本文關(guān)鍵詞：雌激素對雌性大鼠盆底肌間成纖維細胞機械應力效應的影響

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【摘要】：目的:研究17-β雌二醇(17-βE2)在特定加力強度下對雌性大鼠盆底骨骼肌間成纖維細胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、金屬蛋白酶組織抑制劑-1(tissue inhibitor metalloproteinase,TIMP-1)及β-連環(huán)蛋白(β-Catenin)的影響。方法:1.研究對象取Wistar雌性大鼠6只均由山西醫(yī)科大學實驗中心供給,喂養(yǎng)2周左右,體重平均120±30g,經(jīng)各項體格檢查均保持健康狀況。對雌性大鼠的處理符合中華人民共和國科學技術(shù)部頒發(fā)的《關(guān)于善待實驗動物的指導性意見》[1]。2.成纖維細胞原代培養(yǎng)取Wistar雌性大鼠盆底骨骼肌間組織大約3-5mm,在體外采用II型膠原酶對成纖維細胞原代培養(yǎng)、鑒定及純化。選取體外穩(wěn)定傳代生長的3-5代成纖維細胞,為后期17-β雌二醇干預提供實驗基礎。3.成纖維細胞應力對體外培養(yǎng)的成纖維細胞采用Flexercell4000外力加載系統(tǒng),同時設置特定加力時間為36小時和加力強度為6%。給予拉力后17-βE2繼續(xù)分別培養(yǎng)24小時,不加力及不加藥組為對照組。4.實時熒光定量PCR(RT-PCR)分別提取每組細胞的m RNA,進行RT-PCR測定,記錄觀察指標中每組的表達結(jié)果及電泳照相。結(jié)果:1.細胞培養(yǎng)情況體外行骨骼肌間組織原代培養(yǎng)成纖維細胞成功后,將所培養(yǎng)的細胞按照一定比例進行細胞傳代。對原代培養(yǎng)出來的細胞進行免疫組化鑒定,結(jié)果顯示波形蛋白呈陽性反應,角蛋白呈陰性反應為成纖維細胞。2.機械拉伸在拉力時間為36小時和拉力強度為6%的特定條件下,觀察所培養(yǎng)的細胞損傷性變化越來越明顯。3.RT-PCR法檢測結(jié)果示:加力強度為6%及加力時間為36小時與對照組比,成纖維細胞中MMP-9m RNA表達量為2.69±0.02,高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。TIMP-1及β-catenin m-RNA的相對表達量分別為0.37±0.01、0.43±0.01,低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義。加力強度為6%及時間為36小時在17-βE2干預下,成纖維細胞MMP-9m RNA相對表達量為1.52±0.07,高于對照組,低于加力組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),TIMP-1及β-catenin m RNA的相對表達量為0.60±0.01、0.63±0.01,低于對照組,高于加力組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:本實驗研究發(fā)現(xiàn)成纖維細胞受到機械拉伸后,在特定的加力條件下,加力強度為6%及時間為36小時的條件下,成纖維細胞損傷性變化特別明顯。熒光實時定量PCR檢測拉力組MMP-9 m RNA表達量增加,TIMP-1及β-catenin m RNA表達量下降,使得I型膠原含量減少。而17-βE2干預后,使得拉力組應力表現(xiàn)減弱,從而證明雌激素對盆底功能障礙性疾病具有保護作用。通過對成纖維細胞生物力學的研究,有助于揭示肛提肌組織不同程度的損傷在盆腔器官脫垂的發(fā)病機制。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R711

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 蔣勵;苗婭莉;張立芳;張曉紅;王建六;魏麗惠;;盆腔器官脫垂患者陰道壁成纖維細胞受力后變化特征初步研究[J];中國婦產(chǎn)科臨床雜志;2010年01期

2 宋巖峰;女性壓力性尿失禁的流行病學[J];實用婦產(chǎn)科雜志;2003年02期

3 ;Relationship between resistin level in serum and acute coronary syndrome or stable angina pectoris[J];Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal);2007年12期

4 曾曉琴;廣州市芳村區(qū)1995—2002年婦女生殖道健康狀況分析[J];中國初級衛(wèi)生保健;2003年02期

5 朱蘭,郎景和,馮瑞娥,陳杰;絕經(jīng)后壓力性尿失禁患者盆底支持結(jié)構(gòu)雌激素受體的研究[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2004年10期

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本文編號：1174958