bào)告基因結(jié)果提示姜黃素可抑制NF-κB的活性,并呈劑量依賴性。細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果表明與對(duì)照組相比,LPS處理可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,而姜黃素(12.5,25,50 μmol/L)預(yù)處理后可不同程度地抑制細(xì)胞凋亡；細(xì)胞侵襲試驗(yàn)提示姜黃素(12.5,25,50 μmol/L)預(yù)處理后可不同程度地抑制人絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞遷移能力下降。[研究結(jié)論1LPS通過miR-155促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡,姜黃素預(yù)處理可以通過抑制TLR4通路激活,使NF-κB (p65)蛋白下調(diào),下調(diào)LPS誘導(dǎo)的miR-155表達(dá)水平,從而抑制滋養(yǎng)細(xì)胞過度凋亡和侵襲能力下降。
[Abstract]:Background and purpose: human extravillous trophoblast cells (HTR-8/SVne o) is an important factor in the excessive apoptosis of trophoblast invasion ability decreased, which is one of reasons of preeclampsia. Previous studies have found that the incidence of PE in Tall Like Receptor4 (TLR4) inflammatory pathway activation plays an important role. The effects of curcumin on lipopolysaccharide (LPS) cultured human trophoblast cells cultured in vitro. The effect and mechanism of research methods] excessive apoptosis induced human extravillous trophoblast cells (HTR-8/SVneo cells), divided into curcumin intervention group (12.5,25,50 mol/L), positive control group (LPS group, recombinant adenovirus Ad-miR-155 group), negative control group using real-time PCR detection. The expression of miR-155 gene in different groups of cells; report gene detection of NF- kappa B signaling pathway activity; the invasion ability of trophoblast cells to detect Transwell ELISA of different groups; quantitative detection The other cell apoptosis and BCA protein quantitative kit, analysis of different groups of cells within the NF- kappa B Western blotting (p65) protein expression. The results of real-time PCR 11, the results showed that LPS treatment may upregulate the expression of miR-155 in cells; NF- K, B report gene and Western blotting showed that LPS activated extravillous trophoblast cells in NF-kB inflammatory pathways.2, ELISA apoptosis assay and Transwell invasion assay proved that LPS induced by miR-155 trophoblast cell apoptosis, leading to its invasion by.3, Western blotting and the q-PCR results showed that curcumin pretreatment group with different doses (12.5,25,50 mol/ L) can reduce intracellular NF- kappa B (p65) protein content, when curcumin concentration of 12.5pmol/L decreased most significantly; NF- kappa B reporter gene showed that curcumin can inhibit the activity of NF- K B, and dose according to Lai. Cell apoptosis detection results show that compared with the control group, LPS treatment can induce cell apoptosis, and curcumin (12.5,25,50 mol/L) after pretreatment can inhibit cell apoptosis; cell invasion test showed that curcumin (12.5,25,50 mol/L) after pretreatment can inhibit human extravillous trophoblast cell migration ability the conclusion of the study. 1LPS miR-155 by promoting apoptosis of trophoblast cells, curcumin pretreatment can be activated by inhibiting the TLR4 pathway, NF- kappa B (p65) protein expression, downregulation of LPS induced miR-155 expression, thus inhibiting the invasion and apoptosis of trophoblast cells ability decreased.

【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R714.244

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